采用血清蛋白质组学方法筛选能诱发自身抗体的鼻咽癌相关抗原

目的 采用血清蛋白质组学方法筛选能诱发机体产生自身抗体的鼻咽癌(NPC)相关抗原,以便为NPC诊断和治疗提供候选标志.方法 收集19份NPC组织,采用二维凝胶电泳(2-DE)技术分离组织总蛋白质,每份组织样本同时做3块2-DE胶,其中将1块2-DE胶作为制备胶进行考马斯亮蓝染色,另2块2-DE胶采用半干式电转法将胶中的蛋白转至PVDF膜上,并分别与NPC患者自身的血清和健康人血清进行2-DE免疫印迹分析,识别能与多数NPC患者血清反应而不与或很少与健康人血清反应的蛋白质点,再从制备2-DE胶中切取相应蛋白质点,进行基质辅助激光解吸电离飞行时问质谱(MOLDI-TOF MS)和电喷雾电离四级杆飞行时间质谱(ESI-Q-TOF MS/MS)分析,获取肽质量指纹图和肽序列标签,数据库搜索鉴定蛋白质.结果 鉴定了13个能诱发机体产生自身抗体的NPC相关抗原:热休克蛋白70(HSP70)、人血清白蛋白(HAS)、热休克蛋白60(HSP60)、细胞角蛋白15(CK 15)、亮氨酸氨基肽酶(LAP 3)、α-烯醇化酶(α-enolase)、ErbB3结合蛋白(EBP1)、细胞角蛋白19(CK 19)、核糖体蛋白P0(RPP 0)、丙酮酸脱氢酶E1(PDE 1)、GTP结合调节蛋白(GNBP)、抗增殖蛋白(prohibitin)和Rho GDP解离抑制因子2(Rho-GDI 2),13种蛋白质点在21%的鼻咽癌患者中可见,而健康人中缺乏或出现频率较低.结论 本研究筛选到13个NPC相关抗原,这些抗原能诱导患者产生自身抗体,这些抗体有可能成为NPC诊断标志和治疗靶标.     

人结肠癌与结肠腺瘤的定量蛋白质组学研究

目的 研究结肠癌（CC）与结肠腺瘤性息肉（CAP）组织差异定量表达蛋白质谱.方法 激光捕获显微切割（LCM）技术分别获取结肠癌及结肠腺瘤性息肉组织上皮细胞,应用同位素标记相对和绝对定量（iTRAQ）及纳米液相色谱-串联质谱（NanoLC-MS/MS）技术分离鉴定CC和CAP的差异表达蛋白质,并用生物信息学方法对差异蛋白质在结肠癌变过程中的生物学意义进行分析.结果 共鉴定266个差异蛋白质,其中103个蛋白质在CC上调,163个蛋白质下调,这些差异蛋白质涉及细胞代谢,免疫,运输,发育,细胞黏附,细胞周期,凋亡等过程.结论 上述差异蛋白质的鉴定为结肠癌癌变机制的研究及分子标志物确定提供了有益的科学依据.     

肺鳞癌患者和健康人血清的差异蛋白质组学研究

目的：比较肺鳞癌患者和健康人血清蛋白质组的差异,为筛选肺鳞癌血清分子标志物提供依据。方法：以5例健康人和5例I期肺鳞癌患者的血清为样本,采用15%的聚丙稀酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分离血清蛋白质,Bandleader凝胶图像分析软件识别两种血清样本差异的蛋白质条带,电喷雾-四极杆-串联质谱（ESI-Q-TOF MS/MS）鉴定差异蛋白质条带中的蛋白质。Western印迹检测差异蛋白质结合珠蛋白-2（haptoglobin-2,HP-2)在肺鳞癌患者和健康人血清中的表达。结果：建立了健康人和肺鳞癌患者血清样品的一维凝胶电泳图谱,图像分析识别了4条差异蛋白质条带,质谱鉴定出29种非冗余的血清蛋白质。Western印迹证实了HP-2在肺鳞癌患者和健康人血清中的差异表达。结论：29种血清差异蛋白质为筛选肺鳞癌的血清分子标志物提供了实验依据。     

环孢素A对阿霉素细胞毒性的体外增效作用

探讨了环抱素Ａ（ＣｓＡ）对阿霉素（ＡＤＭ）作用于人体胃低分化粘液腺癌细胞系（ＭＧＣ）的增效作用，并与戊脉安（ＶＰ）的增效作用进行了比较。发现：①低浓度ＣｓＡ能增强ＡＤＭ对ＭＧＣ细胞系毒性（Ｐ＜０．０１），且其浓度与细胞抑制率明显相关（ｒ＝０．９９８６，Ｐ＜０．０１）；②ＣｓＡ的增效作用与ＶＰ相似（Ｐ＞０．０５），当ＣｓＡ与ＶＰ及ＡＤＭ合用时，对ＭＧＣ的抑制达到相加的效果（Ｐ＜０．０１）。     

