噬菌体表面展示人干扰素-α 2b

目的:建立一种研究人干扰素-α结构与功能的新平台.方法:利用噬菌体表面展示(phage display)技术表达人干扰素-α 2b(hIFN-α 2b)基因.结果:生物活性测定表明,3×108 TU重组噬菌体干扰素的抗病毒活性与5 IU基因工程IFN-α 2a的活性相当,并能被IFN-α单抗中和.结论:hIFN-α 2b在噬菌体表面能正确折叠和功能性表达,即成功地建立了噬菌体展示外源肽(hIFN-α)的技术平台.     

Hb New York病 ARMS-PCR检测及临床表型分析

目的通过扩增阻滞突变系统PCR(ARMS-PCR)检测Hb New York病,并对阳性患者进行表型分析。方法用毛细管电泳筛查出可疑Hb New York患者,用ARMS-PCR和基因测序技术同时对可疑阳性患者进行检测,并对确诊患者进行表型分析。结果在23 026例标本中共筛检出可疑Hb New York病例28例,用ARMS-PCR和基因测序技术确诊24例,二者吻合率达100%。结论 ARMS-PCR可快速检测Hb New York病,适于推广应用。     

HCV核心蛋白噬菌体随机展示肽库的构建

目的 :为了探讨噬菌体展示技术在筛选和鉴定病毒抗原表位研究中的应用前景。 方法 :利用随机引物 PCR法以HCV核心基因为模板合成随机 DNA片段 ,再经特定引物二次扩增后获得高丰度的 HCV核心蛋白随机 DNA片段 ,将该片段插入噬菌粒载体 p CANTAB5 X的 Xba 位点 ,转化大肠杆菌 TG1,辅助噬菌体拯救 ,建立噬菌体随机肽展示文库。结果 :所构建的随机文库含 1.2 3× 10 5个不同克隆 ,库容噬菌体滴度为 2× 10 1 2 TU/ m l(转导单位 / ml) ,PCR法检测插入阳性为 2 8.1% ,核酸杂交证实 40 %的克隆为 HCV核心基因阳性克隆。 结论 :所建的随机文库有足够大的库容和较好的多样性 ,可以满足HCV C抗原表位的筛选。     

珠蛋白生成障碍性贫血与血液高凝状态

珠蛋白生成障碍性贫血（又称地中海贫血,简称地贫）是一类由于珠蛋白合成障碍导致一种或几种珠蛋白数量不足或完全缺乏导致的遗传性溶血性疾病。根据患者临床症状的严重程度,可分为静止型、轻型、中间型及重型地贫。随着医疗水平的提高,地贫患者的平均寿命明显提升,但相关并发症的也不断出现。地贫患者的病理学特征包括贫血、黄疸、骨质改变及髓外造血所致肝脾肿大等,主要并发症包括骨质疏松症、免疫功能低下（尤其是脾切除的患者）、内分泌功能障碍、心力衰竭所致慢性贫血、铁负荷过重、肺动脉高血压和血栓栓塞（T E ）。其中,TE既可发生在静脉中,也可发生于动脉中。发生于静脉时,可导致深部静脉血栓、门静脉血栓及肺栓塞等,发生于动脉时,可导致缺血性脑卒中、烟雾综合征等。     

GnRHa治疗对特发性中枢性性早熟女童肾上腺功能初现的影响

目的 通过随访特发性中枢性性早熟(ICPP)女童经促性腺激素释放激素类似物(GnRHa)治疗前、后阴毛发育情况和血硫酸脱氧表雄酮(DHEAS)水平,探讨肾上腺功能初现与性腺轴发育的关系.方法 对确诊为ICPP且按年龄判断血DHEAS的z分值超过正常上限(+2 s)的49例女童在GnRHa治疗前后每3-6个月行性征检查,治疗后每年检测血DHEAS.平均随访(4.08+0.83)年,其中16例随访至停药后1年.结果 治疗前阴毛发育2期(PH2)和阴毛发育3期(PH3)的达到年龄均小于正常[(8.07对11.16)岁,(8.82对12.40)岁],ICPP女童GnRHa受治期间阴毛发育进程显著慢于正常对照[PH2-PH3:(1.69对0.83)年;PH3-阴毛发育4期(PH4):(1.64对0.60)年];同时也长于治疗前的自然进程[PH2-PH3:(1.69对0.88)年].乳房开始发育至阴毛萌出的间期亦然,ICPP治疗前后和正常对照分别为1.13、3.62和0.76年.在GnRHa治疗期间ICPP女童每年DHEAS Z分值呈逐年递减,停药后又显增.结论 大于6岁的性腺轴初现提前可诱致肾上腺功能初现提前,而GnRHa治疗在抑制性腺轴的同时也能延缓肾上腺功能发育的进程.     

