恶性转化人支气管上皮细胞基因组甲基化观察

目的对反式二氢二醇环氧苯并芘（anti-BPDE）和结晶型硫化镍（NiS）恶性转化人支气管上皮细胞（Hu-man bronchial epithelia,16HBE）基因组DNA甲基化状况进行研究,寻找DNA甲基化异常的基因片段,探讨反式-BPDE和NiS的表遗传致癌机制.方法采用限制性指纹识别技术（MSRF）,对反式-BPDE和NiS分别诱导转化及裸鼠成瘤的4种人支气管上皮细胞株基因组进行分析;对异常甲基化基因阳性片断采用TA克隆技术构建测序载体,对测序结果进行同源性分析比较.结果发现结晶型NiS恶性转化人支气管上皮细胞基因组存在高甲基化的DNA片段,其中一基因片段与编码鼻咽癌易感性蛋白ANKRD11基因序列99%同源.另一基因片段与HOXA3基因序列99%同源;未发现反式BPDE恶性转化人支气管上皮细胞基因组DNA异常甲基化基因片段.结论结晶型NiS恶性转化人支气管上皮细胞DNA的高度甲基化可能导致基因表达抑制.可能是结晶型NiS致癌的一种表遗传机制;反式BPDE致癌过程可能与基因组磷酸胞苷酰（CpG）岛甲基化异常关系不明确.     

003 多环芳烃致癌的分子毒理学研究进展

多环芳烃是环境中广泛存在的污染物,其中毒机制尚不十分清楚.本文从其与细胞色素P450的关系、多环芳烃受体的作用及其对癌基因与抑癌基因的影响等方面进行综述,为其致癌机制的进一步研究提供思路.     

8-羟基-脱氧鸟苷在肺癌发生和人支气管上皮细胞癌变过程中的作用

目的　探讨 8 羟基 脱氧鸟苷 (8 OH dG)在肺癌发生中的作用及其分子机制。方法　使用鼠抗人 8 OH dG单克隆抗体 ,检测 15 0例肺癌、12 0例癌旁肺组织、4 0例肺良性病变和 4 0例正常肺组织中 8 OH dG的含量 ;同时检测相应肺组织中P5 3、C MYC、K RAS、BCL 2等癌变相关基因的表达 ,分析 8 OH dG与上述癌变相关基因表达的关系 ;并利用苯并 (a)芘代谢产物B(a)P 二醇 环氧化物 (BPDE)和结晶型硫化镍 (NiS)诱导的体外人支气管上皮细胞转化癌变模型 ,检测癌变进程中 8 OH dG的变化。结果　肺癌组织、癌旁肺组织、肺良性病变和正常肺组织中氧化损伤标志物 8 OH dG的阳性率分别为 92 .7% (139/ 15 0 )、17.5 % (2 1/ 12 0 )、10 .0 % (4 / 4 0 )和 5 .0 % (2 / 4 0 ) ,肺癌组织中 8 OH dG水平高于其它肺组织 (P <0 .0 1)。将肺癌病例按性别、年龄、细胞类型和吸烟史分层分析 ,结果显示它们与 8 OH dG均无关联。分析 8 OH dG与癌变相关基因的关系 ,发现肺癌组织K RAS、Bcl 2基因的过度表达与 8 OH dG含量高有关 ,而P5 3和C MYC基因的表达与 8 OH dG的含量无关联。在体外用BPDE和NiS作用于人支气管上皮细胞系诱导其转化和癌变过程中 ,8 OH dG出现于细胞转化之前 ,其含量的增加与细胞癌变进程相一致。结论　 8 羟基     

反式二羟环氧苯并芘诱导人支气管上皮细胞翻译延长因子1αl基因的表达

目的 探讨反式二羟环氧苯并芘(反式-BPDE)诱导转化(16 HBE-T）与成瘤(16HBE-C)人支气管上皮细胞(16HBE)翻译延长因子1αl基因的表达变化。方法 联合应用抑制性消减杂交、生物信息学分析以及半定量RT-PCR等方法，分别以16HBE-T和16HBE-C细胞cDNA为检测子，以正常16HBE细胞(16HBE-N)cDNA为驱动子，构建消减杂交文库，经2次杂交和2次PCR后，插入TA克隆载体克隆，经筛选、测序、序列分析后，设计特异引物，以β-肌动蛋白(β-actin)为内参照，进行半定量PCR。结果 有9条差异表达片段与Genbank的翻译延长因子1αl的不同片段相同，半定量PCR表明，翻译延长因子1αl在16HBE-T和16HBE-C细胞中的表达水平分别为16HBE-N细胞的1．148倍和1．253倍，表明表达水平上调。结论 翻译延长因子1αl可能与反式-BPDE的转化及成瘤有部分关系。