EMD对肺癌A-549细胞DNA含量的影响

用Leitz MPV_3型显微分光光度计研究了EMD对肺癌A-549细胞株DNA含量的影响,发现EMD作用后肺癌细胞的DNA含量明显减少。测定单个细胞中DNA的含量可以获得细胞在各个细胞周期分布的资料。EMD浓度为10μg/ml时在第3和第4天引起G_1和S期细胞增多,G_ M期和高倍体细胞减少,高峰在低通道处出现并左移,表明EMD对肺癌A-549细胞的分裂增殖有抑制作用。     

金属镉应答新基因TEF-1β的致癌力鉴定

目的 前期研究已发现金属镉应答新基因TEF-1β转染NIH3T3细胞可致其编码蛋白质表达升高而引起细胞转化。本研究的目的是对TEF-1β基因转化NIH3T3细胞的致癌能力和致瘤性进行鉴定。方法软琼脂集落形成试验和裸鼠成瘤实验。结果所有4株不同的TEF-1β转染发生转化的NIH3T3细胞在软琼脂培养中均显示锚非依赖性生长能力，形成明显的细胞集落。而非转化对照细胞在软琼脂上则无生长能力。转化细胞和对照细胞分别给裸鼠皮下注射(每组4只，5组共20只)，1周后，转化细胞组的绝大部分裸鼠下背部皮下开始出现肿瘤，4周后所有4种不同转化细胞株接种的裸鼠全部长出大小不等的肿瘤，但非转化对照细胞于第5周后仍无一只裸鼠出现肿瘤。提示TEF-1β转基因转化细胞属恶性转化细胞，具有明显的致癌能力和致瘤作用。结论根据本研究结果及前期发现，可以认为新发现的TEF-1β是一个镉应答原癌基因。     

冶炼作业人群铅、砷负荷对脂质过氧化和抗氧化能力的影响

目的探讨冶炼工人体内铅(Pb)、砷(As)负荷对脂质过氧化产物和抗氧化酶的影响。方法选取212名冶炼作业人员为接触组,以106名无Pb、As接触史的健康人为对照组,分别测定两组人员血清中Pb、As的含量为体内负荷指标,测定两组人员血清中丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)和谷胱甘肽硫转移酶(GST)水平,接触组按工龄分组将上述各项指标进行相关分析。结果接触组血清Pb、As平均水平分别为(0.18±0.03)和(0.39±0.01)μmol/L,血清SOD、GSH-Px和GST活力分别为(161.22±29.26)、(116.42±20.16)和(38.36±10.06)U,MDA含量为(7.32±2.35)μmol/L;对照组血清Pb、As平均水平分别为(0.07±0.02)和(0.11±0.07)μmol/L,血清中SOD、GSH-Px和GST活力分别为(181.61±28.34)、(153.14±20.36)和(46.20±10.26)U,MDA含量为(4.35±2.26)μmol/L。接触组与对照组上述对应各项指标进行统计学分析,差异呈高度显著性(P<0.01)。对接触组以工龄分组比较,显示≥10年工龄组较短工龄组(≤5年)血清Pb、As平均水平与MDA均较高(P<0.01);SOD、GSH-Px和GST活力较低(P<0.01)。结论Pb、As接触有增加体内脂质过氧化产物含量,降低机体抗氧化能力的作用。     

镍化合物诱发恶性转化细胞的端粒酶活性表达

目的：探讨二种镍化合物诱发细胞恶变过程中端粒酶活性的变化。方法：二种镍化合物转化细胞接种BALB／c裸鼠，应用端粒重复序列扩增法(telomeric repeat amplification protocol，TRAP)检测转化细胞和肿瘤细胞的端粒酶活性。结果：结晶型硫化镍和氯化镍诱发的BALB／c-313恶性转化细胞的端粒酶活性均表现为阳性。结论：镍化合物诱发的细胞恶性转化涉及了端粒酶活性改变，提示了端粒酶表达与镍转化作用有关。     

反式-BPDE诱发人胎气管上皮细胞p53基因突变的研究

目的：探讨苯并（ａ）芘在人肺癌发生中的作用。方法：用苯并（ａ）芘的代谢产产物反式－ＢＰＤＥ,作地体外培养的大胎气管上皮细胞８～１２周后,用ＰＣＲ－ＳＳＣＡＰ方法检测Ｐ５３抑癌基因第６,７,８外显子的点突变情况。结果：经反式－ＢＰＤＥ处理的人胎气管上皮细胞,Ｐ５３第７,８外 有点突变,而这些细胞 出现典型的转化细胞形态特征的改变。结论：反式－ＢＰＤＥ可诱发人胎气管上皮细胞Ｐ３基因点突变,此抑癌基因的     

TEF-1δ基因真核细胞稳定表达系统的构建与鉴定

目的: 构建TEF-1δ (mouse translation elongation factor-1δ) 的稳定表达系统.方法: 采用磷酸钙介导转染技术和G418细胞筛选法,以pcDNA3.1/V5-His-TOPO为表达载体,构建了TEF-1δ转基因CHO和COS7细胞系,Western Blot分析与鉴定表达蛋白.结果: 在10株转染和经G418反复筛选的CHO细胞系中,有3株(编码为COH-pcDNA3.1-TEF-1δ#3,#6,#14)具有高效稳定表达的TEF-1δ编码蛋白质(Mr约31×103),其余CHO细胞株的TEF-1δ蛋白质表达相对较弱或无表达.在4株转染和经G418反复筛选的COS7细胞系中,4株细胞(编码为COS7-pcCDNA3.1-TEF-1δ #4,#8,#14和#17)均有高效稳定的TEF-1δ编码蛋白表达,相应的无转染组及载体对照组的CHO和COS7细胞均无TEF-1δ蛋白质表达.结论: 这两类TEF-1δ转基因哺乳动物细胞稳定表达系统已成功构建与鉴定,该表达系统的建立对于TEF-1δ这一新基因的生物学功能研究,尤其是镉的致癌作用与致癌机制的研究有重要应用价值.     

