洛拉曲克对人大肠癌LoVo细胞胸苷酸合酶水平及细胞增殖的影响

目的：研究洛拉曲克体外对人大肠癌LoVo细胞胸苷酸合酶（TS）水平动态变化以及对细胞增殖的影响。方法：采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测不同浓度的洛拉曲克对LoVo细胞抑制率的影响,RT-PCR和Wes tern blot法检测TS基因和蛋白的表达变化,流式细胞术检测细胞凋亡率的变化。结果：洛拉曲克对LoVo细胞有明显的抑制作用,其IC50值约为6.31μmol/L;并可促进细胞凋亡,凋亡率随作用时间的延长而增加。RT-PCR结果显示,在mRNA水平,相同剂量洛拉曲克处理细胞后,随着时间的延长,TS/GAPDH比值与对照组相比,有持续升高的趋势,但是只有48 h和60 h相对于未处理组差异有统计学意义。相同剂量的洛拉曲克处理细胞后,随着时间的延长,其TS蛋白的表达水平亦有持续升高的趋势。结论：洛拉曲克可以明显促进大肠癌细胞的凋亡并可产生TS诱导现象,术后以此可以更好地指导临床用药。     

RNA干扰和洛拉曲克对结直肠癌LOVO细胞胸苷酸合成酶表达及细胞增殖的影响

目的探讨下调胸苷酸合成酶（Ts）基因以及化疗药洛拉曲克对人结直肠癌LOVO细胞胸苷酸合成酶表达水平以及对细胞生长、凋亡的影响。方法构建针对人Ts基因的小分子干扰RNA（siRNA）和阴性对照,转染至LOVO细胞,利用RT—PCR和Westernblot技术观察沉默TS基因后其基因和蛋白表达水平的变化,MTF法检测细胞增殖情况;另联合洛拉曲克作用于LOVO细胞,观察两者对LOVO细胞的TS蛋白表达和细胞生长的影响。结果转染TSsiRNA后,LOVO细胞TSmRNA及蛋白的表达水平明显低于阴性对照组,细胞增殖速度亦低于对照组（均P〈0．05）。TSsiRNA联合洛拉曲克组细胞IC50值为（1．46±0．25）μm01／L,而阴性对照组和单用洛拉曲克组的IC50值分别为（6．81±0．31）μmol／L和（6．47±0．43）μmol／L。TSsiRNA联合洛拉曲克作用于细胞36h后。细胞凋亡指数为（62．12±0．89）％,高于单用TSsiRNA和洛拉曲克[（21．56±0．67）％和（40．51±0．83）％．均P〈0．05]。结论TSsiRNA可以下调人LOVO细胞中TS基因和蛋白的表达,使细胞生长速度减慢,凋亡增加,并可以增强洛拉曲克的药物敏感性。     

强化精氨酸的肠内营养制剂对肝癌患者免疫功能的影响

肝癌患者常合并不同程度的免疫功能低下 ,手术创伤又可使其免疫状况进一步恶化 ,术后应用免疫增强剂将提高患者的抗肿瘤能力。我们对部分行肝癌切除术的患者术后给予强化精氨酸的肠内营养制剂 ,并对其免疫指标进行了观察。现报告如下。1　资料与方法2 0 0 0年 3月至 2 0 0 2年 1 0月 ,在我院行肝癌切除术的肝癌患者共 41例 ,男 2 6例、女 1 5例 ,年龄 (5 1 .7±1 0 .4)岁 ,随机分为强化精氨酸 (Arg)的肠内营养组 (Arg+EN组 ) 2 0例、肠内营养组 (EN组 ) 1 1例、对照组 1 0例。对照组术后初期禁饮食 ,完全静脉补液 ,待排气后逐步进食 ;EN…     

改良生物补片重建盆底腹膜在腹腔镜Miles手术中应用的临床研究

目的探讨改良生物补片重建盆底腹膜(modified biological patch for reconstruction of pelvic floor peritoneum, MBR)用于腹腔镜Miles手术的安全性和临床效果。方法回顾性分析2015年1月至2018年12月在山东省立医院胃肠外科接受腹腔镜Miles手术的343例低位直肠癌病人的临床资料。按纳入和排除标准,303例病人纳入研究,根据是否行MBR,将病人分为MBR组(47例)和未重建(Non-MBR)组(256例)。研究中使用的生物补片取材于牛心包组织,是一种交联脱细胞基质材料。比较两组的术中和术后结果,并介绍MBR方法和安全性。结果与Non-MBR组相比,MBR组术后粘连性小肠梗阻(adhesive small bowel obstruction,ASBO)的发生率降低(0比10.9%,P<0.05),术后因ASBO的再次住院率降低(0比9.8%,P<0.05)。Non-MBR组术后因ASBO平均再次住院次数为1.8次。MBR组重建盆底腹膜时间为(3.3±0.8) min,该组病人随访1年未出现生物补片排...     

腹壁切口疝修补术后常见并发症的原因及治疗对策

腹壁切口疝是腹部外科手术后常见的并发症之一,发病率为2%～11%~([1]).患者常伴肠梗阻症状、腹腔内容物突出,严重影响患者的日常生活,腹腔内容物嵌顿绞窄后会发生肠坏死甚至危及生命.     

