α粒子诱发BEP2D细胞癌变株中多种基因启动子的异常甲基化

目的：研究α-粒子诱发人支气管上皮细胞癌变株中p14^ARF，p16^INK4a，MGMT，GSTP1，BUB3和DAPK基因的甲基化情况。方法：用甲基特异性的PCR(MSP)分析基因启动子区CpG岛的甲基化情况和用RT-PCR检测细胞的基因转录水平。结果：p14^ARF基因在BEP2D细胞中没有甲基化，但在其癌变细胞BERP35T1中发生了甲基化，且甲基化导致p14^ARF基因的转录水平显著下降。p16^INK4a和BUB3在两种细胞中均没有发生甲基化，BUB3经测序证实；MGMT在BEP2D细胞和癌变细胞中均发生甲基化；DAPK在BEP2D细胞中已有部分甲基化，在BERP35T1细胞中完全甲基化；GSTP1在BEP2D细胞中没有甲基化，在BERP35T1细胞中发生部分甲基化。结论：在辐射诱发人支气管上皮细胞恶性转化中，部分与细胞增殖、DNA修复和细胞凋亡相关的功能基因发生了甲基化。     

α-粒子诱发人BEP2D恶性转化细胞的亚克隆及DNA链断裂修复研究

目的:建立α-粒子诱发人支气管上皮细胞(BEP2D)恶性转化细胞的克隆细胞系,研究其核型和DNA链断裂修复能力.方法:1.5 Gy α-粒子照射的BEP2D细胞传35代后接种裸鼠成瘤,取出瘤细胞进行亚克隆,挑出单个克隆扩大培养,G带显示分析细胞核型,脉冲电场凝胶电泳法检测DNA双链断裂.结果:亚克隆了5个恶性转化细胞系(RP35T-1,-2,-4,-5,-6),核型基本与BEP2D细胞相近,但有着不同的染色体缺失,其中2株细胞(RP35T-2和RP35T-4)多倍体高达40%,明显高于BEP2D细胞.恶性转化细胞RP35T-1和RP35T-4的DNA双链断裂重接修复缺陷.结论:建立了α-粒子诱发人BEP2D恶性转化细胞的克隆细胞系,DNA链断裂修复缺陷可能是α-粒子致癌的一个重要特点.     

siRNA抑制DNA-PKcs表达及对HeLa细胞增殖的影响

背景与目的：建立抑制DNA-PKcs表达的细胞模型,以此探讨DNA-PKcs的功能。材料与方法：构建DNA-PKcs的siRNA抑制表达载体,利用Lipofectamine介导,转染HeLa细胞,筛选稳定表达的转化克隆。Western blot检测DNA-PKcs表达。通过细胞生长速度检测细胞辐射敏感性变化。结果：设计了作用于DNA-PKcs不同位点的3条siRNA,并构建表达质粒,转染HeLa细胞,获得了3个稳定转化克隆,Western blot分析表明其DNA-PKcs表达受到明显抑制,细胞对了射线和紫外线的敏感性增加,接种裸鼠后的肿瘤生长速度减慢。结论：成功建立了DNA-PKcs表达抑制细胞模型,并且发现DNA-PKcs表达抑制后除影响细胞的辐射敏感性外,还可能与肿瘤细胞增殖有关。     

EGFR反义重组腺病毒治疗乳腺癌的实验研究

目的:探讨表皮生长因子受体(EGFR)反义重组腺病毒AdE5对乳腺癌细胞移植瘤的作用。方法:人乳腺癌细胞MDA-MB-231接种于裸鼠右侧背部皮下形成肿瘤后,以AdE5、空病毒载体AdCO1瘤内注射,每只109pfu/100μl。共注射2次。定期测量肿瘤体积,计算相对生长率。肿瘤组织HE染色后做组织学观察,以免疫组化分析K i-67表达。结果:AdE5瘤内注射可抑制肿瘤生长(相对生长率<1)。组织学研究显示肿瘤内坏死明显,免疫组化分析发现AdE5治疗后肿瘤K i-67指数显著低于AdCO1及PBS组。结论:以腺病毒载体介导的EGFR反义RNA转导可有效地抑制乳腺癌细胞的在体肿瘤生长。     

α粒子诱发人支气管上皮细胞BEP2D癌变克隆的细胞遗传学分析

目的 :分析α_粒子诱发人支气管上皮细胞BEP2D恶性转化细胞克隆的核型 ,探讨辐射致癌的细胞遗传学变化规律。方法 :1.5Gyα粒子照射BEP2D细胞恶性转化后进行亚克隆 ,用G带显示法分析亚克隆细胞核型。结果 :分析了 5个恶性转化亚克隆细胞 (BERP35T_1,_2 ,_4 ,_5 ,_6 ) ,基本核型与亲本细胞BEP2D相近 ,但有着明显的染色体缺失差异。BERP35T癌变细胞系缺失 1条 13号染色体和Y染色体 ;1条 2号染色体的长臂增加 ;缺失正常的12号染色体 ,出现 1条长臂增加的 12号染色体。此外 ,2株癌变细胞 (BERP35T_2和BERP35T_4 )多倍体高达 4 0 % ,明显高于BEP2D细胞。结论 :染色体缺失 (尤其是 13号染色体缺失 )是辐射致癌的一个显著遗传学特点 ,2号和 12号染色体长臂增加可能导致某些肿瘤相关基因的扩增或激活 ,促进细胞的恶性转化。     

