iNOS基因和iNOS-VP1融合基因真核表达载体的构建及初步表达

目的 构建pcDNA3．1介导的诱导性一氧化氮合成酶（iNOS）的基因表达载体和pcDNA3．1介导的iNOS与柯萨奇病毒B组3型（CVB3）结构蛋白VP1融和基因的表达载体。方法 应用PCR扩增和DNA重组技术构建pcDNA3．1-iNOS和pcDNA3．1-iNOS—VP1表达载体；应用真核细胞转染技术及间接免疫荧光技术进行所构建的真核表达载体的初步表达和鉴定。结果 经PCR扩增技术用特异引物从质粒pKSiNOS分离编码iNOS开放阅读框架的cDNA，TA克隆于pMD19-T载体，根据设计引物时加入的酶切位点将插入片断亚克隆于表达载体pcDNA3．1；经PCR扩增技术用特异引物从质粒pCR2．1-VP1分离编码CVB3VP1结构蛋白的cDNA，TA克隆于pMD19-T载体，根据设计引物时加入的酶切位点将VP1亚克隆于iNOS的表达载体pcDNA3．1-iNOS，从而构建含有iNOS和VP1融合基因的真核表达载体。限制性内切酶分析、PCR鉴定和测序证实重组体peDNA3．1-iNOS和peDNA3．1-iN—OS—VP1插入片断的大小和方向正确且开放阅读框架的读码框不变；重组质粒peDNA3．1-iNOS和peDNA3．1-iNOS．VP1在HeLa细胞中均有表达，但表达效率较低。结论 获得含iNOS基因和iNOS—VP1融合基因的真核表达载体，并将重组质粒进行了初步表达，为体外iNOS抗CVB3作用的研究奠定了物质基础。     

硝酸甘油和硝酸异山梨酯抗柯萨奇B组3型病毒感染的体内实验研究

目的 研究硝酸甘油(glyeeryl trinatrate,GTN)和硝酸异山梨酯(isosorbide dinitrate,ISDN)抗柯萨奇B组3型病毒(CVB3)的作用,为GTN和ISDN今后在抗CVB性心肌疾病的临床应用提供实验依据.方法 用HeLa细胞扩增并收获CVB3后,测定CVB3的半数组织培养感染剂量(TCID50),BALB/c小鼠腹腔注射5000 TCID50的CVB3,同时给予GTN和ISDN,14天后处死小鼠,取心脏做常规组织病理学检查.结果 用GTN、ISDN保护的小鼠心肌病理标本每视野(x100)病灶数明显低于病毒 对照组,GTN组为0.89±0.18,ISDN组为1.25±0.22.与病毒对照组差异显著(P<0.05).结论 GTN、ISDN等临床常用于抗心绞痛的硝酸酯类药物具有明确的抗CVB3感染BALB/c小鼠心肌细胞的作用.     

表达miR-10a的重组腺病毒的构建与鉴定

Objective To develop a miR-10a-expressing recombinant adenoviral vector. Methods The EGFP gene in shuttle plasmid pDC316-EGFP-U6 was replaced by red fluorescent protein mCherry gene. Long DNA sequence coding miR-l0a was synthesized. After annealing, the double-stranded miR-10a-coding sequence was inserted into pDC316-mCherry-U6. The resultant pDC316-mCherryU6-miR-10a was co-transfected with adenoviral skeleton plasmid pBHGlox△E1, 3Cre into HEK293 cells. The replication-defective adenovirus Ad-miR-10a was purified, amplified, and tittered by plaque assay. The mCherry expression was detected by fluorescence microscope. The expression of miR-10a by Ad- miR- 10 a in HeLa cells was determined by RT-qPCR. Results The sequence of pDC316-mCherryU6-miR-10 a was confirmed by restriction enzyme digestion and sequencing. mCherry expression could be detected under fluorescence microscope. The titers of Ad-miR-10a was 1.8 × 107 pfu/mL, and the level of miR-10a expression in HeLa cells infected with Ad-miR-10a was 40 times higher than that with Admock. Conclusion A miR-10a-expressing recombinant adenovirs Ad-miR-10a has been successfully constructed. The strategy for artificial expression of siRNA is applicable for expression of miRNA.     

