微量泵注丙泊酚复合瑞芬太尼在腹腔镜胆囊切除术中的应用

目的 观察微量泵注丙泊酚复合瑞芬太尼全凭静脉麻醉用于腹腔镜胆囊切除术的有效性和安全性,并与异氟醚静吸复合全身麻醉进行比较.方法 将80例美国麻醉医师学会(ASA) Ⅰ～ Ⅱ级、拟行择期腹腔镜胆囊切除术(LC)的患者随机分为2组,Ⅰ组(静吸复合麻醉组)、Ⅱ组(丙泊酚、瑞芬太尼全凭静脉麻醉组).Ⅰ组以咪唑安定、芬太尼、丙泊酚、顺苯磺酸阿曲库铵行诱导插管,Ⅱ组诱导用药与Ⅰ组相同.Ⅰ组术中维持使用异氟醚,Ⅱ组则以微量泵注丙泊酚复合瑞芬太尼维持麻醉.各组均间断静脉注射顺苯磺酸阿曲库铵以维持肌肉松弛.观察各组患者入室后(T1)、诱导后(T2)、插管后最高(T3)、切皮前(T4)、充气后30 s(T5)、术毕清醒时(T6)各时点血压、心率变化,麻醉恢复情况(睁眼、拔除气管导管时间);采用口述描绘评分法(VRS)记录拔管后15、30、60 min伤口疼痛程度.结果 Ⅱ组患者T2时心率低于Ⅰ组(P<0.05),T6时心率高于Ⅰ组(P<0.05);Ⅱ组T2、T3、T5时的收缩压(SBP)均低于Ⅰ组(P<0.05),其余各时间点的心率、血压,2组间差异无统计学意义(P>0.05).Ⅱ组患者的术后清醒及拔管时间均短于Ⅰ组(P<0.05),Ⅱ组患者在拔管后15、30 min的VRS评分均高于Ⅰ组(P<0.05);而拔管后60 min,2组患者的VRS评分差异无统计学意义(P>0.05).结论 微量泵注丙泊酚复合瑞芬太尼静脉麻醉可以安全有效地用于LC手术,并可抑制插管时的应激反应,术中患者生命体征稳定,术后苏醒迅速,缩短患者手术室停留时间.     

HLA—A1相关肝癌抗原肽的初步研究

目的 寻找肝癌细胞表达的肿瘤抗原肽。方法 应用0．2mol/Lph3.0柠檬酸缓酰洗肝癌细胞系HHCC,经SephadexG-25过渡及反向高效液相色谱分离纯化,获得可与HLA－I类分子结合的不同组分短肽。将其与抗原加工缺陷的HLA－A2T2细胞反应,进行肿瘤细胞特异性表位测定,同时进行CTL杀伤鉴定。结果 获得4个可与HLA－A2结合的组分,其中2个可以激发较强的CTL杀作畈应。结论 肝癌细胞系HHCC中存在能够激发CTL特异性反应的肿瘤抗原肽,并证实上述寻找肿瘤抗原肽的技术路线具有可行性。     

热诱导鼠纤维肉瘤细胞凋亡

热诱导鼠纤维肉瘤细胞凋亡郭爱林１范清宇１张盈华２殷缨２张殿忠１（第四军医大学唐都医院：１骨肿瘤实验室，２临床实验室西安７１００３８）全军九五重点课题基金资助９６Ｚ０４８关键词凋亡肉瘤细胞周期热疗中图号Ｒ４５４０引言凋亡是广泛存在的生理与病理现象．...     

微波组织固化保肢术对恶性骨肿瘤患者淋巴细胞亚群的影响

目的：研究微波组织固化保肢术对患者免疫功能的影响。方法：通过直接免疫荧光法，用流式细胞术观察了５２例行微波组织固化保肢术的恶性骨肿瘤患者，４４例截肢患者手术前后淋巴细胞亚群的变化。     

荧光定量聚合酶链反应检测癌组织β-微管蛋白Ⅲ基因表达方法学的建立

 目的 建立荧光定量聚合酶链反应RT-PCR检测癌组织β－微管蛋白Ⅲ（β-tubulinⅢ）表达的方法。方法 提取组织标本的总RNA，反转录合成cDNA，PCR扩增产物连接到T载体，筛选重组体，将重组体再培养纯化，制备β-tubulinⅢ和看家基因β-actin的标准品，测序验证读码框的正确性。结果 以Ct值为纵坐标，5 ~ 7个不同浓度的β-tubulinⅢ和β-actin标准品的浓度对数值为横坐标制作标准曲线，线性相关系数均为0.99。结论 构建的两个基因β- tubulinⅢ和β-actin的标准品可以得到良好的标准曲线，且标准曲线显示好的线性关系。该法特异性好，灵敏度高，重复性好，可作为临床标准化的检测方法。     

