肿瘤坏死因子基因转导肿瘤浸润淋巴细胞的初步研究及应用

用单纯疤疹病毒(HSV)的缺陷株作为载体,感染肿瘤细胞治疗脑瘤的研究已取得了不少进展.本文报道将HSV—tk基因转移联合抗瘤药物GCV可使荷脑瘤大鼠长期存活.9L神经纤维肉瘤细胞用HSV载体hrR3转染,hrR3缺乏RNA还原酶,只能在肿瘤细胞中复制而不能在神经细胞中复制存活,同时还携带病毒胸苷激酶(tk)基因,RH105无tk基因,转染hrR3的9L细胞体外培养,加入GCV1μg/ml共孵育,结果发现9L细胞被杀死的数目比单纯感染hrR3的细胞死亡数目增加23%.GCV加到不表达tk基因的RH105载体转染的9L细胞体系中没有杀伤作用.将神经纤维肉瘤9L细胞4×10~4接种到Fischer 344CD大鼠脑前叶,5天后将hrR3载体2×10~7PFU/10μl直接定位注射至脑瘤部位.结果发现hrR3载体治疗可使20%的大鼠存活时间超过5个月,而生理盐水组全部死亡.接种病毒后同时用GCV7.5mg/kg治疗7天,可使48%的荷9T肿瘤细胞的大鼠存活时间超过5个月PH105感染的治疗组大鼠全部死亡,组织化学检查证明外源性的tk基因在肿瘤细     

PA317产生高滴度带有人TNF-α基因逆转录病毒的研究

逆转录病毒介导的基因转移技术要过渡到临床应用，主要解决如何使病毒载体具有高滴度而不具有复制活性．本文旨在探索建立一种合适的方法，能产生高滴度而且是安全的逆转录病毒载体。采用带有人肿瘤坏死因子基因的LXSN载体转染PA317包装细胞，建立产病毒的包装细胞株，结果表明：病毒载体滴度受包装培养液体积和胎牛血清浓度影响：包装细胞在32℃产生的病毒滴度比37℃高，而且比较稳定。产病毒包装细胞和被感染的靶细胞经PCR分析显示．被转染和被转导的细胞都有病毒基因的整合．而且包装细胞不会产生具有复制活性的逆转录病毒，因此能进一步用于临床研究．     

IL-2基因转导小鼠肝癌细胞的实验研究

将细胞因子基因导入肿瘤以制备能用于肿瘤治疗的新型瘤苗．是近几年来肿瘤免疫治疗和基因治疗研究的热门课题。该方法通过基因修饰以提高肿瘤细胞的免疫原性，可被机体免疫系统识别，同时由死亡肿瘤细胞产生的细胞因子，激活免疫效应细胞，以改变肿瘤局部的微环境，提高机体的抗肿瘤免疫功能，     

α-肿瘤坏死因子基因修饰人肝癌细胞经60Co辐射后细胞因子的持续分泌

α-肿瘤坏死因子(α-TNF)具有促肿瘤细胞自溶和增加肿瘤细胞的HLA抗原表达的作用,故将含信号肽的人α-TNFcDNA构建入可表达载体质粒pLXSN,体外包装成缺陷型逆转录病毒后感染人肝癌细胞株(HHCL),经筛选后得到HHCL-TNF细胞株。经不同强度的~(60)Co辐射后,测其24小时的TNF分泌量。观察~(60)Co辐射强度与TNF分泌量的关系及辐射后细胞存活期的差异。将上述辐射后细胞放入液氮冻存,复苏观察TNF分泌量的变化。经研究发现:(1)HHCL-TNF经过~(60)Co辐射后仍能持续分泌约四周,40～100G辐射强度间无显著差异;(2)HHCL-TNF细胞~(60)Co辐射后液氮冻存一段时间,复苏后仍能持续分泌TNF约三周。这些结果为进一步研究应用‘肿瘤疫苗’提供了一定的依据。     

腺病毒介导反义VEGF降低肿瘤诱导免疫抑制及增强IL-2的抗肿瘤效果

20 0 2年广东西医结合肿瘤学术年会暨全国肿瘤诊疗新技术研讨会由广东省中西医结合学会肿瘤专业委员会、广州抗癌协会生物治疗专业委员会和第一军医大学南方医院肿瘤中心联合举办。为国家和广东省学术活动Ｉ类会议 (将授予国家和广东省继续教育Ｉ类学分 )。这次会议将邀请国内 2 0多名著名专家报告肿瘤诊疗最新进展 ,交流各地在肿瘤防治研究中的新成果、新经验 ,提高我省和全国肿瘤防诊治水平 ,现将有关事项通知如下 :1.会议时间地点 :2 0 0 2年 8月 16～ 19日　广州市2 .专题报告主要内容 :(1)肿瘤综合治疗进展 ;(2 )造血干细胞“鸡尾酒疗…     

