糖皮质激素受体、激素抵抗与重度脓毒症

糖皮质激素(glucocorticoids,GCs)在临床上广泛用于炎症性疾病的治疗,同时具有抗休克、抗感染、免疫调节等作用。GCs通过糖皮质激素受体(glucocortieoid receptor,GR)的介导起作用。重度脓毒症是一种典型的全身性炎症反应,机体对儿茶酚胺类(CA)反应低下,静脉给予应激剂量GCs时,能改变病情。本文就GR的功能及Gcs应用于脓毒症治疗的利弊进行综述。     

实验课程改革与科研平台开放在医学生创新能力培养中的作用

医学作为一门实践性学科,实践能力培养是提高医学生,尤其是"5+3"一体化临床医学专业学生岗位胜任力的重要途径,也是创新素质教育的出发点和落脚点.郑州大学医学院多年来依托学校综合性大学的特点和学科优势,通过实验教学课程改革、开放实验教学及科研平台,充分发挥院系各级教育教学单位在培养医学生创新能力过程中的作用.在宽基础、厚...     

人脐血单个核细胞向神经细胞分化

目的：观察培养前后人脐血单个核细胞(MNCs)的形态学及免疫反应性变化,探讨其能否向神经细胞的分化及机制。方法：密度梯度离心脐血中单个核细胞,接种并用。EGF和bFGF刺激细胞生长,倒置显微镜下观察培养前后细胞形态变化,并行免疫细胞化学鉴定。结果：培养前脐血MNCs胞体小呈圆形,nestin阳性细胞、AP2阳性细胞散在分布(阳性率为1．5％和3．4％)无GFAP阳性细胞着色。培养14d后,细胞群中相邻细胞突起连成网状;AP2、GFAP染色阳性细胞成片状分布(阳性率33．5％和24．6％),未见nestin阳性细胞。结论：脐血细胞中可能有多能干细胞,经体外培养后能分化为具有一定形态的神经细胞。     

振幅整合脑电图在足月新生儿脑损伤监测中的应用价值

目的：探讨振幅整合脑电图(amplitude-integrated electroencephalography,aEEG)在足月新生儿脑损伤诊断及预后预测中的价值。方法选择2013年11月至2015年4月我院新生儿重症监护病房确诊的130例脑损伤足月新生儿,在入院第1、4、7天行aEEG监测,并将其结果与患儿临床近期预后进行分析。结果130例患儿aEEG波形背景识别：不连续电压109例,连续低电压12例,电静止4例;癫痫性活动33例,爆发抑制15例;睡眠-觉醒周期：32例成熟,54例不成熟,39例无。aEEG异常程度判定：轻度异常70例,重度异常60例,不同病种间差异无统计学意义(x2=6.176,P=0.19)。近期预后：aEEG轻、重度异常患儿分别死亡1例、12例,病死率差异有统计学意义(x2=12.760,P ﹤0.001);其余患儿随访至6月龄测发育商(developmental quotient,DQ),aEEG轻、重度异常患儿DQ≥85及DQ﹤85者差异有统计学意义(x2=33.195,P﹤0.001)。重度aEEG监测的敏感性68.75%、特异性78.68%、阳性预测值77.19%、阴性预测值70.58%。aEEG 波形异常程度、睡眠-觉醒周期与近期预后等级相关分析提示存在相关性(r=0.505,0.507,均P﹤0.001)。结论 aEEG可用于新生儿脑功能监测,有助于脑损伤早期诊断及近期预后评估。     

EGF和bFGF联合诱导人脐血MSCs向神经细胞分化过程中端粒酶活性的变化

目的 :检测重组人表皮生长因子 (EGF)和碱性成纤维生长因子 (bFGF)联合诱导人脐血间充质干细胞(MSCs)向神经细胞分化过程中端粒酶活性的变化 ,以探讨人脐血MSCs的增殖性和安全性 ,为其临床应用提供实验和理论依据。方法 :采集健康自然分娩产妇志愿捐献的脐血 ,密度梯度离心分离单个核细胞 ,接种于含体积分数为2 0 %胎牛血清的DMEM/F12中 ,对照组不加细胞因子 ,实验组加入EGF和bFGF ,终浓度均为 10 μg/L ,剩余细胞用液氮冻存。培养 2 4h后倾去全部液体以去除未贴壁细胞 ,以后每 3d全量换液 1次。分别收集培养 1d、4d、7d、10d、14d、2 1d的贴壁细胞和冻存细胞 ,将细胞密度调整一致 ,采用反转录 -多聚酶链反应 (RT -PCR)方法检测脐血MSCs培养前后各时间段的巢蛋白 (nestin)和神经丝亚单位M(NF -M)mRNA表达 ;采用端粒重复序列扩增 -酶联免疫吸附实验 (TRAP -ELISA)法检测人脐血MSCs向神经细胞分化过程中的端粒酶活性变化。结果 :RT -PCR检测发现 ,未培养的脐血细胞nestin、NF -MmRNA均呈阳性表达 ;培养后NF -MmRNA的表达随培养时间延长而增强(P <0 .0 1) ;实验组与对照组相比 ,细胞因子能明显促进NF -MmRNA的表达 (P <0 .0 1)。而nestinmRNA的表达随培养时间延长而下降 (P <0 .0 1) ,至第 7d已不能检出 ;T     

