灯盏细辛对急性冠状动脉综合征炎症因子的影响

灯盏细辛为菊科飞蓬属植物，含黄酮、内酯、挥发油、氨基酸等有效成分。基础和临床试验均证明其具有扩张心、脑血管，改善微循环，抗凝、降低血黏度，降低血小板聚集率，促进纤溶并有利于冠状动脉内血栓的清除，缓解心绞痛等作用。     

Canstatin基因表达载体的构建及其生物学效应研究

目的　构建可表达人血管生成抑制素 (canstatin)蛋白的真核表达载体 ,探索canstatin对人脐静脉内皮细胞系(HUVEC)和人肺腺癌A5 49细胞株的生物学效应。方法　RT PCR法从胎儿肝组织中获取canstatincDNA全长 ,并将其克隆到真核蛋白表达载体pCMV Script上。阳离子脂质体介导该重组载体转染HUVE细胞系、A5 49细胞株。RT PCR法检测其对canstatinmRNA的表达。台盼蓝拒染法活细胞记数 ,3 H TdR掺入法检测细胞增殖 ,TUNEL法检测细胞凋亡 ,流式细胞术检测细胞周期。结果　成功构建pCMV Script Cans真核表达重组载体 ,并在转染该表达载体的A5 49及HUV EC C细胞株中均检测到canstatinmRNA的表达。HUV EC C细胞株pCMV Script Cans载体转染组比空载体组 3 H TdR掺入量明显减低(P <0 0 1) ,细胞凋亡率明显增加 (P <0 0 1) ,A5 49细胞株转染组与空载体组 3 H TdR掺入量无显著差异 (P >0 0 5 ) ,细胞凋亡率无显著差别 (P >0 0 5 )。结论　pCMV Script Cans重组载体能在转染的哺乳动物细胞中表达canstatin ,并抑制内皮细胞增殖 ,诱导内皮细胞凋亡 ,但对肿瘤细胞没有直接抑制作用。     

一氧化氮调节脂多糖致炎大鼠肺泡巨噬细胞糖皮质激素受体功能的研究

目的研究肺泡巨噬细胞在脂多糖(LPS)作用条件下一氧化氮供体(SNP)对糖皮质激素受体(GR)功能的调节作用.方法将GR荧光表达质粒pGFP-GR转染大鼠肺泡巨噬细胞,经LPS和SNP作用后,荧光显微镜观察质粒表达产物GFP-GR核移位情况;相对荧光素酶法检测GR转录激活活性;EMSA检测检测细胞NF-κB活性.结果 500 μmol/L SNP作用2 h出现GFP-GR核移位,同时GR转录激活活性显著增强,NF-κB活性被显著抑制.运用GR特异性拮抗剂RU486后,NF-κB活性抑制现象消失.结论肺泡巨噬细胞在致炎因子作用条件下,一氧化氮供体(500 μmol/L SNP )通过活化GR发挥抗炎活性.     

大鼠γ-干扰素基因转染大鼠肺泡巨噬细胞和气道上皮细胞的实验研究

目的：构建重组大鼠γ－干扰素真核表达载体，探讨其转染大鼠肺泡巨噬细胞（AM）和气道上皮细胞的可行性及表达水平。方法：采用RT－PCR技术克隆了大鼠γ－干扰素，并将其定向克隆到逆转录病毒载体pLXSN上，构成真核表达重组载体，将重组载体转染培养的AM和气道上皮细胞，用PCR法鉴定重组载体整合在细胞基因组DNA中，并检测细胞培养上清中γ－干扰素浓度和活性。结果：DNA测序证明，构建的重组载体中γ－干扰素的基因方向正确，DNA序列与Gene Bank中大鼠的γ－干扰素cDNA序列相同，转染后AM和气道上皮细胞基因组DNA的PCR产物电泳可见转染的重组载体DNA片段条带，pLXSN-IFN载体组的AM和气道上皮细胞培养上清中大鼠γ－干扰素学和活性显著高于pLXSN空载体组（P＜0．01）结论：本研究构建的大鼠γ－干扰素重组表达载体可成功地转染大鼠AM和气道上皮细胞，整合入基因组DNA，并分泌有活性的γ－干扰素，为进一步的体内基因转染研究奠定基础。     