TEF-1δ基因真核细胞稳定表达系统的构建与鉴定

目的: 构建TEF-1δ (mouse translation elongation factor-1δ) 的稳定表达系统.方法: 采用磷酸钙介导转染技术和G418细胞筛选法,以pcDNA3.1/V5-His-TOPO为表达载体,构建了TEF-1δ转基因CHO和COS7细胞系,Western Blot分析与鉴定表达蛋白.结果: 在10株转染和经G418反复筛选的CHO细胞系中,有3株(编码为COH-pcDNA3.1-TEF-1δ#3,#6,#14)具有高效稳定表达的TEF-1δ编码蛋白质(Mr约31×103),其余CHO细胞株的TEF-1δ蛋白质表达相对较弱或无表达.在4株转染和经G418反复筛选的COS7细胞系中,4株细胞(编码为COS7-pcCDNA3.1-TEF-1δ #4,#8,#14和#17)均有高效稳定的TEF-1δ编码蛋白表达,相应的无转染组及载体对照组的CHO和COS7细胞均无TEF-1δ蛋白质表达.结论: 这两类TEF-1δ转基因哺乳动物细胞稳定表达系统已成功构建与鉴定,该表达系统的建立对于TEF-1δ这一新基因的生物学功能研究,尤其是镉的致癌作用与致癌机制的研究有重要应用价值.     

叶绿酸抑制细胞恶性转化的蛋白表达差异分析

目的:采用蛋白质组学技术分析叶绿酸抑制细胞恶性转化的蛋白差异表达,探讨叶绿酸抗细胞转化的分子机制。方法:一步法分别提取二羟环氧苯并芘(BPDE)诱导的转化细胞B-1和叶绿酸与BPDE共处理的抗转化细胞CB-1总蛋白,应用二维凝胶电泳技术和相应软件ImageMaster 2D 3.10分析两种细胞的蛋白质组变化,基质辅助激光解吸电离-飞行时间-质谱(MALDI-TOF-MS)结合数据库检索鉴定部分表达有差异的蛋白斑点。结果:与B-1细胞相比,CB-1细胞中有47个蛋白斑点出现表达差异,其中19个蛋白斑点表达升高,28个蛋白斑点表达降低;质谱分析初步鉴定出5个差异蛋白斑点。结论:叶绿酸抑制细胞恶性转化可引起大量蛋白表达差异,这些差异蛋白可能参与了叶绿酸抗细胞转化的过程。     

二羟环氧苯并芘诱发细胞恶变后基因和蛋白表达差异分析

目的研究苯并(a)芘代谢产物反式二羟环氧苯并芘(反式-BPDE)诱发人支气管上皮细胞系(16HBE)恶性转化的基因和蛋白表达的改变,探讨苯并(a)芘致癌的分子机制.方法应用含4096条人类全长基因的cDNA芯片检测反式-BPDE诱发人支气管上皮细胞恶性转化的基因表达谱的变化;应用二维凝胶电泳技术和相应软件ImageMaster2D 3.10分析反式-BPDE诱发人支气管上皮细胞恶性转化的蛋白质组变化,基质辅助激光解吸电离-飞行时间-质谱结合数据库检索鉴定部分表达有差异的蛋白斑点.结果BPDE诱发的恶性转化细胞与阴性对照细胞比较,cDNA芯片结果显示差异表达基因有143条,其中52条基因在BPDE诱发的恶性转化细胞中表达增高,91条基因在恶性转化细胞中表达降低;二维凝胶电泳显示有72个蛋白斑点出现表达差异,其中44个蛋白斑点在BPDE诱发的恶性转化细胞中表达升高,28个蛋白斑点在恶性转化细胞中表达降低,对其中7个表达明显差异的蛋白斑点的鉴定显示,原癌基因v-erbb2同源3、锌指蛋白127、硫氧还原蛋白过氧化物酶2、KIAA0471蛋白在恶性转化细胞中高表达,而钙结合蛋白5、锌指蛋白Aiolos、Kelch样蛋白3在恶性转化细胞中低表达.结论反式-BPDE诱发16HBE恶性转化的基因表达谱和蛋白表达谱发生了显著的变化,这些表达改变的基因和蛋白可能参与了BPDE诱发细胞恶变的过程.     

结晶型硫化镍诱发细胞恶性转化相关蛋白硫氧还原蛋白过氧化物酶2的鉴定

目的利用蛋白质组学技术识别结晶型硫化镍（NiS）诱发人支气管上皮细胞恶性转化相关蛋白的差异表达，探讨镍致癌的分子机制。方法应用二维凝胶电泳与相应软件分析结晶型NiS诱发细胞恶性转化后蛋白质组变化，基质辅助激光解吸电离-飞行时间-质谱（MALDI-TOF-MS）结合数据库检索鉴定恶性转化相关蛋白。结果获得分辨率和重复性较好的二维凝胶电泳图谱，在相对分子质量14400～94000、等电点3～10范围内分离出约700个不同蛋白质点，对差异表达明显的等电点约6，相对分子质量约25000的蛋白质点进行质谱分析，鉴定出等电点为5．66，相对分子质量为21890的蛋白／硫氧还原蛋白过氧化物酶2（Peroxiredoxin 2，PDX2），并发现该蛋白在恶性转化细胞中高表达。结论蛋白PDX2可能是参与结晶型NiS诱发人支气管上皮细胞恶性转化过程的重要蛋白分子，与细胞恶性转化有关。