林县食管癌中p53基因突变与P^53高表达相关性的研究

用免疫组织化学染色和ＰＣＲ直接测序法分别检测了食管癌高发区林县食管癌组织中Ｐ５３蛋白表达水平和基因突变以及二者的相关性。在３３例食管癌标本中，２３例发现有Ｐ５３的高表达，１０例未发现可检测到的Ｐ５３蛋白，其阳性率为６９．７％。Ｐ５３基因第５→８外显子出现点突变和缺失者１２例，其频率为３６％。在１２例ｐ５３基因突变的病例中，９例均有Ｐ５３蛋白的高度表达，提示ｐ５３基因突变与Ｐ５３蛋白的表达密切相关，并是造成Ｐ５３高表达的重要原因之一。Ｐ５３突变和Ｐ５３蛋白表达在食管癌组织中发生的高频率说明：Ｐ５３的改变是食管癌癌变过程中重要的生物学事件之一。     

C端带His标签重组MT1G真核表达载体构建及其在EC9706中的表达

目的:构建含MT1G cDNA的重组真核表达载体,并观察在人食管癌细胞EC9706中表达情况.方法:用PCR法从含MT1G基因cDNA质粒pACT2-MT1G中扩增获得目的基因片段,正向克隆入C端带Myc和6×His标签的真核表达质粒pcDNA3.1/Myc-His(-)中.经酶切及测序鉴定后,以脂质体法转染EC9706细胞,经G418加压筛选获得阳性单克隆细胞,用RT-PCR和蛋白质印迹法技术检测MT1G mRNA和蛋白的表达.结果:成功构建了真核表达载体pcDNA3 1/Myc-His(-)-MT1G,转染pcDNA3.1/Myc-His(-)-MT1G的EC9706细胞内有带His标签MT1G融合蛋白表达.结论:获得了人MT1G重组载体和稳定表达带His标签MT1G融合蛋白的EC9706细胞株,为进一步研究MT1G的功能奠定了基础.     

人MT1H 基因对肺腺癌细胞A549 增殖的影响及其机制

 目的 研究外源性人金属硫蛋白1H（MT1H）基因稳定转染对肺腺癌细胞A549生长的影响及其机制。方法 构建MT1H基因真核表达质粒pcDNA3．1（-）-MTIH，以脂质体法转染A549细胞，经G418筛选，获得阳性单克隆细胞。用RT-PCR和Western blot技术检测转染前后MT1H mRNA和蛋白表达，MTT实验检测其增殖能力的变化，流式细胞仪分析细胞周期时相分布。然后RT-PCR检测cy-clinD1的表达。结果 MT1H在A549细胞中获得表达。与未转染组和空质粒转染组比较，pcDNA3．1（一）～MT1H转染组细胞增殖速度明显增快，G0／G1期细胞减少，S期细胞增多，cyclinD1 mRNA水平明显升高。结论 MT1H能够促进肺腺癌细胞A549增殖，可能和上调cyclinD1促使细胞进入S期增多有关。     

绿青霉菌(Penicillin viridicatum)长期喂小鼠致癌性的初步报告

本文初步报告,绿青霉菌长期喂小鼠的致癌作用。实验用 ICR瑞士小鼠,共分三组;(1)对照组:共41只小鼠(雄21,雌20),喂以纯化食物。(2)实验1组:共98只小鼠(雄64,雌34),喂以纯化食物,并在食物中加入7.5％绿青霉菌的     

DR5在TRAIL诱导Jurkat细胞凋亡中的作用

目的：研究DR5在介导TRAIL凋亡信号中的作用。方法：用含人DR5细胞外全长结构域重组DR5免疫BALB／C小鼠，制备抗DR5单克隆抗体；流式细胞仪检测Jurkat细胞表面DR5表达水平；采用TRAIL凋亡检测试剂盒，检测Jurkat细胞凋亡率及抗DR5单克隆抗体对TRAIL诱导细胞凋亡的阻断率。结果：DR5在Jurkat细胞表面的表达率为94．83％，TRAIL和抗TRAIL单克隆抗体能够诱导Jurkat细胞凋亡，呈现明显的剂量相关性，TRAIL浓度在50-100ng/ml时，杀伤率达90％以上。预先用抗DR5单克隆抗体与Jurkat细胞作用后，TRAIL对Jurkat细胞的杀伤功能几乎完全被mAb所阻断，其平均阻断率达90．49％。结论：DR5在TRAIL诱导Jurkat细胞凋亡中起着十分关键的作用。     

