β-葡萄糖醛酸酶前药对βG基因转染人胆管癌细胞的作用

目的　探讨βG基因/β-葡萄糖醛酸苷酶(β-G)前体药系统对人胆管癌细胞株QBC939的抑制作用。方法　构建真核表达的逆转录病毒载体pDOR-βG,利用阳离子脂质体将其转入人胆管癌细胞株QBC939,检测其表达及β-G前体药对转基因细胞的增殖阻断作用。结果　经G418筛选后的阳性细胞克隆,为高表达βG的胆管癌模型。免疫组织化学、免疫荧光、原位杂交等证实了pDOR-βG在转基因细胞中的表达;四唑蓝（MTT）比色试验测定β-G前体药对QBC939-pDOR-βG细胞有显著的抑制增殖作用,β-G前体药浓度为0.292g/L时,其抑制率为67.6%。QBC939-βG组与对照组比较差异有非常显著性（P＜0.01）。结论　βG基因/β-G前体药系统是一种新的自杀基因系统,可作为胆道肿瘤基因治疗的一种新方法。     

Expression of HLA-DR antigen in hepatocellular carcinoma and its up-regulation by interferon

Objective: To observe the expression of human leukocytic antigen DR (HLA-DR) in primary hepatocellular carcinoma (HCC) and its up-regulation by interferon (IFN). Methods: The expression of HLA-DR in 46 specimens of human HCC tissues, 4 human HCC cell lines (SMMC-7721, HCC-9204, BEL-7402 and HHCC) and a human hepatocyte cell line QZG was respectively detected by immunohistochemical ABC staining and flow cytometry. The expression of HLA-DR in the 5 cell lines was detected by ELISA before and after the cells were treated with IFN-γ or IFN-α. Results:Eighteen out of 46 HCC tissues (39.1%) expressed HLA-DR, whereas all the normal liver tissues immediately adjacent to HCC tissues were HLA-DR-negative. No obvious HLA-DR-positive staining was found in all the 5 cell lines. The expression of HLA-DR was up-regulated in all the 5 cell lines after IFN-γ or IFN-α treatment. The up-regulation of HI A-DR in QZG cells was less obvious than that in HCC cell lines. The effect of IFN-γ was more significant than that of IFN-α. Conclusion: HCC tissues can express HLA-DR to some extent, but HCC cell lines do not express detectable HLA-DR. IFN can up-regulate HLA-DR expression in HCC cells.     

凝胶色谱法半制备级纯化单克隆抗体

作者采用ＳｅＰｌｌａｃｙｌＳ－２００凝胶色谱柱，在快速蛋白液相色谱系统（ＦＰＬＣ）建立了肝癌相关抗原单克隆抗体半制各级纯化方法。该法是将ＭｃＡｂ腹水经４０％饱和硫酸铵盐析粗分离后，再用凝胶色谱纯化，一次上样量相当于５～１０ｍｌ腹水，可得纯化ＭｃＡｂ３０～６０ｍｇ，得率为６～６．５ｍｇ／ｍｌ腹水，回收率为６３％，一次色谱纯化周期２ｈ，整个分离纬化可在３ｈ内完成。经ＳＤＳ—ＰＡＧＥ和ＤＥＡＥ离子交换色谱法检测ＭｃＡｂ纯度大于８０％，ＡＢＣ染色法测定ＭｃＡｂ活性为，１：４００００（１．５６×１０－１０ｍｏｌ／Ｌ），是一般实验室纯化ＩｇＧ类ＭｃＡｂ的实用方法。     

肝癌放免治疗剂~(131)I-HAb18对大鼠各组织的病理学变化

目的:观察不同剂量~(131)Ⅰ-HAb18在长期毒性试验中对大鼠各组织的病理损伤,为确定安全的临床使用剂量提供依据。方法:80只SD大鼠随机分为4组(含对照组),实验组腹腔注射3种剂量的~(131)Ⅰ-HAb18,对照组注射等体积生理盐水,每月2次,共3月,末次注射24h后处死,解剖一半大鼠,取各组织制成石蜡切片,镜检。停药恢复2月后,处死解剖余下的大鼠,制成切片,观察。结果:与对照组相比,低剂量组的大鼠各组织基本正常,中剂量组的大鼠约有一半组织出现轻度的病理改变,高剂量组的大鼠部分组织出现坏死等不可复性病理改变。结论:在长期毒性试验中低剂量为安全剂量,中剂量对SD大鼠有毒性作用,高剂量对SD大鼠有较重的毒性。     