Vpr蛋白及HIV感染性心肌病研究进展

扩张型心肌病是HIV感染的常见并发症.Vpr是HIV-1的辅助基因vpr编码的蛋白,与HIV感染细胞的凋亡密切相关.大量存在于AIDS患者血循环中的可溶性Vpr可能导致AIDS患者心肌细胞凋亡.转基因鼠研究证实Vpr在心肌细胞过量表达会导致心率失常及充血性心力衰竭.上述研究提示Vpl与HIV心肌病的发生有密切关系.     

中国妇女宫颈癌组织中HPV16L_1基因的克隆与测序

中国妇女宫颈癌组织中ＨＰＶ１６Ｌ１基因的克隆与测序谷鸿喜钟照华凌虹郭淑元张凤民郭彩玲人乳头瘤病毒（ＨＰＶ）基因功能区主要由早期基因区（Ｅ区）、晚期基因区（Ｌ区）和调节区组成。Ｌ区包括Ｌ１和Ｌ２。Ｌ１基因编码病毒的主要衣壳蛋白，该蛋白能剌激机体产生保护...     

miR-122启动子序列的克隆及特异性分析

目的 miRNA- 122启动子序列的预测、克隆及特异性分析.方法 分别从肝癌细胞系Huh-7及HepG2中扩增出预测的miR-122启动子,并将其克隆至含荧光素酶(firefly luciferase,Fluc)报告基因pGL4.17质粒上,用重组质粒转染Huh-7、HepG2及HeLa细胞,分析启动子的特性.结果 成功预测并克隆出miR-122的启动子序列.重组质粒转染细胞后,启动子能够启动Fluc的表达.用含启动子P1的重组载体pGL4.17-P1转染HeLa细胞后,用两种荧光素酶检测体系测得重组载体中荧光素酶的表达水平显著高于对照组(t =0.000 21,P＜0.01及t=0.000 38,P＜0.01).结论 Huh-7、HepG2细胞中miR-122表达差异与启动子序列缺失无关.而受miR-122启动子调节的报告基因在非肝细胞系(HeLa)中也表达,表明miR-122启动子不具有肝细胞特异性.     

柯萨奇B1病毒VP1基因在大肠杆菌中的表达

目的：在大肠杆菌中表达柯萨奇B1（CVB1）病毒VP1蛋白。方法：用限制性酶切方法将CVB1 VP1基因从pMD18-T-VP1上切下，连续至pQE30构建原核表达系统pQE30-VP1，经酶切和PCR验证后转化至大肠杆菌BL21（DE3），用IPTG诱导目的基因表达，SDS－聚丙烯酰胺凝胶电泳和Western-blot检测VP1蛋白的表达，结果：酶切，PCR证明构建的原核表达系统携带方向正确的CVB1 VP1基因。SDS－PAGE和Westernblot;实验均可于33．0kDa处见到目的条带。结论：CVB1 VP1基因在大肠杆菌的成功表达开发新的血清学检测试剂提供了基础。     

加强基础七年制临床教学管理,培养医学拔尖人才

基础医学七年制的临床课程教学及实习是加强基础与临床相结合的重要环节,为以后医学科学研究中的基础研究和临床研究打下坚实基础.而临床教学管理工作是医学生临床教学实习工作顺利实施和完成的重要保障之一.为加强基础与临床相结合,培养拔尖基础医学人才,结合教学工作中的体会提出一些建议.     

基础医学七年制学生毕业实习的模式探索

毕业实习是七年制基础医学专业教育的重要环节.通过分析七年制基础医学专业的学制特点和学生素质,结合医学微生物学的专业特点,从课题选择和实施以及毕业考核标准等方面,对七年制基础医学专业的毕业实习改革进行了探索与实践,采用了课题组支持和个性化的讨论式实习指导,发挥七年制学生优势、开展创新性课题研究,取得了良好的效果.