糖尿病足溃疡的系统治疗

对糖尿病患者进行药物治疗，控制血糖；改善血液循环、神经病变，抗感染治疗；将糖尿病足分为四期，分期实治。结果13例创面换药愈合，51例植皮或/和皮瓣修复创面愈合，3例死亡。结论在全身治疗基础上、对创面进行分期干预和整形外科手术的系统治疗，是加快溃疡早期愈合、缩短病程、降低致残率，具有积极的临床意义。     

非诺贝特对LPC诱导的人脐静脉内皮细胞增生、凋亡、NO生成及XIAP mRNA表达的影响

目的:探讨非诺贝特对LPC诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)增生、凋亡、NO生成及X连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)mRNA表达的影响.方法:体外培养HUVECs株CRL-1730,分为正常对照组、LPC组、低浓度非诺贝特组(10 μmol/L)、中浓度非诺贝特组(50 μmol/L)、高浓度非诺贝特组(100 μmol/L).分别观测内皮细胞增生、凋亡、NO生成及XIAP mRNA表达的变化.结果:与正常对照组比较,LPC抑制CRL-1730细胞增生,促进凋亡,降低NO浓度,减弱XIAP mRNA的表达.非诺贝特干预后,CRL-1730细胞增生增强,凋亡减少,NO浓度升高,XIAP mRNA表达增强,且其作用呈时间-效应、浓度-效应依赖关系.结论:非诺贝特可通过促进XIAP表达,干预LPC对HUVECs的影响,使内皮细胞增生增强,凋亡减少,NO浓度升高,从而起到抗动脉硬化作用.     

大黄虫丸对大鼠肝纤维化不同期胶原等的影响

以CCl4 制造不同时期大鼠肝纤维化模型 ,观察大黄虫丸预防给药及肝纤维化不同时期治疗给药对肝脏胶原、血清层粘蛋白等的影响 ,结果发现大黄虫丸预防肝纤维化的发生作用不明显 ,治疗给药可降低LN、HA的含量 ,减少ECM的沉积 ,或增加胶原的降解 ,但并不能完全阻断肝纤维化的发生。     

EGF和bFGF联合诱导人脐血MSCs向神经细胞分化过程中端粒酶活性的变化

目的 :检测重组人表皮生长因子 (EGF)和碱性成纤维生长因子 (bFGF)联合诱导人脐血间充质干细胞(MSCs)向神经细胞分化过程中端粒酶活性的变化 ,以探讨人脐血MSCs的增殖性和安全性 ,为其临床应用提供实验和理论依据。方法 :采集健康自然分娩产妇志愿捐献的脐血 ,密度梯度离心分离单个核细胞 ,接种于含体积分数为2 0 %胎牛血清的DMEM/F12中 ,对照组不加细胞因子 ,实验组加入EGF和bFGF ,终浓度均为 10 μg/L ,剩余细胞用液氮冻存。培养 2 4h后倾去全部液体以去除未贴壁细胞 ,以后每 3d全量换液 1次。分别收集培养 1d、4d、7d、10d、14d、2 1d的贴壁细胞和冻存细胞 ,将细胞密度调整一致 ,采用反转录 -多聚酶链反应 (RT -PCR)方法检测脐血MSCs培养前后各时间段的巢蛋白 (nestin)和神经丝亚单位M(NF -M)mRNA表达 ;采用端粒重复序列扩增 -酶联免疫吸附实验 (TRAP -ELISA)法检测人脐血MSCs向神经细胞分化过程中的端粒酶活性变化。结果 :RT -PCR检测发现 ,未培养的脐血细胞nestin、NF -MmRNA均呈阳性表达 ;培养后NF -MmRNA的表达随培养时间延长而增强(P <0 .0 1) ;实验组与对照组相比 ,细胞因子能明显促进NF -MmRNA的表达 (P <0 .0 1)。而nestinmRNA的表达随培养时间延长而下降 (P <0 .0 1) ,至第 7d已不能检出 ;T     

人脐血来源神经元样细胞的分离与鉴定

目的 探讨人脐血单个核细胞(MNCs)体外培养后的神经元特有分子表达和形态特征。方法 密度梯度离心法分离脐血中单个核细胞,部分接种于培养瓶内,部分细胞接种在6孔培养板内。倒置显微镜下观察培养细胞形态变化。RT-PCR方法检测MNCs培养前后神经细胞标志物nestin、NF-M及MAF2 mRNA的表达,培养14d后行免疫细胞化学鉴定。结果 培养前脐血MNCs胞体小呈圆形,神经干,前体细胞特异性抗体nestin阳性细胞、神经元特异性抗体MAP2和NF-M阳性细胞散在分布,阳性率分别为1．5％、3．4％和2．5％。培养14d后,倒置显微镜下可见一些有多个粗长突起的细胞群,相邻细胞突起连成网状;免疫细胞化学检测MAP2、NF-M染色阳性细胞成片状分布,阳性率分别为27．6％和21．7％。RT-PCR检测脐血单个核细胞nestin、NF-M及MAP2基因表达呈阳性,培养14d后上述基因表达上调。结论 脐血细胞中可能沉寂有神经(干)前体细胞,经体外培养后能分化为具有一定形态的类神经细胞。     