金钗石斛茎提取物联苄类化合物对人肝癌高侵袭转移细胞株FHCC-98增殖的抑制

目的:通过体外实验初步探讨从兰科植物石斛的茎中提取的单体化合物对人肝癌细胞株FHCC-98的细胞增殖抑制作用。方法:实验于2006-04/07在解放军第四军医大学细胞工程研究中心完成。采用噻唑蓝法筛选由金钗石斛提取分离的31种单体化合物,测定其在体外对人肝癌细胞株FHCC-98的生长抑制作用,以人正常肝细胞QSG7701为阴性对照。首先利用单浓度(100μmol/L)、单时间点(48h)对化合物进行初筛,其中有3个化合物符合要求,可以进行复筛,分别为玫瑰石斛素(Crepidatin)、鼓槌联苄(Chrysotobibenzyl)、4,4’-二羟基-3,3’,5-三甲氧基二苄(Moscatilin)。复筛采用多浓度点(100,50,25,12.5,6.25μmol/L)、单时间点(48h)对化合物检测细胞毒性(IC50)。IC50值>100表示无细胞毒性。结果:玫瑰石斛素、鼓槌联苄、4,4’-二羟基-3,3’,5-三甲氧基二苄3种化合物对人肝癌细胞株FHCC-98显示不同的增殖抑制作用(IC50值分别为74.30±0.98,56.60±0.92,8.68±0.95),其中化合物4,4’-二羟基-3,3’,5-三甲氧基二苄的作用尤为明显,而3种化合物对正常细胞QSG7701基本没有毒性(IC50值>100)。结论:从金钗石斛中提取的3种单体化合物对人肝癌高侵袭细胞株的增殖具有一定抑制作用。     

基于抗体等重组蛋白表达产品的哺乳动物细胞大规模发酵技术

抗体等重组蛋白产品是以基因工程和细胞工程为关键技术的生物技术产品,其特异性高、均一性好、靶点明确,广泛应用于各类重大疾病、尤其是对肿瘤治疗。目前,在FDA批准的32种抗体药物治疗疾病的分类中,肿瘤类疾病占32％、免疫性疾病占37％、器官移植疾病占11％、感染性疾病占8％、心血管疾病占4％、其他疾病占6％。     

人肝癌培养细胞粗提膜相关抗原的单克隆抗体

用人肝癌培养细胞粗提膜免疫Balb/c小鼠的脾细胞与小鼠骨髓瘤(SP_2/o)细胞在PEG作用下融合。以LLISA筛选抗体。通过免疫荧光和免疫酶标进行组织定位。初步获得一株抗人肝癌细胞膜相关抗原的单克隆抗体杂交瘤—命名FP—5。用此抗体在涂片上对人肝癌细胞膜呈阳性反应,在3例手术切除的人肝癌活检冰冻切片中,肝癌组织细胞亦呈阳性反应。FP—5细胞株染色体为83—108条,含1—2条中着丝点标记染色体。经6次克隆化体外培养6个多月,仍持续分泌特异性抗体,此抗体鉴定属鼠的IgM型。     

癌基因c-erbB-2、组织蛋白酶D在胃癌中的表达及其意义

目的 探讨癌基因c-erbB-2、组织蛋白酶D（Cath-D)在胃癌中的表达及其与胃癌发展的关系。方法 应用免疫组织化学方法检测102例胃癌组织的c-erbB-2、Cath-d蛋白表达，分析其与胃癌生物学行为之间的关系。结果 c-erbB-2阳性率38.2%，Cath-D阳性率81.4%。c-erbB-2阳性者Cath-D的阳性率明显高于c-erbB-2阴性者，c-erbB-2和Cath-D表达与胃癌浸润深度、淋巴结转移密切相关，而与组织学分型无关。Cath-D表达还与肿瘤的生长方式及脉管内癌栓有关；c-erbB-2和Cath-D表达阳性的胃癌患者5年生存率较表达阴性者低。结论 c-erbB-2和Cath-D对胃癌的生长、浸润和转移有促进作用，c-erbB-2和Cath-d可作为反映胃癌生物学行为的指标之一。     

188Re-β射线诱导肝癌细胞凋亡与细胞周期阻断

目的　探讨放射性核素 1 88Re- β射线内照射对人肝癌细胞 HCC的细胞周期阻断及诱导凋亡的作用 .方法　通过 MTT实验、形态学观察、琼脂糖凝胶电泳和流式细胞术对核素诱导的 HCC细胞进行了检测和观察 .结果　 1 88Re导致的 HCC细胞死亡具有典型的细胞凋亡形态学和生化特征 .流式细胞术定量显示各期细胞数发生改变 ,且凋亡率和剂量呈依赖性 .结论　 1 88Re-β射线低剂量和高剂量对 HCC细胞周期的影响不同 ,低剂量主要使 G0 /G1 期阻滞 ,较高剂量则导致 G1 阻滞减轻 ,S期和 G2 /M期细胞数增多~(188)Re-β射线诱导肝癌细胞凋亡与细胞…     

提高生物技术专业细胞生物学教学质量的体会

生物技术专业是新开设的一个专业,该专业细胞生物学在课程设置、教学内容、教学方法和教学手段等方面均与原有医学专业细胞生物学有显著不同。在教学实践中结合一年来的教学经验,从以下几个方面入手,有效地提高了细胞生物学课程的教学质量:把最新的科技发展成果融化到教学内容中,提高教学内容先进性、科学性;采用灵活多样的教学方法和现代化教学手段,提高教学质量;强化实践性教学环节,加强学生动手能力和创造能力的培养。