再生障碍性贫血若干问题的探讨

再生障碍性贫血(简称再障)过去被视为是一独立性疾病。随着认识的深入,现在多认为该病是由多种不同原因引起的骨髓造血功能衰竭综合征,其发病与造血干细胞衰竭、造血微环境损害或免疫功能异常等有关。随着对再障概念的更新,自然会提出一个疑     

骨髓移植的新进展

1引言骨髓移植是血液恶性肿瘤的有效根治方法之一。近年来,随着移植技术的完善与成熟,骨髓移植的应用范围及应用前景在不断扩大。除血液肿瘤外,骨髓移植已开始应用于自身免疫性疾病及其它难治性血液病的治疗。同时非清髓性移植技术在近几年也有长足的进步。2骨髓移植治疗自身免疫性疾病自身免疫性疾病是由于免疫系统丧失了对自身组织(抗原)的耐受性,以致其淋巴细胞对自身组织出现免疫反应并导致组织损伤的一组疾病。因这类疾病是免疫系统的紊乱所致,故临床上以肾上腺皮质激素(激素)及免疫抑制药为常规治疗手段。然而,激素及免疫抑制药的长期…     

23例淋巴细胞白血病单克隆抗体免疫分型观察

本文用抗人白血病分化抗原的单克隆抗体,结合E-玫瑰花结试验及SmIg测定,对23例淋巴细胞白血病进行免疫分型。23例中普通型占19例。结果表明其临床预后较其它型好。     

血管通路方式的选择对健康供者外周血造血干细胞单采产量影响的研究

目的 探讨不同的血管通路方式对健康供者外周血造血干细胞(peripheral blood stem cell,PBSC)单采产量的影响.方法 对2000年1月-2007年12月进行PBSC单采的118例健康供者根据2条血管通路方式组合不同分为4组.观察各组PBSC采集的产量,包括单个核细胞数(MNC)及CD34+细胞数. 结果 每例PBSC的产量分别为:肘静脉-肘静脉组MNC(5.31±2.29)×108/kg,CD34+细胞数(4.78±2.06)×106/kg;肘静脉-前臂静脉组MNC(5.11±2.34)×108/kg,CD34+细胞数(4.34±1.99)×106/kg;前臂静脉-前臂静脉组MNC(5.61±1.73)×108/kg,CD34+细胞数(4.60±1.42)×106/kg;肘静脉-桡静脉组MNC(4.60±×1.70)×108/kg,CD34+细胞数(4.05±1.50)×106/kg.4组的PBSC产量差异无统计学意义(P>0.05).结论 不同的血管通路方式不影响PBSC单采的产量.     

脐血浆刺激造血活性研究

目的　研究脐血浆刺激造血活性。方法　检测脐血浆的造血因子水平及其扩增外周造血干细胞 (PBSC)作用和刺激生成CFU GM、CFU Mix、BFU E作用。结果　① 33例脐血浆中 4例检测出GM CSF ,2 0例检测到IL 3和IL 6 ,33例检测到EPO ,各细胞因子之间不具相关性 ;②液体培养 6d后 ,脐血浆组有核细胞数为 (1.0 8± 0 .2 0 )× 10 6/ml,胎牛血清 (FCS)组为 (0 .72± 0 .0 5 )× 10 6/ml,脐血浆对体外培养维持PBSC活细胞数明显优于FCS(P <0 .0 5 ) ,但无明显扩增作用 (P >0 .0 5 ) ;甲基纤维素半固体培养PBSC 14d时 ,脐血浆组集落数为 (13± 11)× 10 5,而FCS组集落数为 0 ,二者比较有显著差别 (P <0 .0 1)。结论　脐血浆含有多种造血因子 ,其刺激造血活性与IL 3浓度成正相关 ,但与IL 6和EPO的相关性则较小。     

碱性成纤维细胞生长因子和转化生长因子β1诱导大鼠骨髓间质干细胞分化为心肌细胞的作用比较

目的:对比观察碱性成纤维细胞生长因子和转化生长因子β1促进大鼠骨髓间质干细胞分化为心肌细胞的作用。方法:实验于2005-12/2006-07在中山大学干细胞与组织工程中心实验室进行。实验材料:清洁级大鼠由中山大学实验动物中心提供(SCXR(粤)2004-0011,粤监证字2004A089),三四周,大约50g。实验方法:①分离培养大鼠骨髓间质干细胞,并采用流式细胞仪鉴定。②取第3代骨髓间质干细胞,以1×107L-1接种于24孔培养板和六孔板中,24h后换液并分组:对照组:仅仅更换培养液;5-氮胞苷诱导组:10μmol/L5-氮胞苷孵育24h后更换新鲜培养液;5-氮胞苷 碱性成纤维生长因子诱导组:10μmol/L5-氮胞苷孵育24h后更换含10μg/L碱性成纤维生长因子的新鲜培养液;5-氮胞苷 转化生长因子β1诱导组:10μmol/L5-氮胞苷孵育24h后更换含10μg/L转化生长因子β1的新鲜培养液。以后每3d换液1次,前2组换完全培养基,后2组分别换含10μg/L碱性成纤维生长因子和10μg/L转化生长因子β1的完全培养基。③30d后应用RT-PCR法检测心肌细胞转录因子GATA-4、结蛋白表达,免疫细胞化学染色法检测细胞心肌肌钙蛋白,并在倒置显微镜下观察细胞跳动情况。结果:①骨髓间质干细胞的生长特性及鉴定:原代培养大鼠骨髓质干细胞3d后镜下可见有细胞贴壁,形成克隆,七八天长满,随着换液和传代,细胞逐渐纯化,第3代细胞形成均一的长梭形,流式细胞仪检测发现CD44、CD29表达阳性,CD45、CD11b表达阴性。②骨髓间质干细胞向心肌细胞的分化:大鼠骨髓间质干细胞经5-氮胞苷、5-氮胞苷 碱性成纤维生长因子或5-氮胞苷 转化生长因子β1诱导30d后,有部分细胞心肌肌钙蛋白表达阳性,GATA-4和结蛋白表达明显增强。镜下观察5-氮胞苷 碱性成纤维生长因子诱导组所诱导细胞变细、胞体伸长,呈心肌样细胞跳动,并较其他两组明显,心肌肌钙蛋白阳性细胞的比率较高(P<0.05)。结论:碱性成纤维生长因子在体外有协同5-氮胞苷促进大鼠骨髓间质干细胞分化为心肌细胞的作用,而转化生长因子β1无此作用。     

