α-粒子诱发人BEP2D恶性转化细胞的亚克隆及DNA链断裂修复研究

目的:建立α-粒子诱发人支气管上皮细胞(BEP2D)恶性转化细胞的克隆细胞系,研究其核型和DNA链断裂修复能力.方法:1.5 Gy α-粒子照射的BEP2D细胞传35代后接种裸鼠成瘤,取出瘤细胞进行亚克隆,挑出单个克隆扩大培养,G带显示分析细胞核型,脉冲电场凝胶电泳法检测DNA双链断裂.结果:亚克隆了5个恶性转化细胞系(RP35T-1,-2,-4,-5,-6),核型基本与BEP2D细胞相近,但有着不同的染色体缺失,其中2株细胞(RP35T-2和RP35T-4)多倍体高达40%,明显高于BEP2D细胞.恶性转化细胞RP35T-1和RP35T-4的DNA双链断裂重接修复缺陷.结论:建立了α-粒子诱发人BEP2D恶性转化细胞的克隆细胞系,DNA链断裂修复缺陷可能是α-粒子致癌的一个重要特点.     

转录因子Sp1对肺癌细胞LKB1-VEGF通路调控作用研究

目的:通过构建LKB1基因获得性肺癌细胞模型,了解转录因子Sp1对LKB1-血管内皮生长因子(VEGF)通路的调控作用.方法:应用巢式PCR(nPCR)方法扩增LKB1基因编码区,构建LKB1真核表达载体;Western 印迹检测LKB1在A549细胞中的表达;siRNA技术干扰Sp1的表达;RT-PCR联合ELISA方法检测VEGF的变化;SEAP检测系统检测Sp1的转录活性.结果:成功构建LKB1基因稳定表达细胞模型;LKB1蛋白下调VEGF表达和Sp1转录活性;siRNA介导的Sp1沉默伴随VEGF表达下调.结论:转录因子Sp1参与LKB1基因对VEGF的表达调控.     

γ射线照射对IER5基因mRNA表达的影响

目的 应用实时PCR技术分析⁶⁰Co γ射线照射正常人淋巴母细胞(AHH1)、宫颈癌细胞(HeLa)与接种人肿瘤细胞的裸鼠后IER5基因表达的影响。方法 对于离体培养的AHH1 、HeLa与BALB/c-nu裸鼠,按照不同剂量(0.5、2、4、6、10、15 Gy)与照射后不同时间点(2、4、8、12、24 h)进行分组进行提取mRNA、反转录与IER5基因表达量测试。结果 在相同条件下AHH1对照射比HeLa更灵敏,其表达量的峰值对应的剂量比HeLa的要低。对于AHH1细胞,对2 Gy低剂量的照射反应比10 Gy的高剂量反应要快,而HeLa细胞,对于2 Gy的低剂量与10 Gy的高剂量的照射反应没有太大差异,在照射后2 h都出现基因表达的最大值。此外,人肝肿瘤的IER5基因对照射比较敏感,而人肺与脑肿瘤的IER5基因不敏感。结论 IER5基因有可能成为宫颈癌与肝肿瘤新的辐射损伤生物分子的一个标记物,对肝肿瘤放疗具有潜在的应用价值。     

HIV-1 Tat 蛋白对细胞周期相关基因表达及辐射细胞周期阻滞的影响

目的：探讨HIV-1 Tat蛋白对细胞周期相关基因表达以及电离辐射诱发细胞周期阻滞的影响.方法：使用包含102个与DNA损伤修复和细胞周期相关的基因微阵列检测人横纹肌肉瘤细胞（TE671）及已转染tat基因的TE671细胞（TT2）基因表达谱的改变;使用流式细胞仪检测细胞周期变化;Western印迹检测蛋白表达变化.结果：在基因芯片的检测中发现,与DNA损伤修复及细胞周期调控相关的6个基因Cdc25C,KIF2C,Cdc20,DNA-PKcs,CTS1,Wee1在转染tat基因的细胞中表达下调;细胞周期检测发现TE671细胞和TT2细胞经4 Gy γ射线照射后表现出不同程度的G2/M期阻滞,但表达Tat的TT2细胞G2/M阻滞出现较TE671细胞晚,而在照射后48 h时TE671细胞G2/M期阻滞已恢复,但TT2细胞阻滞仍很显著.另外,TT2细胞S期阻滞时间延长.研究进一步发现细胞周期蛋白（cyclin）B1在TT2细胞中表达增强.结论：HIV-1Tat蛋白导致G2/M检验点功能紊乱,将影响细胞的辐射敏感性,本研究为了解AIDS合并肿瘤患者对放射治疗敏感性提供了重要实验数据.     