用原位杂交技术探讨EB病毒受体（EBVR／CR_2）在鼻咽癌发病中的作用

本文经原位杂交技术检测发现部分人胚鼻咽上皮细胞、鼻咽癌细胞株及高分化鼻咽癌中均有限强的Ｅｐｓｔｅｉｎ－Ｂａｒｒ病毒受体（ＥＢＶＲ／ＣＲ＿２）的病毒结合区ＳＣＲ１和ＳＣＲ２的表达，而低分化鼻咽癌中未检测到其表达，提示ＳＣＲ１和ＳＣＲ２的表达与ＥＢＶ的复制有关，ＥＢＶＲ／ＣＲ＿２可以介导ＥＢＶ感染鼻咽上皮细胞导致鼻咽癌的发生。     

二亚硝基哌嗪诱发正常人胚鼻咽上皮细胞恶性转化

本室曾用二亚硝基哌嗪成功地诱发了大鼠鼻咽癌,并表现相对器官特异性。由于动物实验的结果不能轻易地外推到人,而人体又不能直接用于诱癌实验,所以人体细胞体外恶性转化对研究癌变原理,检     

翼螺旋转录因子FOXO1的DNA结合域的表达、纯化及结合特性

目的：探讨翼螺旋转录因子FOXO1的DNA结合域(FOXO1 DNA binding domain,FOXO1-DBD)的表达、纯化及与DNA的结合特性。方法：采用优化FOXO1-DNA的基因序列和低温诱导的方式实现FOXO1-DBD蛋白的可溶性表达,通过镍亲和层析及阳离子交换层析进行纯化,并经凝胶迁移实验(electrophoretic mobility shift assay,EMSA)验证FOXO1-DBD的DNA结合特性。结果：优化后的FOXO1基因在21 ℃时编码的蛋白大多以可溶性方式表达,通过两步纯化即可获得95%以上纯度的FOXO1-DBD蛋白,纯化的蛋白与含FOX家族DNA结合基序(G/ATAAACA)的DNA序列显示良好的结合特性。结论：建立了FOXO1-DBD蛋白高效表达、纯化的方法,验证了FOXO1蛋白在识别DNA上的复杂性。     

家兔MT—I基因克隆及其在大肠杆菌中的表达与分离

采用 RT- PCR方法扩增镉诱导后的家兔肝脏金属硫蛋白 - I(Metallothionein- I,MT- I)基因的 c DNA全长 ,克隆入原核融合表达载体 p QE4 0 ,转化大肠杆菌 M15。菌落印迹法检测阳性菌株 ;Western blotting分析重组融合蛋白的表达方式 ;经 SDS- PAGE电泳后 ,Im age Master VDS software分析融合蛋白诱导表达条件 ;并采用 Ni-NTA agarose纯化融合蛋白。结果发现 ,重组融合蛋白在原核细胞中表达存在可溶和不可溶 (包涵体 )两种形式 ,表达量随 IPTG诱导时间延长而增加 ,9h达高峰 (占菌体不溶性蛋白总量的 5 7.4 % ) ,经 Ni- NTA亲合层析纯化得到重组融合蛋白 ,为进一步分离目的蛋白单体并研制和开发这一产品提供了可靠依据     

鼻咽癌染色体3p14的精细等位基因缺失分析

目的：进一步明确鼻咽癌染色体3p14区区域等位基因杂合性丢失（loss of heterozygosity,LOH)的频率与共同缺失区规范,以便分离该区域内与鼻咽癌相关的候选抑瘤基因。方法：选择位于3p14的6个高密度微卫星多态标记,对32例鼻咽癌组织进行LOH分析。结果：71．88％（23／31）的鼻咽癌在至少1个位点发生LOH,丢失频率较高的3个位点是D3S1313（46．43％）、D3S1300（50．0％）和D3S1312（44．44％）,在存在丢失的23例患者中,8例表现为一个连续的非随机的LOH区域,其最小共同缺失区为D3S1313－D3S1312（约3．4个厘摩）。且该区域的缺失与鼻咽癌临床分期、EB病毒感染有明显关系。结论：鼻咽癌在3p14的最小共同缺失区位于D3S1313－D3S1312之间,该区域可能存在一个尚克隆的与鼻咽癌发生发展密切相关的抑瘤基因。     

人鼻咽癌细胞系HONE1的蛋白质双向凝胶电泳分析

目的：研究人鼻咽癌细胞系HONE1的蛋白质表达特征。方法：抽提鼻咽癌细胞系HONE1总蛋白,双向凝胶电泳（2－DE）分离、银杂显色,用凝胶成像仪和PDQUEST软件获取HONE1总蛋白的2－DE图像;根据获得的2－DE凝胶图像,从胶上切取分辨良好、染色较浓的蛋白质点,用胰蛋白酶原位水解,所获酶解肽段经基质辅助激光解吸飞行的时间质谱（MALDI－TOF－MS）测定Mr;以测得肽段Mr为肽质量指纹（PMF）,通过Pepldent软件搜索SWISS－PROT和TrEMBL数据库而识别该点对应的蛋白质。结果：建立了双向凝胶电泳分离总蛋白、质谱鉴定银染蛋白质点的方法,并鉴定出人鼻咽癌细胞系HONE1中表达较强的10个点相应的蛋白质。 结论：本研究为建立人鼻咽癌细胞HONE1的2－DE参考图和蛋白质数据库提供了有用的基础性研究资料,为进一步识别鼻咽癌特异性的蛋白质奠定了实验基础。