靶向ING1基因的miR-622真核表达载体在胃癌细胞MKN-45中的鉴定及其功能

目的:研究构建靶向ING1基因的miR-622真核表达载体并验证其转染人胃癌细胞株MKN-45细胞后对ING1基因的干扰效果及其功能.方法:将外源性重组真核表达载体pSuper/miR-622转染到人胃癌细胞株MKN-45内,经G418筛选并建立高表达miR-622的稳定转染胃癌细胞株.稳定表达该miR-622的胃癌细...     

胃癌中靶向E2F1基因的miR-331真核表达载体的构建及功能

目的:研究构建靶向E2F1基因的miR-331真核表达载体,评估其转染人胃癌细胞株SGC-7901细胞后对E2F1基因的干扰效果及其功能,探讨miR-331在胃癌中可能的作用机制.方法:将外源性重组真核表达载体pSuper/miR-331转染到人胃癌细胞株SGC-7901内,经G418筛选并建立高表达miR-331的稳...     

两种人大肠癌多药耐药株的建立及耐药性比较

目的比较递增药物质量浓度持续作用、恒定药物质量浓度周期作用两种方法建立的人大肠癌多药耐药细胞株的耐药性。方法用递增药物质量浓度持续作用、恒定药物质量浓度周期作用方式分别建立人大肠癌5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil,5-Fu)多药耐药细胞亚系L2和L3,MTT检测两种细胞株的耐药指数,流式细胞术检测细胞周期、细胞凋亡率,实时荧光定量PCR检测多药耐药(multidrug resistance,MDR)基因mRNA表达,Western blot检测p-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)的表达。结果递增药物质量浓度持续作用法诱导8个月后,细胞可以在含2.5μg/mL 5-Fu的培养液中正常生长,对5-Fu的耐药指数为26.53,对该细胞亚系命名为L2;以含2.5μg/mL 5-Fu的培养液进行筛选,6个月后细胞能稳定生长,所得细胞亚系命名为L3,其对5-Fu的耐药指数为13.78。与L2相比,G1期细胞数量较少,细胞凋亡较多,MDR1 mRNA转录水平和P-gp表达相对较低。结论大肠癌LOVO细胞株经递增药物质量浓度持续作用、恒定药物质量浓度周期作用两种诱导方式作用后,成功建立的人大肠癌5-Fu多药耐药细胞亚系L2和L3均可产生MDR;其耐药机制可能与MDR1 mRNA和P-gp的过表达有关。两种方法建立的肿瘤多药耐药模型在耐药性上有一定差异。     

siRNA沉默胃癌SGC-7901细胞HO1基因的细胞系的建立及其生物学行为

目的 构建HO1基因的真核干扰表达载体,评估其转染人胃癌细胞系SGC-7901细胞后对HO1基因的干扰效果及其功能.方法 将外源性重组真核干扰表达载体HO1基因(pS/HO1)转染到人胃癌细胞系SGC-7901内,经G418筛选并建立siRNA表达载体稳定沉默胃癌SGC-7901细胞HO1基因的细胞系,分为SGC-7901-pS/HO1组,转染空质粒细胞(SGC-7901-pS)组和未处理细胞(SGC-7901)组;用实时荧光定量PCR和蛋白印迹验证HO1基因在各组细胞中的表达,并通过CCK-8和克隆形成实验分别观察HO1基因被干扰后细胞的生物学行为.结果 与SGC-7901-pS组相比,SGC-7901-pS/HO1细胞中HO1基因蛋白表达明显减少,降低了5.58倍(0.321±0.051 vs 1.675±0.153,P＜0.05);与对照组相比较,SGC-7901-pS/HO1实验组较SGC-7901-pS对照组细胞增殖数量明显减少(P＜0.001);与转染pS空载体的SGC-7901-pS细胞对照组相比,SGC-7901-pS/HO1细胞的克隆形成明显减少,降低了3.45倍(8.32±1.142 vs 2.32 ±0.362,P＜0.05).结论 HO1基因真核siRNA表达载体筛选成功,为继续深入的研究HO1基因在胃癌中的功能提供了依据.     

直肠癌P27基因表达及血清转化生长因子β1水平的变化

目的 探讨直肠癌中p27的表达和血清转化生长因子β1(TGF-β1)的水平。以及TGF-β1对p27的调控关系。方法 对37例直肠癌、22例直肠腺瘤和19例正常对照者用免疫组化二步法检测其p27的表达情况。用酶联免疫吸附法(ELISA)测定血清TGF-β1水平。结果 p27在正常直肠组织和直肠腺瘤组织中呈高表达。其表达阳性率分别为89．47％和90．91％，阳性表达定位于细胞核；直肠癌组织中p27表达阳性率降为64．87％，与前两者比较，差异有统计学意义(P=0．025)，且伴有p27细胞浆表达者占45．83％。血清TGF-β1在正常对照组的表达阳性率为21．05％，直肠腺瘤组为27．27％，而直肠癌组则升至51．35％(P=0．045)。p27的表达与直肠癌的分化程度、淋巴结转移和浸润深度有关；血清TGF-β1表达水平与直肠癌的淋巴结转移、浸润深度和CEA水平有关。血清TGF-β1阴性组中p27表达阳性率为88．89％，血清TGF-β1阳性组中p27表达阳性率降为42．11％。差异有显著性意义(Mantel-Haenszel χ^2=6．755，P=0．009)。结论 p27对于判断直肠癌的恶性程度和预后有指导作用，血清TGF-β1可作为直肠癌的辅助诊断指标，TGF-β1可下调直肠癌中p27的蛋白表达。