右侧多发性胸膜结节的诊断与治疗:循证医学与经验医学的统一

疾病的正确诊断和合理治疗是患者和医务工作者共同的心愿，在广东省人民医院肿瘤中心，吴一龙教授指导临床医生应用循证医学理论进行肿瘤的多学科综合治疗，开展临床病例讨论。讨论会上各学科共同围绕一个病例或一个病种进行会诊，临床、病理、B超、放射影像等资料齐全，除相关科室提前准备的中心性发言外，到会人员各抒己见，气氛热烈。参会人员受益匪浅，提高了对疑难病例的诊治水平。为了将他们的诊治经验传播出去，让更多的，临床医生获益，我刊开辟“循证病例讨论”栏目，希望广大医务工作者关注此栏目。     

蛋白酪氨酸磷酸酯酶4A2基因的克隆、表达及活性鉴定

 【目的】获取人蛋白酪氨酸磷酸酯酶4A2（PTP4A2）基因并高效表达纯化,对于产物的体外活性进行测定。【方法】用RT-PCR技术,从肝癌细胞系HepG2的总RNA中,获得编码PTP4A2基因功能片段的DNA。测序后,通过酶切亚克隆至表达载体pGEX-4T-2,构建重组表达载体,并导入大肠杆菌E.coliBL21中,IPTG诱导表达重组的GST融合蛋白。对重组融合蛋白过谷胱甘肽琼脂糖柱进行纯化,western印记进行鉴定,质谱检测蛋白分子量。通过其对底物磷酸多肽的去磷酸化反应,鉴定其活性。【结果】获得编码肝癌细胞PTP4A2（全长氨基酸）的基因序列,测序结果与已发表的基因序列相一致。重组GST融合蛋白经western分析,在相对分子质量Mr=45000处,有特异的蛋白条带。重组蛋白经谷胱甘肽琼脂糖柱进行纯化后,得到了高纯度的融合蛋白,质谱检测其分子量为45470.6。底物多肽去磷酸化反应表明纯化产物具有较强活性。【结论】成功克隆人PTP4A2基因,并在E.coliBL21中高效表达,亲和层析后获得高纯度GST融合蛋白,质谱检测分子量与预期结果一致,纯化产物具有蛋白磷酸酯酶活性。     

RNA干扰技术抑制人肺腺癌A549细胞株EGFR基因表达

目的：建立质粒表达载体转录介导的RNAi技术,为开发阻断表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor, EGFR)信号通路的新途径和EGFR下游信号通路研究奠定基础。方法:化学合成siRNA-EGFR序列,构建并鉴定重组载体pSciencer 2.0 U6-shRNA-EGFR,转染A549人肺腺癌细胞株,免疫印迹和RT-PCR检测沉默效果,用四甲基偶氮唑盐比色法、DAPI染色法、Annexin V/PI 双标记法观察基因沉默后细胞生物学特性改变。结果：shRNA-EGFR使EGFR表达明显下调,转染细胞后,显著抑制细胞增殖,诱发凋亡。DAPI染色示细胞核着色增强,胞核缩小,核膜皱缩,染色质凝聚、边缘化、破碎;Annexin V/PI示凋亡早期细胞比例增高;细胞周期分析见 shRNA-EGFR各组 G0-G1期细胞比例增加,S期细胞比例减少。结论：化学合成法和体内转录质粒载体法介导的RNAi可序列特异性下调A549细胞株EGFR 基因转录和表达。shRNA-EGFR重组质粒通过下调EGFR 表达可抑制细胞增殖和诱发凋亡,部分逆转 NSCLC 细胞的恶性表型,有望成为NSCLC 基因治疗和功能研究的工具。     

变性高效液相色谱法检测多种途径获取的非小细胞肺癌组织表皮生长因子受体基因突变

背景与目的表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)是最重要的非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)治疗靶点,EGFR突变可预测酪氨酸激酶抑制剂(tyrosine kinase inhibitor,TKI)的疗效.DNA直接测序是检测EGFR突变最常用的方法,同时也作为突变检测的"金标准",但该方法耗时较长、所需组织量较多且敏感性较低.变性高效液相色谱法是一种快速、自动化、高敏感性的突变检测方法,本研究旨在探讨变性高效液相色谱法(denaturing high-performance liquid chromatography,DHPLC)快速检测NSCLC肿瘤组织EGFR基因突变的诊断价值.方法通过检测已知按不同比例混合的野生型及突变型EGFR质粒DNA,评价DHPLC法的准确性和敏感性.选取经多种途径获取的83例NSCLC患者的冻存肿瘤组织,提取DNA并PCR扩增EGFR外显子19、21,用DHPLC法检测并与直接测序法进行比较.结果当突变型质粒与野生型质粒按1:100混合时,仍可被DHPLC法显著检出,而直接测序法仅可检出1:10水平.83例NSCLC组织标本中,DHPLC法检出22例EGFR突变(突变率26.51%),3例直接测序法结果为野生型,余19例EGFR突变及61例野生型均与直接测序法结果相符.DHPLC法的敏感度为100%,特异度为95.31%,对经皮细针肺穿刺活检、淋巴结活检以及外科切除等途径获取的肿瘤样本均具有较高的敏感度、特异度.EGFR突变与性别、病理类型显著相关,与吸烟状态、年龄等无相关性.结论 DHPLC法可作为NSCLC患者EGFR基因型的初筛方法.