应用SELDI-TOF-MS技术建立鼻咽癌诊断中的血清蛋白质指纹图谱模型

目的:检测鼻咽癌、耳鼻部良性疾病和正常人血清中蛋白质指纹图谱,筛选特异的蛋白质标志物,构建用于鼻咽癌诊断的分类树模型.方法:采用CM10芯片及SELDI-TOF-MS技术对30例鼻咽癌患者及24例对照组血清样本进行蛋白质指纹图谱检测分析,所得到的结果采用Biomarker Wizard和Biomarker Patterns System软件分析并建立用于鼻咽癌诊断的分类树模型,并用其余10例鼻咽癌患者和12例对照组标本进行双盲验证.同时用酶联免疫法(ELISA)检测两组的血清EB病毒VCA-IgA抗体,将诊断模型的判定结果通过与血清EB病毒VCA-IgA抗体检测结果相对比验证其对于临床的应用价值.结果:从两组血清中筛选出Mr为8559,15 115,15 836,15 937,16 089的5个差别有统计学意义(P<0.05)的标志蛋白,所建立的诊断模型对鼻咽癌诊断的准确率、灵敏度和特异度分别为98.1%(53/54),96.7%(29/30)和100%(24/24).双盲验证后的准确率、灵敏度和特异度分别86.4%(19/22),80.0%(8/10),和91.7%(11/12).灵敏度优于血清EB病毒VC...     

辅助性T淋巴细胞在抗肿瘤免疫反应中的作用

机体抗肿瘤免疫反应中起重要作用的是细胞免疫 ,近年来辅助性T淋巴细胞在抗肿瘤免疫反应中的作用越来越为人们所重视。Th细胞不仅可以分泌细胞因子调控肿瘤免疫 ,而且具有免疫记忆和直接杀伤肿瘤细胞的作用 ,随着一系列被Th细胞识别的肿瘤抗原被鉴定出来 ,人们对于Th细胞在抗肿瘤免疫反应中的作用有了进一步的认识。本文综述了近年来Th抗肿瘤作用机理及Th细胞表位研究进展     

增殖核抗原、热休克蛋白70在星形胶质细胞瘤组织中的表达及意义

目的　观察增殖细胞核抗原 (PCNA)和热休克蛋白 70 (HSP70 )在星形胶质细胞瘤组织中的表达 ,探讨PCNA ,HSP70与胶质细胞瘤生物学行为的关系及意义。方法　采用鼠抗人PCNA单克隆抗体 ,鼠抗人HSP70单克隆抗体对 5 0例胶质瘤手术标本进行了SABC免疫组化染色 ,检测其PCNA与HSP70蛋白的表达水平 ,并比较两者的相关性及其与胶质瘤病理分级的关系。结果　随着胶质瘤病理级别的升高 ,PCNA的表达强度增加 (P <0 0 5 ) ,Ⅰ～Ⅳ级胶质瘤的PCNA阳性率分别为 12 %、2 2 %、2 0 %、2 6 % ,Ⅰ～Ⅳ级胶质瘤的HSP70阳性率分别为 14%、2 2 %、30 %、34 %。PCNA与HSP70表达存在正相关 (P <0 0 5 )。结论　PCNA与HSP70蛋白的表达对分析判别胶质瘤的病理分级及生物学行为有一定意义。     

睾丸肿瘤抗原MAGE-E1基因片段的克隆及其在大肠杆菌中的表达

目的：克隆及表达人胶质瘤特异性抗原MAGE-E1基因片段。方法：从人胶质瘤细胞系BT-325提取总RNA，用RT—PCR从中扩增出MAGE-E1基因片段。将MAGE—E1基因片段插入载体pGEM—Teasy中，经全自动序列分析仪测序正确后，再克隆至表达载体pGEX—4T—2中，构建重组表达载体pGEX—4T—2—MAGE—E1，并转化大肠杆菌进行表达。结果：用1mmoL／L异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导5h，MAGE—E1蛋白的表达即达高峰。SDS—PAGE及凝胶密度扫描分析表明，表达出MT约41000大小的蛋白，占菌体总蛋白35％。结论：该基因片段的高效表达为进一步制备其抗体，以及制备肿瘤疫苗奠定了基础。     

稳定表达表皮生长因子受体293细胞系的建立及其生物学特性研究

目的建立稳定表达野生型表皮生长因子受体(EGFR)全长的293细胞系。方法通过脂质体瞬间转染的方法将含有EGFR全长的质粒转染293细胞系。利用抗生素筛选的方法使转染阳性的细胞扩增,单克隆化,进一步稳定传代。通过Western印迹的方法挑选高表达克隆,进而使用MTT法测细胞增殖活性。反复传代、冻存、复苏鉴定表达的稳定性。结果获得1株稳定表达EGFR的293细胞系,命名为WT293,且转染前后细胞生长速度存在差异。结论pcDNA3.1(-)载体能够作为稳定表达的载体用于筛选。稳定表达EGFR的293细胞系为配体受体相互作用及靶向EGFR的抗肿瘤药物作用机制的研究提供了实验素材和理论依据。     

