ZD1839对A549细胞EGFR及其下游信号分子表达的影响

 目的 研究ZD1839对A549细胞EGFR基因及其下游信号通路的影响。方法 利用MTT法检测ZD1839对A549细胞的生长抑制作用，Real-Time PCR检测EGFR及其下游信号分子表达的影响。结果 ZD1839可显著抑制A549细胞的生长，IC50在10 μmol／L左右。加入ZD1839后A549细胞EGFR基因表达为不加ZD1839的1.10倍，Ras基因为1.09倍，MAPK为0.521倍，PI3K为0.164倍，Akt为0.253倍。ZD1839对A549细胞的EGFR、Ras基因表达无影响，使MAPK、PI3K、Akt表达下调。结论 ZD1839抑制EGFR酪氨酸激酶活性，通过影响其下游PI3K/Akt、MAPK信号通路抑制A549细胞生长。     

微波固化保肢术对骨肉瘤患者Th1/Th2漂移的逆转

目的：研究微波组织固化保肢技术对患者免疫功能的影响。方法：应用放射免疫分析法以及酶联免疫分析法检测20例行微波组织固化保肢术组骨肉瘤患者及20例其它手术组患者手术前后血清IL－2,IL－4,IL－6,IL－10,IL－12的含量,应用流式细胞仪检测患者淋巴细胞亚群的变化。结果：与正常对照相比,骨肉瘤患者CD4^ T细胞,血清中IL－2,IL－12减少（P＜0．01）,CD8^ T细胞,IL－10,IL－4,IL－6含量升高（P＜0．01）,CD4／CD8比值降低（P＜0．01）,患者免疫功能受到抑制;术后30天截肢组及保肢组CD4^ T细胞,血清中IL－2,IL－12均升高,CD8^ T细胞,IL－10,IL－4,IL－6含量降低（P＜0．01）,CD4／CD8比值升高（P＜0．01）,患者免疫功能较术前改善;与截肢组比较,保肢组患者CD4^ T细胞、IL－2,及CD4／CD8比值30天上升幅度明显高于截肢组（P＜0．01）,CD8^ T细胞,IL－4,IL－6 30天降低幅度明显高于截肢组（P＜0．01）。IL－2,IL－12与CD4^ 细胞成正相关,IL－4,IL－6,IL－10与CD4^ T细胞成负相关。结论：微波固化保肢术可以加速逆转骨肉瘤患者Th1/Th2和Th2漂移,增强患者的免疫功能。     

软骨肉瘤患者Th1/Th2的变化

目的观察软骨肉瘤患者T淋巴细胞亚群中Th1/Th2的变化,为细胞因子免疫治疗提供依据。方法应用放射免疫分析法以及酶联免疫分析法检测32例软骨肉瘤患者血清中IL-2、IL-4、IL-6、IL-10、IL-12的含量,检测外周血单个核细胞在有或无植物血凝素(PHA)存在情况下培养上清中IL-2、IL-4含量。结果软骨肉瘤患者血清及培养上清中IL-2、IL-12减少(P＜0.001),而IL-10、IL-4、IL-6含量增加(P＜0.01),在使用PHA刺激时,患者淋巴细胞分泌IL-2能力显著降低,而IL-4显著升高。结论软骨肉瘤患者体内存在有Th1/Th2平衡失调,其中Th1亚群功能抑制,Th2亚群功能亢进。     

不同分期的成骨肉瘤患者免疫学的变化

目的评价成骨肉瘤患者临床分期与免疫学变化的关系及意义。方法利用流式细胞仪检测120例成骨肉瘤患者淋巴细胞亚群、利用MTT法检测NK细胞活性,应用放射免疫分析法检测IL－2、TNF－α、β     

不同分期的成骨肉瘤患者免疫学的变化

目的：评价成骨肉瘤患者临床分期与免疫学变化的关系及意义。方法：利用流式细胞仪检测120例成骨肉瘤患者淋巴细胞亚群、利用MTT法检测NK细胞活性,应用放射免疫分析法检测IL－2、TNF－α、β2－微球蛋白的变化,应用ELISA法检测SIL－2R的改变。结果：随着Enecking分期的增高,患者NK活性、CD4、CD4／CD8、IL－2逐渐下降,CD8、sIL－2R、β2－MG、TNF－α逐渐升高P＜0．01;Ⅱa期成骨肉瘤患者机体免疫功能活跃,CD3、CD4、NK活性及IL－2、sIL－2R高于对照组P＜0．01,其余指标与对照组相同;Ⅰb及Ⅱb组患者各项指标改变明显;Ⅲ期肿瘤CD4、CD4／CD8、IL－2较Ⅱ期明显降低sIL－2R、TNF－α急剧升高P＜0．01。结论：成骨肉瘤患者免疫功能与疾病分期呈负相关,淋巴细胞亚群、sIL－2R、IL－2可作为监测患者病情改变的指标。     

体外构建的HSP70-肝癌抗原肽诱导抗原肽特异性免疫反应1

目的研究体外构建的HSP70-肝癌抗原肽复合物诱导针对肝癌的特异性免疫反应能力,为该复合物的临床应用奠定基础.方法在体外构建HSP70-肝癌抗原肽复合物,联合应用粒/巨细胞集落刺激因子(GM-CSF)及白介素-4(IL-4)直接从志愿者外周血中培养出DC;以HSP70、HSP70-肝癌抗原肽、抗原肽分别刺激DC,DC激活同源的T淋巴细胞产生细胞毒性T淋巴细胞(CTL),检测其杀伤T2细胞和肝癌细胞系的能力.结果HSP70-抗原肽、抗原肽均可诱导CD8+的抗原肽特异性CTL,而前者的诱导效果更强.结论体外构建的HSP70-抗原肽复合物具有免疫原性,HSP70可以增强抗原肽诱导特异性免疫反应的能力,HSP70-抗原肽复合物有可能作为肽疫苗用于临床肿瘤免疫治疗.     