非克隆cDNA文库与RACE技术克隆小剂量辐射诱导新基因RIG1

目的：在获得了低剂量辐射诱导新基因RIG1EST片段的基础上,简便、有效地获得其全长cDNA,进行下一步的基因功能研究。方法：结合应用非克隆cDNA文库技术及7增强RACE技术,设计了巢式RACE PCR、生物素磁性分离、生物素标记探针杂交,再次磁性分离的纯化流程,结果：成功地克隆到RIG1EST片段3′端约1kb的序列,该序列3′端具有明显的polyA加尾信号,有编码区的终止密码子。进一步的分析明确了RIG1EST的正、负链及其蛋白编码方法。为RIG1 5′端的克隆提供了大量可靠的信息,目前RIG1 5′端的克隆已得到很好的进展。结论：所得结果与我们的设计完全一致,说明这一技术路线是简单可行的,为下一步研究RIG1基因在细胞辐射应激反应中的功能及被辐射诱导表达的调控模式奠定了基础。     

辐射诱导基因的寻找及功能研究

辐射诱导基因的启动与表达引起细胞辐射反应 ,若ＤＮＡ损伤后 ,细胞中的感应分子作用于辐射诱导基因或其产物 ,从而进行周期调控 ,启动损伤修复或细胞凋亡。对辐射诱导基因的研究 ,有利于揭示细胞辐射反应的分子生物学机理 ,对细胞增殖、周期调控、癌变等的研究也提供了新的途径。随着人类基因组计划的日趋完成和蛋白组计划的提出和蓬勃兴起 ,在辐射诱导新基因的寻找、定位及其功能研究方面涌现出了许多新技术、新方法。本文作者对近年来的一些方法和技术作一综述。一、辐射诱导基因的寻找与识别1 以差异显示为基础的方法 :有ＤＤＲＴ ＰＣ…     

ERK1/2-Sp1信号通路对肺癌细胞VEGF的调控作用

背景与目的:了解ERK1/2-Sp1信号通路对肺癌细胞血管内皮生长因子(VEGF)基因的调控作用.材料与方法:采用激酶特异抑制剂PD98059抑制ERK1/2的活性,Western blot检测ERK1/2的表达.RNA干扰技术沉默Sp1基因,Mercury信号通路系统检测Sp1的转录活性.RT-PCR检测VEGF和Sp1基因的变化. 结果:ERK1/2激酶的活性几乎可被150μmol/L PD98059完全抑制,ERK1/2激酶活性下调伴随VEGF的表达下降.PD98059下调Sp1转录因子的活性.Sp1基因沉默后VEGF的表达量下调. 结论:在肺癌细胞中存在ERK1/2-Sp1-VEGF信号通路,ERK1/2激酶调控VEGF的表达可能部分依赖于转录因子Sp1的活性.     

Preclinical trials of human erythrocyte superoxide dismutase injection

Objective To assess the quality of human erythrocyte superoxide dismutase (SOD) injection reaching the official standard for its clinical uses. Methods Human erythrocyte SOD injection prepared by McCord-Fridovich’s method without column chromatography but with some modifications was used in preclinical trials, to observe the general pharmacology and pharmacodynamics of the product. Results The quality of human erythrocyte SOD injection conformed to the official standard of a biological product, which was found to be non-toxic and did not have any effects on the central and autonomic nervous systems as well as cardiovascular and respiratory systems. The efficacy of anti-inflammation and promotion of immuno-regulation especially on carrageenan and adjuvant-induced polyarthritis were shown in animals. Conclusion Human erythrocyte SOD injection is appropriate for prophylactic and therapeutic uses in clinical trials.