突变体富集法检测表皮生长因子受体基因19外显子的缺失突变

目的:建立突变体富集法检测非小细胞肺癌中表皮生长因子受体(EGFR)基因19外显子的缺失突变,并比较突变体富集法与直接法的检出率.方法:构建EGFR野生型和突变型的载体,按不同的比例配成混合液.分别用突变体富集法和直接测序法检测混合液中EGFRl9外显子的缺失突变,确定两种方法的灵敏度.收集198例非小细胞肺癌住院患者的手术切除组织,分别采用两种方法对EGFR基因19外显子进行基因分析.结果:直接测序法可检测出1:10突变质粒和野生型质粒混合液中的突变型,突变体富集法可迭1:100.198例标本中,直接测序法检出杂合性缺失23例,突变率为11.6%,突变体富集法检测出杂舍性缺失4l例,突变率为20.7%.EGFR19缺失突变多见于女性,病理类型多为肺腺癌和腺鳞癌.结论:突变体富集法检测EGFR19外显子缺失突变敏感性高,可提高样本EGFRl9缺失突变的检出率.     

应用基因扫描方法快速检测EGFR基因19外显子缺失突变

目的:应用基因扫描法检测人表皮生长因子受体(EGFR)基因19外显子缺失突变.方法:(1)将EGFR基因19外显子缺失(delE746-A750)型及野生型基因分别克隆到T载体.并将含突变型基因及含野生型基因的载体按1:1、1:5、1:10、1:50、1:100、1:300的比例进行混合,用基因扫描法检测19外显子的缺失,以确定其灵敏度.(2)基因扫描法检测225例非小细胞肺癌患者的手术组织或穿刺标本:荧光标记EGFR基因19外显子的上游引物,PCR扩增目的片段,3100A测序仪进行基因扫描.Gene Scan Genotyper3.5软件分析结果.同时用直接测序法检测EGFR 19外显子的缺失突变.结果:(1)基因扫描法可测出1:100混合液中的突变型,灵敏度较高.(2)225例肺癌标本,可检测出27例(12.0%)缺失:直接测序法则检出25例(11.5%)缺失突变.结论:基因扫描法检测EGFR基因19外显子的缺失,方法简便,成本低廉,敏感度高,可查出1%的突变.     

人CD80基因转染U251瘤株细胞的实验研究

目的 构建编码人CD80基因的真核表达载体，转染神经胶质瘤细胞株U251，并检测CD80基因在U251中的表达。方法 PCR法扩增人类CD80基因的开放阅读框（ORF）全长，酶切法连接入真核表达载体pcDNA3．1。构建为重组质粒pcDNA3．1／CD80，双酶切及测序鉴定。利用脂质体法将pcDNA3．1／CD80转染U251细胞株，应用RT-PCR、流式细胞术、免疫细胞化学法、Western blotting等技术从细胞及分子水平检测人CD80分子在U251细胞表面的表达情况。结果 重组质粒pcDNA3．1／CD80双酶切可切出约900bp目的片段。测序结果和NCBI检索CD80序列吻合；RT-PCR检测到pcDNA3．1／CD80转染后的U251细胞中CD80mRNA表达；荧光显微镜下观察可见大量免疫荧光标记的绿色荧光细胞，检测转染效率约31．8％；Western blotting可检测到约60kD蛋白条带。结论 本实验成功构建了pcDNA3．1／CD80真核表达载体，并实现了在神经胶质瘤细胞株U251中的表达，为后续研究CD80的表达对肿瘤细胞免疫原性的影响以及制备神经胶质瘤肿瘤疫苗提供了重要的实验材料。     

SEREX—一种新的肿瘤抗原检测法

寻找特异性的肿瘤抗原一直是人们所奋斗的目标。为，一些新方法陆续应用于此领域内，获得了一些新的发现。本文主要介绍了一种新的应用自身血清抗体技术寻找肿瘤抗原的方法及其应用。     

静脉留置针用于CT增强扫描的护理体会

CT检查中造影增强技术的正确应用对CT的诊断起着非常重要的作用。高压注射器注药速度快,稳定,在增强扫描中被广泛应用。但由于其压力大,需要自动控制,保证给药途径的持续畅通,显得极为重要。我院自2005年3月试验性使用一次性静脉留置针代替常规9号头皮针配合高压注射器应用于CT增强扫描,取得了满意的效果,现观察如下：