恶性骨肿瘤患者巨噬细胞功能、NK细胞活性和T细胞亚群的变化

我们检测了３４例恶性骨肿瘤患者的巨噬细胞功能、ＮＫ细胞活性和Ｔ细胞亚群的变化,可为临床上恶性骨肿瘤的免疫治疗及病情判定,提供一定的实验依据。１材料和方法１．１研究对象患恶性骨肿瘤患者３４例,均为经ＥＣＴ检查而确诊的住本院患者,包括：骨肉瘤２０例、滑膜肉瘤１例、软骨肉瘤２例、恶性纤维组织细胞瘤１例、转移癌３例及骨巨细胞瘤７例。其中男２３例,女１１例,年龄１０～８５岁平均３０．０岁。此外,另选择本单位健康人３２例均经查体证实,作为对照组,平均年龄３５．５岁。１．２方法①Ｔ细胞亚群的检测〔１〕：取患者…     

RNA干扰表皮生长因子受体对骨肉瘤细胞凋亡的影响

目的:探讨小发夹RNA载体介导抑制骨肉瘤细胞中表皮生长因子受体(EGFR)的表达和对骨肉瘤细胞增殖与凋亡的影响.方法:构建pSilencer-EGFR短发夹状小干扰RNA(siRNA)真核基因表达载体,采用脂质体介导的方法将其转染到骨肉瘤细胞中,用Western印迹法、RT-PCR检测EGFR基因在骨肉瘤细胞中的表达;通过原位末端标记 (TUNEL)法,DNA片段化检测观察其对骨肉瘤细胞凋亡的影响.结果:成功构建pSilencer-EGFR短发夹状siRNA真核基因表达载体,转染特异性小发夹RNA质粒表达载体的骨肉瘤细胞中EGFR基因表达显著抑制(60%).与对照组比较,pSilencer-EGFR转染组骨肉瘤细胞培养 48 h后,DNA片段化检测出"DNA ladder"和TUNEL法显示细胞典型凋亡特征.结论:EGFR小发夹RNA质粒载体可显著抑制骨肉瘤细胞中EGFR基因的表达,促进骨肉瘤细胞凋亡,EGFR基因具有抑制凋亡的作用.     

应用蛋白芯片技术筛选肺腺癌化疗敏感血清蛋白标志物

目的 探讨肺腺癌化疗敏感患者与化疗耐药患者血清蛋白质质谱的不同,筛选肺腺癌化疗敏感血清蛋白标志物。方法 用WCX2蛋白芯片结合表面增强激光解析电离飞行时间质谱(SELDI-TOF-MS)技术,检测22例肺腺癌化疗敏感的患者和21例化疗不敏感的血清蛋白质谱,筛选出差异表达蛋白质。结果 发现利用M/Z(质荷比)为16083.50Da,7963.17Da,16121.50Da,15921.60Da,8066.79Da,8040.17Da和3394.57Da的7个差异蛋白可区分标准含铂类方案化疗敏感组和耐药组,联合m/z为7963.17Da与16083.50Da的差异蛋白建立预测模型,可预测肺腺癌标准含铂类方案化疗敏感/耐药性,其敏感性86.36%和特异性80.95%。结论 SELDI-TOF-MS技术是寻找肺腺癌化疗敏感血清诊断标志物的有效工具。     

siRNA抑制肺腺癌细胞DNA-DPKCS表达与放射敏感性关系研究

目的 探讨稳定表达的小干扰RNA(siRNA)抑制DNA依赖蛋白激酶催化亚基(DNA-DPKCS)表达对非小细胞肺癌细胞增殖、细胞周期及放射敏感性的影响.方法 构建DNA-DPKCS-siRNA莺组质粒转染肺腺癌细胞A549.流式细胞仪检测细胞周期和凋亡,成克隆实验测定细胞存活曲线.结果 建立了与A549细胞同源的DNA-DPKCS低表达细胞系549pRNA-DNA-DPKCS、阴性对照549pRNA-C细胞、空白549pSUPER细胞.与A549细胞相比549pRNA-DNA-DPKCS细胞的DNA-DPKCS mRNA(0.110:1.000;F=80.55,P<0.01)、蛋白表达水平(0.870:2.967;F=63.96,P<0.01)以及DNA-DPKCS活性(0.004:0.266;F=51.62,P<0.01)均显著降低.549pRNA-DNA-DPKCS细胞2 Gy存活分数、平均致死剂量、亚致死性损伤剂量均较A549细胞明显降低(0.25:0.76;F=996.86,P<0.01;1.42:1.62;F=17.41,P<0.05;0.06:1.00;F=68.92,P<0.01).DNA-DPKCS表达受抑后549pRNA-DNA-DPKCS细胞较A549细胞S期和G_2期细胞比例明显减少(24.5%:35.5%;F=4.83,P<0.05和10.7%:11.0%;F=32.04,P<0.01).结论 抑制DNA-DPKCS表达可提高肺腺癌细胞A549的放射敏感性,同时调控细胞周期时相分布.