子宫内膜癌中MTS1/p16基因甲基化的研究

ｐ16基因甲基化是ｐ16基因功能失活的一个重要原因。我们采用ＰＣＲ为基础的甲基化测定方法对子宫内膜癌中ＭＴＳ1/ｐ16基因的甲基化进行了检测 ,以了解ｐ16基因甲基化与子宫内膜癌发生、发展的关系。一、材料与方法1 标本来源 :46例子宫内膜癌组织、10例正常组织和 7例癌组织均取自我院妇瘤科手术或刮宫标本。患者术前未接受放疗、化疗或激素治疗。2 ＤＮＡ提取 :参照《分子克隆》一书提取高分子量ＤＮＡ。3 引物设计 :根据已知的ｐ16基因序列 ,我们在ｐ16第一外显子的两侧设计一对引物 ,这对引物包括ｐ16基因全部第一外显子及其启动区 ,…     

胰岛素对化疗药物5-氟尿嘧啶的增效作用及其机制

目的建立裸鼠人食管癌模型,观察胰岛素是否增强5-氟尿嘧啶(5-Fu)对裸鼠的化疗疗效并探讨其机制。方法免疫组织化学方法检测肿瘤组织中CyclinD1的表达。ELISA方法检测裸鼠血清中胰岛素样生长因子(IGF-1)和胰岛素样生长因子结合蛋3(IGFBP-3)含量变化。结果大中小剂量胰岛素(0.09、0.06、0.03u/20g)均可明显增强5-Fu的抑瘤作用(P<0.05),但并不增加5-Fu的毒副反应。胰岛素组与对照组相比,CyclinD1表达水平明显增多(P<0.05)。5-Fu组和联合用药组之间IGF-I和IGFBP-3水平差异无统计学意义(P>0.05)。结论在裸鼠人食管癌模型中,胰岛素能增强5-Fu对裸鼠人食管癌移植瘤的化疗疗效,CyclinD1表达水平增多在胰岛素增效机制中发挥着重要作用。而血清中IGF-I和IGFBP-3含量变化尚不能解释其增效机制。     

全反式维甲酸对EC9706细胞体外增殖抑制及诱导凋亡作用

目的:观察全反式维甲酸(ATRA)对食管癌细胞体外增殖抑制及诱导凋亡的作用.方法:应用不同浓度(1×10-6、1×10-5、5×10-5 mol/L)ATRA体外处理人食管癌细胞EC9706(ATRA1、ATRA2、ATRA3组),并设不加ATRA的对照组,倒置显微镜下观察细胞的生长状态,HE染色后光镜下观察细胞结构的改变,应用MTT法测定细胞生长抑制率,免疫组织化学技术检测凋亡相关蛋白Bax及Bcl-2的表达情况.结果:经ATRA处理后,ATRA3组与对照组比较,细胞生长速度减慢,群体倍增时间延长(P均＜0.05);光镜下可见细胞形态趋向良性分化,细胞质内成熟细胞器增多,生长抑制率增加(P＜0.05).与对照组比较,3个ATRA组细胞Bax蛋白表达增加、Bcl-2蛋白表达下降(P<0.01),且以ATRA2、ATRA3组为明显(P<0.05).结论:ATRA能有效抑制EC9706细胞增殖,其机制与Bax及Bcl-2蛋白表达调控有关.     

食管癌相关基因新作用伙伴p53的鉴定

残根残冠牙是临床上常见的大面积牙体缺损，以往大多数被拔除。近年来，桩核冠修复技术得到不断的发展和提高，使过去认为需拔除的残根残冠得以保留。但是，如果治疗技术掌握不好，操作不当，同样可致残根残冠保存修复失败。2003--2007年我院就诊患者中残根残冠保存修复失败23例，现报告如下。