人糖皮质激素受体变异体cDNA序列克隆和表达及其活性研究

目的构建人糖皮质激素受体变异体表达载体,研究其表达和功能.方法运用RT-nested PCR扩增糖皮质激素受体不含有编码LBD(ligand binding domain)的cDNA序列,将PCR产物定向克隆至pEGFP-N2质粒载体,测序筛选重组质粒;荧光显微镜观察重组质粒转染表达情况;相对荧光素酶法检测GR转录激活活性.结果扩增出长1 601 bp的cDNA序列,测序证实:克隆片段与Genbank该基因序列同源性为100%;重组质粒表达产物定位于细胞核;转染组细胞转录激活活性增强.结论成功构建糖皮质激素受体变异体的表达载体,该变异体具有不依赖激素的转录激活活性.     

缺氧对大鼠肺动脉平滑肌细胞增殖的效应

本实验应用免疫组织化学染色 ,3H -TdR掺入 ,流式细胞仪检测技术探讨缺氧对大鼠肺动脉平滑肌细胞 (PSMC)增殖的影响。结果 :缺氧 12h其增殖细胞核抗原 (PCNA)阳性反应颗粒增加 ,2 4h明显增加 ,其含量是常氧组 2 .1倍。低氧 8h可使PSMC的3H -TdR摄取量减少 (P <0 .0 5 ) ,12h则促进其摄取 ,2 4h则明显较常氧对照组增多 (P <0 .0 5 )。流式细胞仪检测显示其G2 /M期细胞比例明显增多 (P <0 .0 1) ,G0 /G1 期细胞比例明显减少 (P <0 .0 1) ,细胞内总蛋白含量有所降低 (P <0 .0 1)。结论 :缺氧早期抑制或损害PSMC增殖 ,而后促使PSMC的表型改变 ,出现增殖 ,从一侧面证实缺氧可以直接促进PSMC增生。     

15个厂家盐酸二甲双胍片溶出度的比较

目的：比较15个厂家盐酸二甲双胍片的体外溶出度，为临床用药提供参考。方法：采用转篮法进行体外溶出度实验，以紫外分光光度法进行含量测定，计算累计溶出百分率。以威布尔方程拟合溶出参数，并用方差分析对组间溶出参数进行统计学分析。结果：15个厂家盐酸二甲双胍片的体外溶出度均符合《中国药典》2005年版的规定，但各厂家盐酸二甲双胍片的溶出参数m、T30、T50、Td和T80间存在显著性差异（P〈0．01）。结论：不同厂家盐酸二甲双胍片的溶出参数存在差异，临床用药时应加以注意。     