非诺贝特对LPC诱导的人脐静脉内皮细胞增生、凋亡、NO生成及XIAP mRNA表达的影响

目的:探讨非诺贝特对LPC诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)增生、凋亡、NO生成及X连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)mRNA表达的影响.方法:体外培养HUVECs株CRL-1730,分为正常对照组、LPC组、低浓度非诺贝特组(10 μmol/L)、中浓度非诺贝特组(50 μmol/L)、高浓度非诺贝特组(100 μmol/L).分别观测内皮细胞增生、凋亡、NO生成及XIAP mRNA表达的变化.结果:与正常对照组比较,LPC抑制CRL-1730细胞增生,促进凋亡,降低NO浓度,减弱XIAP mRNA的表达.非诺贝特干预后,CRL-1730细胞增生增强,凋亡减少,NO浓度升高,XIAP mRNA表达增强,且其作用呈时间-效应、浓度-效应依赖关系.结论:非诺贝特可通过促进XIAP表达,干预LPC对HUVECs的影响,使内皮细胞增生增强,凋亡减少,NO浓度升高,从而起到抗动脉硬化作用.     

miR-29a高表达促进大鼠骨髓间充质干细胞凋亡

目的检测外源性高表达miR-29a对骨髓间充质干细胞(MSCs)凋亡的影响。方法体外分离和培养大鼠MSCs,慢病毒介导外源性miR-29a在第四代MSCs中高表达,荧光定量PCR检测miR-29a表达,流式细胞术检测miR-29a高表达对MSCs凋亡的影响。结果慢病毒感染MSCs后,荧光定量PCR显示miR-29a表达显著增高,流式细胞术检测miR-29a高表达组和对照组(感染病毒空载体)的细胞凋亡率分别为(35.22±6.72)%和(14.21±3.27)%,坏死率分别为(20.01±5.68)%和(9.74±4.23)%,显示miR-29a高表达促进MSCs凋亡(P<0.05)。结论 miR-29a高表达促进MSCs凋亡。     

骨髓间充质干细胞向神经细胞分化过程中Tau蛋白表达量的变化

目的:观察体外诱导新生豚鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)分化为神经细胞过程中神经细胞Tau蛋白表达量的改变.方法:用H-DMEM培养基加胎牛血清(H-DMEM/FBS)体外培养新生豚鼠MSCs并传代扩增;分为实验组和对照组,实验组使用含细胞因子的培养基诱导MSCs向神经细胞分化,对照组加入不含细胞因子的培养基;用倒置显微镜观察2组细胞形态学改变;用ELISA法定量分析诱导分化第1、4、7、10天和第14天Tau蛋白含量的变化;免疫细胞化学法检测第14天神经元特异性烯醇化酶(NSE)和Tau蛋白的表达.结果:在细胞因子作用下豚鼠骨髓MSCs逐渐向神经细胞分化,在诱导第10天时形态上有典型神经细胞样改变;ELISA法检测发现Tau蛋白在诱导分化早期含量很低,随着诱导分化时间的延长,Tau蛋白含量逐渐升高,第10天趋于稳定,至第14天时Tau蛋白含量无明显增加;免疫细胞化学法可检测到NSE和Tau蛋白抗体阳性细胞.结论:间充质干细胞向神经细胞分化过程中Tau蛋白表达量逐渐升高,其稳定表达可能是神经细胞分化完成或成熟的标志之一.     

淀粉样前体蛋白转基因鼠神经干细胞分化中细胞凋亡及Tau蛋白磷酸化检测

目的:比较淀粉样前体蛋白(APP)转基因小鼠与同遗传背景的正常鼠的神经干细胞在分化过程中细胞凋亡、Tau蛋白变化及Tau[pS396]磷酸化的情况.方法:剪取新生的APP转基因小鼠尾尖,常规提取DNA,用PCR法检测动物是否携带有APP基因;而后分别取APP+鼠和正常鼠海马部位脑组织,按常规进行神经干细胞(NSC)的培养,并将纯化的NSC进行诱导分化,根据细胞来源不同分为APP+细胞组和正常细胞组,用线粒体膜电位法检测APP+细胞组、正常细胞组的细胞凋亡情况,用免疫荧光化学和免疫蛋白印记法测定2组细胞总Tau蛋白水平及Tau[pS396]磷酸化的变化.结果:APP+组细胞凋亡率明显高于APP-细胞(P<0.05).APP+细胞中总Tau蛋白和Tau[pS396]的磷酸化水平明显高于APP-细胞组(P<0.05).结论:APP+转基冈鼠神经干细胞分化中细胞凋亡率明显增加,细胞内Tau蛋白和Tau蛋白磷酸化水平增高.