EGF和bFGF诱导骨髓间充质干细胞向神经细胞分化后对Tau和神经元特异性烯醇化酶表达的影响

目的：观察表皮细胞生长因子（BGF）、碱性成纤维生长因子（bFGF）体外诱导骨髓间充质干细胞（MSCs）分化为神经细胞后,神经元微管相关蛋白Tau和神经元特异性烯醇化酶（NSE）的表达。方法：取P4代MSCs分为EGF、bFGF和EGF＋bFGF及对照组;免疫细胞化学法检测Tau蛋白和NSE表达,ELISA法分析各组细胞Tau蛋白含量。结果：免疫细胞化学检测显示EGF＋bFGF811Tau蛋白和神经元特异性烯醇化酶NSE阳性细胞率最高,bFGF组、EGF组和对照组依序递减;各组Tau蛋白含量结果与Tau蛋白阳性细胞率一致。结论：EGF和bFGF均可促进MSCs向神经细胞分化,并表达Tau蛋白和NSE,二者具有协同作用。     

miR-29a高表达促进大鼠骨髓间充质干细胞凋亡

目的检测外源性高表达miR-29a对骨髓间充质干细胞(MSCs)凋亡的影响。方法体外分离和培养大鼠MSCs,慢病毒介导外源性miR-29a在第四代MSCs中高表达,荧光定量PCR检测miR-29a表达,流式细胞术检测miR-29a高表达对MSCs凋亡的影响。结果慢病毒感染MSCs后,荧光定量PCR显示miR-29a表达显著增高,流式细胞术检测miR-29a高表达组和对照组(感染病毒空载体)的细胞凋亡率分别为(35.22±6.72)%和(14.21±3.27)%,坏死率分别为(20.01±5.68)%和(9.74±4.23)%,显示miR-29a高表达促进MSCs凋亡(P<0.05)。结论 miR-29a高表达促进MSCs凋亡。     

淀粉样前体蛋白转基因鼠神经干细胞分化中细胞凋亡及Tau蛋白磷酸化检测

目的:比较淀粉样前体蛋白(APP)转基因小鼠与同遗传背景的正常鼠的神经干细胞在分化过程中细胞凋亡、Tau蛋白变化及Tau[pS396]磷酸化的情况.方法:剪取新生的APP转基因小鼠尾尖,常规提取DNA,用PCR法检测动物是否携带有APP基因;而后分别取APP+鼠和正常鼠海马部位脑组织,按常规进行神经干细胞(NSC)的培养,并将纯化的NSC进行诱导分化,根据细胞来源不同分为APP+细胞组和正常细胞组,用线粒体膜电位法检测APP+细胞组、正常细胞组的细胞凋亡情况,用免疫荧光化学和免疫蛋白印记法测定2组细胞总Tau蛋白水平及Tau[pS396]磷酸化的变化.结果:APP+组细胞凋亡率明显高于APP-细胞(P<0.05).APP+细胞中总Tau蛋白和Tau[pS396]的磷酸化水平明显高于APP-细胞组(P<0.05).结论:APP+转基冈鼠神经干细胞分化中细胞凋亡率明显增加,细胞内Tau蛋白和Tau蛋白磷酸化水平增高.     

骨髓间充质干细胞向神经细胞分化过程中Tau蛋白表达量的变化

目的:观察体外诱导新生豚鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)分化为神经细胞过程中神经细胞Tau蛋白表达量的改变.方法:用H-DMEM培养基加胎牛血清(H-DMEM/FBS)体外培养新生豚鼠MSCs并传代扩增;分为实验组和对照组,实验组使用含细胞因子的培养基诱导MSCs向神经细胞分化,对照组加入不含细胞因子的培养基;用倒置显微镜观察2组细胞形态学改变;用ELISA法定量分析诱导分化第1、4、7、10天和第14天Tau蛋白含量的变化;免疫细胞化学法检测第14天神经元特异性烯醇化酶(NSE)和Tau蛋白的表达.结果:在细胞因子作用下豚鼠骨髓MSCs逐渐向神经细胞分化,在诱导第10天时形态上有典型神经细胞样改变;ELISA法检测发现Tau蛋白在诱导分化早期含量很低,随着诱导分化时间的延长,Tau蛋白含量逐渐升高,第10天趋于稳定,至第14天时Tau蛋白含量无明显增加;免疫细胞化学法可检测到NSE和Tau蛋白抗体阳性细胞.结论:间充质干细胞向神经细胞分化过程中Tau蛋白表达量逐渐升高,其稳定表达可能是神经细胞分化完成或成熟的标志之一.