缺氧肺动脉高压大鼠肺组织中白细胞介素6和Janus激酶表达的变化

目的　研究缺氧肺动脉高压 (HPH)肺组织中白细胞介素 6(IL 6)及Janus激酶 (JAKs)表达的变化。方法　雄性Wistar大鼠 60只 ,随机分为缺氧 1周 (H1)、缺氧 2周 (H2 )、缺氧 3周 (H3)、缺氧4周 (H4)和常氧 (N)组 ,每组 12只。常压缺氧舱复制HPH大鼠模型。应用逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)检测肺组织IL 6和JAKsmRNA的表达水平 ;免疫组化法检测肺组织JAKs蛋白的含量和细胞形态学变化。结果　 (1)H1、H2 和H3 组大鼠肺组织IL 6mRNA水平 (分别为 1 67± 0 0 9、2 2 6± 0 12、1 55± 0 11)显著高于N组 (1 2 0± 0 11,P均 <0 0 1) ;H1、H2 和H3 组大鼠肺组织JAK1mRNA水平 (分别为 2 11± 0 0 9、2 85± 0 12、2 3 6± 0 13 )显著高于N组 (1 62± 0 10 ,P均 <0 0 1) ;H1、H2 和H3 组大鼠JAK2mRNA水平 (分别为 1 41± 0 0 7、2 0 2± 0 13、1 3 6± 0 0 9)显著高于N组 (1 0 1± 0 0 9,P均 <0 0 1) ;H1、H2 和H3 组大鼠肺组织JAK3mRNA水平 (分别为 0 86± 0 11、1 45± 0 10、0 91± 0 13 )显著高于N组 (0 55± 0 0 8,P均 <0 0 1) ;H1、H2 组大鼠肺组织TYK2mRNA水平 (分别为 1.3 6± 0 .10 ,1.76± 0 .11)显著高于N组 (0 .57± 0 .0 7,P均 <0 .0 1) ;其中H2 组大鼠肺组织表达IL 6和J     

低氧诱导大鼠外周血单核细胞表达TNF-α与PKC膜易及活性变化关系的研究

目的 研究低氧诱导大鼠外周血单核细胞(peripheral blood monouclear cells,PBMCs)膜内PKC膜易位及活性变化对肿瘤坏死因子α(TNF-α)表达的作用,探讨缺氧与全身炎症反应综合征(system inflammation response syndrome,SIRS)的关系.方法 采用明胶法分离大鼠外周血单核细胞,于低氧条件下(3%O2,5%CO2,92%N2)培养0、1、3、6、9、12、24h后,收集细胞,分别采用免疫沉淀法、SDS-PAGE、PKC活性检测试剂盒及逆转录PCR(RT-PCR)检测PKC膜易位、PKC活性及TNF-α表达量,采用SPSS10.0分析以上指标变化的相关性.结果 低氧1～9h,大鼠外周血单核细胞膜PKCα含量及活性明显增高(P<0.01).低氧1～24h,大鼠外周血单核细胞膜PKC∈含量及活性无明显变化.缺氧1～9h,大鼠外周血单核细胞TNF-α mRNA表达明显增高(P<0.01).低氧1～24h,PKCα膜蛋白含量及活性变化与TNF-α mRNA表达水平间呈显著正相关(P<0.01～0.05).结论 低氧可诱导PKCα向膜易位并被激活,活化的PKCα可增强促炎症因子TNF-α的表达.这些变化可能与急性呼吸窘迫综合征(acute respiratory dysfunction,ARDS)时血浆中大量促炎症因子持续存在密切相关.     

脂多糖作用大鼠肺泡巨噬细胞糖皮质激素受体表达及活性变化

目的探讨脂多糖作用大鼠肺泡巨噬细胞24 h内,糖皮质激素受体表达及活性变化特点.方法将原代培养的大鼠肺泡巨噬细胞分为脂多糖致伤组和地塞米松治疗组,采用RT-PCR和Western Blot在mRNA水平和蛋白质水平测定肺泡巨噬细胞糖皮质激素受体;EMSA测定肺泡巨噬细胞核蛋白中糖皮质激素受体活性.结果脂多糖作用后,糖皮质激素受体mRNA表达下调,24 h恢复正常水平;糖皮质激素受体蛋白质表达降低,4 h降至最低,24 h维持在低水平表达;糖皮质激素受体活性在1 h降到最低,24 h未恢复至正常水平.地塞米松治疗组在治疗后期不能有效维持糖皮质激素受体活性.结论脂多糖(100 ng/ml)作用大鼠肺泡巨噬细胞后,糖皮质激素受体蛋白表达降低,可能与mRNA表达降低及蛋白降解加速有关;糖皮质激素受体活性被显著抑制,出现糖皮质激素抵抗.