脐带间充质干细胞治疗急性百草枯中毒致肺损伤临床观察

目的 探讨脐带间充质干细胞(umbilical cord mesenchymal stem cells,UMSC)治疗急性百草枯中毒致肺损伤的临床疗效和安全性.方法 将2008年12月至2011年12月广州市第12人民医院收治的13例急性百草枯中毒致肺损伤患者分为观察组(5例)及对照组(8例).所有患者均予常规治疗,观察组加用UMSC治疗.应用欧洲重症医学监护医学协会(ESICM)感染相关问题工作组制定的SOFA评分体系,结合我国急性生理学和长期健康评价Ⅱ(acute physiology and chronic health evaluation,APACHEⅡ)对患者进行病情序贯器官衰竭综合评分[SOFA(a)];同时行肺损伤评分(LIS)评价损伤程度.比较两组患者中毒后第1、3、5、7、14及15天后最大SOFA(a)的差异.结果 观察组患者中毒后第15天最大的SOFA(a)评分为(1.80±2.05),明显低于对照组(13.50±7.59),差异有统计学意义(P＜0.05);观察组治疗后LIS(0.45±0.27)比治疗前(1.15±0.34)明显下降,也明显低于对照组治疗后(2.94±1.20),差异均有统计学意义(P＜0.01).观察组5例患者均存活,复查无诉不适,肝、肾、肺等功能复查正常.肺部CT复查1例患者左下肺后段原病灶部分未完全吸收,其他患者均未见异常.对照组8例患者有1例存活,其余7例均死亡.观察组患者在接受UMSC治疗期间无出现寒战、发热等不良反应.结论 UMSC治疗急性百草枯中毒致肺损伤可能有一定临床应用价值.     

坎地沙坦阻断血管紧张素Ⅱ介导的原代急性髓样白血病细胞增殖的作用及机制

目的: 观察血管紧张素Ⅱ 1型受体(AT1R)拮抗剂坎地沙坦抑制血管紧张素Ⅱ(Ang Ⅱ)介导的原代急性髓样白血病(AML)细胞增殖的作用及机制。方法: MTT法观察Ang Ⅱ对原代AML细胞、正常骨髓单个核细胞增殖的影响以及坎地沙坦和AT2R拮抗剂 PD123319对AngII促原代AML细胞增殖的拮抗作用; Western blotting法观察坎地沙坦和PI3K抑制剂对原代AML细胞Akt磷酸化的影响。结果: AngII能剂量和时间依赖性促进原代AML细胞增殖(P<0.05),而对正常骨髓无此作用。坎地沙坦随浓度和时间依赖性阻断Ang II作用下白血病细胞增殖(P<0.05)。PI3K抑制剂可抑制Ang II促进原代AML细胞的增殖(P<0.05),坎地沙坦能明显下调Ang II增加原代AML细胞Akt的磷酸化水平(P<0.05)。结论: 坎地沙坦通过抑制PI3K/Akt信号转导途径抑制Ang II/AT1R介导的白血病细胞增殖。     

白血病的靶向治疗

难治性白血病的治疗策略主要是加强诱导、缓解、逆转白血病细胞的多药耐药性和针对白血病细胞特定表面分子或基因的靶向治疗,文章对白血病的靶向治疗现状及研究进展进行了综述。     

携带HGF基因的重组腺病毒表达载体的构建

目的 构建携带肝细胞生长因子HGF的重组腺病毒表达载体。为研究HGF的功能、作用机制及临床应用奠定基础。方法 以pcDNA3.0-HGF为模板,经PCR扩增得到HGF基因,将其插入到带有绿色荧光蛋白基因的穿梭载体pAdTrack-CMV-GFP中,得到重组质粒pAdTrack-CMV-HGF-GFP。将线性化的pAdTrack-CMV-HGF-GFP与pAdEasy-1质粒共转化BJ5183感受态细胞,进行同源重组,得到重组腺病毒质粒,经PacI线性化后,转染AD293细胞。结果 得到重组腺病毒,转染重组腺病毒DNA的AD293细胞经荧光显微镜能观察到AD293细胞内有绿色荧光,且出现细胞病变反应（cytopathic effects,CPE),对传代的Ad-HGF进行PCR分析证实得到目的基因,感染CHL细胞,通过western blotting分析HGF蛋白表达量,从而证实重组腺病毒载体构建成功。结论 腺病毒制备简便,成本低,周期短,毒性小,产量高,感染率及蛋白表达率高,成功构建Ad-HGF为进一步研究HGF并最终使其在临床应用中更为方便提供实验基础。