生长激素对于GnRHa治疗中生长过度减速的特发性中枢性性早熟女孩的远期疗效观察

Objective To evaluate the long-term final adult height outcome of combined treatment with gonadotropin-releasing hormone analogue(GnRHa)and recombinant human growth hormone(rhGH)in girls with idiopathic central precocious puberty(ICPP).Methods Out of 49 sirls with ICPP[treated with GnRHa at a dose of 60-80 μg/kg every 4 weeks for at least 6 months,whose height velocity fell below 4 cm/year and showed no improvement of predicted adult height(PAH)in 6 months],26 received(rhGH-combined group),in addition to chronological age,and duration of GnRHa treatment,who showed the same growth pattern but refused rhGH treatment,served to evaluate the efficacy of rhGH in addition.At the conclusion of the smdy,all the girls had been followed up for(3.3±1.9)years,and(3.2±0.9)years in rhGH-combined group and control group,respectively;and had achieved adult heisht.To compare the PAH with the final adult height(FAH)before and after treatment in the two groups.Results During rhGH treatment, height velocity of the rhGH-combined girls increased significantly[(6.7±2.0 vs <4)cm/year baseline],RhGH-combined gids showed an adult height far higher than pretreatment PAH [(157.5±4.5 vs 148.1±4.6)cm,P<0.01],and target height[(154.4±4.6)cm] was,significantly excceded.The control group reached an adult heisht also significandy higher than pretreatment PAH[(154.7±5.5vs 150.3±6.0)cm,P<0.01],while target height[(155.6±4.3)cm]was just reached but not significantlyexcceded.The gain in height obtained,calculated between pretreatment PAH and final heisat,(9.4±4.9)cm in rhGH-combined group was much more than that(4.3±4.2)cm in the control group(P<0.01).Conclusion RhGH may accelerate the linear growth and improve adult height of GnRHa-treated ICPP girls.     

不同年龄孕妇妊娠晚期D-二聚体的表达及临床意义

目的了解不同年龄孕妇妊娠晚期血浆D-二聚体的变化规律,并探讨其临床意义。方法用全自动凝血分析仪定量检测293例不同年龄（19～24岁、25～29岁、30～34岁组各60例,35～40岁组为113例）妊娠晚期孕妇和200例不同年龄（19～24岁、25～29岁、30～34岁、35～40岁组,各50例）的健康非孕女性体检者（健康非孕组）血浆的D-二聚体含量。结果孕妇各年龄组的D-二聚体含量均高于相应年龄组的健康非孕妇女（P〈0.051）;高龄孕妇的D-二聚体高于适龄孕妇组（P〈0.01）;高龄孕妇的产后出血发生率高于适龄孕妇（P〈0.05）。结论 D-二聚体随孕妇年龄的增加而升高,其变化规律有助于了解不同年龄孕妇的纤溶活性;D-二聚体的定量检测对预防孕妇尤其是高龄孕妇出血的发生有一定的指导意义。     

新型噬菌体展示载体pCANTAB5S的构建

目的进一步改造噬菌体展示载体,使之能更有效地展示各种外源随机多肽文库.方法以pCANTAB5X-IFN-α2b重组质粒为模板,在上游引物中引入Xba Ⅰ、Sac Ⅰ酶切位点,在下游引物中引入Sac Ⅰ、Stu Ⅰ、Sal Ⅰ酶切位点,将用该引物扩增的IFN-α2b衔接片段PCR产物克隆到pMD18-T中,再将该片段用Xba Ⅰ和Sal Ⅰ酶切并将之插入pCANTAB5L的Xba Ⅰ和Sal Ⅰ位点中,经Sac Ⅰ酶切,线性载体片段自连,构成新型噬菌体展示载体pCANTAB5S.结果限制酶切位点SacⅠ被引入到噬菌体展示载体,并校正了pCANTAB5L载体Stu Ⅰ、Sal Ⅰ等位点的读框.结论成功构建了含读框正确的SacⅠ等多个克隆位点的新型噬菌体展示载体pCANTAB5S,可用于各种外源随机多肽文库的有效展示.     

复制缺陷型重组腺病毒介导mlFN-β基因治疗小鼠黑色素瘤的研究

目的：探讨人类复制缺陷型重组腺病毒载体介导mIFN-β基因治疗小鼠黑色素瘤的可行性和效果。方法：利用人类复制缺陷型重组腺病毒将目的基因mIFN-β经体外、体内两种途径导入小鼠黑色素瘤细胞（B16细胞）中，观察体外转mlFN-β基因的B16细胞的体内致瘤性和瘤苗作用，及通过腺病毒载体介导的mIFN-β对体内局部肿瘤治疗和抗肿瘤转移的作用。结果：1）携带目的基因的重组腺病毒感染B16细胞能获得较高的转移效率和目的基因的有效表达；2）将mIFN-β基因导入B16细胞对B16细胞的体外增殖能力无明显影响，但能显著提高细胞表面MHC-I类抗原的表达；3）将转mIFN-β基因的B16细胞接种小鼠，其体内致瘤性明显降低．且对对侧野生型B16细胞的致瘤性有抑制作用；4）瘤体内注射和经尾静脉注射途径给予AdCMV mIFN-β．对局部肿瘤和转移瘤有治疗作用。结论：利用人类复制缺陷型腺病毒载体介导mIFN-β基因治疗小鼠黑色素瘤是可行的，并具有较好疗效，提示用腺病毒载体携带有效的目的基因来开发瘤苗和治疗肿瘤具有良好的临床应用前景。     

新型噬菌粒展示载体pCANTAB5L的构建

目的：将柔性多肽接头和多克隆位点引入噬菌粒载体pCANTAB5X中，构建适用于展示各种随机肽库、功能靶蛋白、功能靶蛋白变异体库和大分子量（＞300个氨基酸）功能蛋白的新型噬菌粒展示载体。方法：应用5′端含XbaⅠ、StuⅠ、SalⅠ、KpnⅠ识别序列的引物，PCR扩增获得XbaⅠ－StuⅠ-SalⅠ-KpnⅠ－[G4S]3-NotⅠ衔接片段，将该PCR产物克隆到pMD-18T中，再将该片段插入pCANTAB5X中构建成新型噬菌粒展示载体pCANTAB5L。结果：限制性内切酶酶谱及DNA序列分析证明[G4S]3多肽接头和限制性内酶切位点XbaⅠ、StuⅠ、SalⅠ、KpnⅠ序列被引入到新构建的噬菌粒载体pCANTAB5L中。结论：成功构建了新型噬菌粒展示载体pCANTAB5L，并能有效展示功能靶蛋白、功能靶蛋白变异体库和大分子量功能蛋白。