TORCH与优生：Ⅳ逆转录—聚合酶链反应检测风疹病毒的方法

风疹病毒是引起先天异常的主要病原体之一，研究风疹的目的，就是要早期诊断风疹感染，以减少先天缺陷儿的出生。本实验采用反转录—聚合酶链反应，扩增风疹病毒不同野生株基因组中的一段保守序列，从而达到直接捡测病原体的目的。实验用的引物经过基因库检索，与其它RNA病毒及病原体没有同源性。^33P标记探针与扩增产物的杂交试验证实．该引物扩增的产物是风疹病毒所特异的。实验表明，该体系能够检测到Pg水平的病毒RNA。因而RT——PCR作为一种灵敏度高、特异性强的风疹病毒检测方法。     

γ-干扰素基因修饰人肝癌细胞的体外生物学行为

目的　研究γ干扰素(IFNγ)基因修饰人肝癌细胞的某些体外生物学行为。　方法　用逆转录病毒载体建立4种γ干扰素基因修饰人肝癌细胞,分别检测外源基因表达、细胞形态结构、体外生长速率及60Co照射的影响。　结果　4种IFNγ基因修饰人肝癌细胞表达不同生物活性水平的IFNγ,体外生长速率有不同程度的下降。经60Co照射及冻存处理,复苏后仍能分泌较高水平的IFNγ。　结论　IFNγ基因修饰人肝癌细胞体外生物学行为有一定程度的变化,为瘤苗的临床应用提供了一定依据     

STUDIES OF HLA-D REGION DNA POLYMORPHISM IN INSULIN-DEPENDENT DIBETES MELLITUS

Restriction fragment length polymorphisms (RFLPs) of peripheral leucocyte DNA in insulin-dependent diabetes mellitus (IDDM) patients and in controls were studied with Southern blot analysis. IDDM has been reportedly associated positively with the HLA-DR3 and-DR4 in Caucasians, with the HLA-DR3 and-DR9 in Chinese, and negatively with the HLA-DR2 in both Caucasians and Chinese, Using an HLA-DQβcDNA probe, an EcoRI 2.2 kb fragment is found associated with DR2 controls (r = 0.78, P=1×10~(-6)), but not with DR2 IDDM patients, their respective frequencies being significantly different (P=0.02). The authors also report here their new findings that the frequencies of the EcoRI3.0 kb and BamHI3.3 kb fragments are both decreased in the patient group (P=0.0032 and P=0.0018 respectively). This suggested certain kinds of mutation such as partial deletion or others in the IDDM patients might have caused the RFLP pattern change as compared to the normal DNA. RFLPs may provide valuable information in searching for the genetic basis of IDDM.     

小鼠γ-干扰素基因修饰瘤苗的抗肿瘤研究

本实验用RT-PCR方法得到小鼠γ-干扰素(mIFN-γ)全长cDNA,通过逆转录病毒载体将其导入小鼠肝癌细胞株,比较研究了该株细胞在mIFN-γ基因修饰前后致瘤性的变化,并制备了瘤苗,对其分泌干扰素的能力及对荷瘤小鼠的治疗作用作了进一步的研究,发现经过mIFN-γ基因修饰后,肿瘤细胞的致瘤性明显降低且瘤苗对荷瘤小鼠有明显的治疗作用,这为进一步开展细胞因子基因治疗工作打下一定基础。     

人原发胃癌、裸鼠人胃癌移植瘤及人胃癌细胞株中β-葡萄糖醛酸酶及神经氨酸苷酸活力比较

β-葡萄糖醛酸酶(β-G)主要存在于溶酶体,细胞癌变时溶酶体增生肥大,β-G合成增加,水解蛋白多糖破坏间质,促进癌细胞浸润生长和转移。神经氨酸苷酶(NANase)是糖蛋白、糖脂代谢的重要酶,细胞癌变时,细胞膜糖蛋白、糖脂所结合的寡糖链结构和成份发生改变,NANase活力亦相应发生变化。胃癌患者体液和红细胞膜上β-G及NANase活力变化情况已有报道结果表明上述酶活力与胃癌癌变关系密切,本文对人胃癌组织、人胃癌移植瘤及人胃癌细胞株中酶活力的变化进行探讨。