DEPLETION OF O~6-METHYLGUANINE-DNA METHYLTRANSFERASE ACTIVITY AND POTENTIATION OF 1-(4-AMINO-2-METHYL-5- PYRIMIDINYL) METHYL-3 (2-CHLOROETHYL)-3-NITRO- SOUREA ANTITUMOR EFFECT BY STREPTOZOTOCIN

O6-methylguanine-DNA Methyltransferase (MGMT) can specifically repair the DNA demage Induced by chioroethylnitrosoureas (CENU) such at 1-(4-amino-2-methyt-pyrlmidinyl) methyl-3-(2-chloroethyl-)-3-nitrosourea (ACNU), constituting the molecular basis of tumor cell resistance to CENU. The present study demonstrated that sensitization of resistant tumor cells to ACNU could be achieved by streptozotocin (STZ) treatment which could deplete MGMT activity in vitro and in vivo. It suggested that depletion of the molecular basis of tumor cell resistance to chemotherapeutic agents might be a practicable way to improve the effectiveness of tumor chemotherapy.     

沉默hHBrk1基因对肺癌细胞增殖及迁移能力的影响

目的：研究玉米Brick1的人类同源基因hHBrk1（human homology of Brick1）对肿瘤细胞增殖及迁移能力的影响。方法：用质粒介导的siRNA（small interfering RNA）技术建立hHBrk1基因表达沉默的肺癌细胞模型；用细胞生长曲线、克隆形成率实验及流式细胞术分别比较不同处理的95D细胞增殖及细胞周期的变化；用Transwell细胞侵袭实验系统研究hHBrk1表达沉默对肺癌细胞迁移能力的影响。结果：成功筛选出hHBrk1基因表达抑制的细胞模型；hHBrk1表达沉默细胞增殖能力和细胞周期与对照组相比无明显改变，但hHBrk1表达沉默细胞迁移能力明显减弱。结论：hHBrk1可能参与调控肺癌细胞迁移能力。     

DNA依赖蛋白激酶在人支气管上皮细胞癌变株和肺癌组织中的异常表达

目的:探讨辐射诱发人支气管上皮细胞癌变株和肺癌组织中DNA依赖蛋白激酶(DNA dependent protein kinase, DNA-PK)的激酶活性或表达变化。方法:用Western blot和p53蛋白为特异性底物的磷酸化反应分别检测癌变细胞中DNA-PKcs表达和激酶活性,用免疫组化结合病理图像定量分析技术检测肺癌组织和癌旁组织中DNA-PKcs蛋白的表达情况。结果:a粒子辐射诱发的人支气管上皮细胞癌变株BERP35T-1的DNA-PKcs表达水平比亲本细胞BEP2D提高30%,激酶活性显著提高。所检测的14例非小细胞肺癌组织中DNA-PKcs蛋白表达水平普遍高于相对应的癌旁组织,两组之间有显著性差异(P < 0.05)。结论:非小细胞肺癌组织中DNA-PKcs表达增加,可能成为肺癌的一个生物标记物。     

Preclinical trials of human erythrocyte superoxide dismutase injection

Objective To assess the quality of human erythrocyte superoxide dismutase (SOD) injection reaching the official standard for its clinical uses. Methods Human erythrocyte SOD injection prepared by McCord-Fridovich’s method without column chromatography but with some modifications was used in preclinical trials, to observe the general pharmacology and pharmacodynamics of the product. Results The quality of human erythrocyte SOD injection conformed to the official standard of a biological product, which was found to be non-toxic and did not have any effects on the central and autonomic nervous systems as well as cardiovascular and respiratory systems. The efficacy of anti-inflammation and promotion of immuno-regulation especially on carrageenan and adjuvant-induced polyarthritis were shown in animals. Conclusion Human erythrocyte SOD injection is appropriate for prophylactic and therapeutic uses in clinical trials.     

2Gy和10Gyγ射线照射正常人淋巴母细胞基因表达转录谱的比较

目的 了解中等剂量和大剂量辐照对基因表达影响的差异性，以此探讨不同剂量γ射线生物学效应的分子基础。方法 正常人淋巴母细胞经2和10Gy^60Coγ射线照射后培养4h（未照射为对照组）。用包含有14022个基因的人类cDNA芯片分析基因转录谱，每个剂量点重复一次芯片检测，照射组与对照组细胞的差异表达基因表达量比值大于2或小于0．5，并且2次检测结果一致的基因点为有效差异表达基因。结果 2Gy照射后共有32个基因表达下凋，46个基因表达上调；10Gy照射后共有219个基因表达水平下降，26个基因表达水平上升，在两个剂量照射条件下都表达下调的基因至少有11个，同时上调的基因有9个，这些基因大多与细胞信号转导、细胞周期调控、DNA损伤修复、细胞凋亡等相关。结论 观察到中等剂量和大剂量辐照的相同诱导表达变化基因，10Gy剂量照射使大量的基因表达抑制，将导致细胞多方面的生理功能障碍。