重组人肿瘤坏死因子对白血病细胞的作用

本文观察了重组人肿瘤坏死因子α(rTNF-α)对白血病细胞株U937,Raji和新鲜急非淋白血病祖细胞(CFU—L)生长的作用。证实TNF—α能够显著抑制自血病细胞的增殖,但不同的白血病细胞对TNF—α敏感性有一定的差异。细胞毒效应可能是其主要的作用机制。     

异基因造血干细胞移植后慢性移植物抗宿主病小鼠模型的建立和评价

目的 采用化疗药物预处理方案建立异基因造血干细胞移植的慢性移植物抗宿主病小鼠模型,并进行评价.方法 以BALB/cH-2kd小鼠作为供鼠,C57BL/6H-2kd小鼠为受鼠.对受鼠使用不同的化疗药物进行预处理[方案1:白消安20mg/(kg·d)×4d+环磷酰胺150mg/(kg·d)×2 d;方案2:白消安20mg/(kg·d)×4 d+环磷酰胺100mg/(kg·d)×2 d],然后经尾静脉注射不同剂量的供鼠脾细胞(6×107或4×107个)和(或)相同剂量的骨髓细胞(2×107个),建立慢性移植物抗宿主病小鼠模型;采用嵌合体分析、临床评分、组织病理学等进行评价.结果 采用白消安20mg/(kg·d)×4d-+环磷酰胺150mg/(kg·d)×2d的方案进行预处理、2×107个骨髓单个核细胞+6×107个脾单个核细胞进行移植可形成较高水平的供受者混合嵌合体.移植物抗宿主病发生时间多集中在供鼠脾细胞输注后30～90 d,化疗药物剂量大的预处理方案及移植细胞数高的移植组小鼠的临床评分和慢性移植物抗宿主病的发生率高于化疗药物剂量小的预处理方案及移植细胞数少的移植组(P＜0.05).模型小鼠肠、肝脏、皮肤、脾脏等器官出现细胞和结构异常、炎症细胞浸润等病理改变.结论 采用白消安和环磷酰胺预处理、给予2×107个骨髓单个核细胞+6×107或4×107个脾单个核细胞可形成较稳定的慢性移植物抗宿主病小鼠模型,为进一步指导临床治疗慢性移植物抗宿主病奠定了实验基础.     

广东汉族人群HLA-Cw多态性及单体型分析

目的 检测广东汉族人群HLA-Cw及HLA-A、B、DRB1基因频率,分析该人群HLA-Cw等位基因多态性及其单体型特点。方法 骨髓移植供者185例,抗凝血提取DNA,半量全自动PCR-RSSO分型检测HLA-A、B、Cw、DRB1基因型。结果 在分辨水平检出Cw等位基因11个,其中分布频率较高的依次为Cw^*03(0.2580)、Cw^*07(0.1887)、Cw^*01(0.1732)、Cw^*08(0.1070)。统计分析呈现显著连锁不平衡的HLA-Cw-A单体型7个,HLA-Cw-B单体型20个,HLA-Cw-DRB1单体型10个。结论 广东汉族群体HLA-Cw基因具有较为丰富的多态性,其与HLA-A、B、DRB1间连锁不平衡单体型具有地区性遗传特征。     

广东汉族人群杀伤免疫球蛋白样受体基因的表达频率

目的 检测杀伤免疫球蛋白样受体(KIR)基因在广东汉族人群中的分布。方法 对96例广东汉族以SSP法检测其KIR表型,统计不同KIR基因在人群中的表现频率,并与白种人、北印度人、日本人比较。结果 不同KIR的表现表率分别为:2DL1(0.85)、2DL2(0.12)、2DL3(0.58)、2DL4(1)、2DL5(0.24)、3DL1(0.96)、3DL2(1)、3DL3(1)、2DP1(0.97)、2DP2(0.98)、2DS1(0.10)、2DS2(0.30)、2DS3(0.02)、2DS4(0.28)、1D(0.65)、2DS5(0.19)、3DS1(0.23)。比较同一HLA配体相应的KIR,抑制性KIR频率均高于活化性KIR。与白种人和北印度人相比,除KIR2DS4外,广东汉族人群的活化性KIR频率均较低。结论 不同KIR基因在广东汉族人中有不同的表达频率。与其他人种比较,KIR基因的分布有着明显的种族差异。     

小鼠非清髓性半相合骨髓移植造血的重建

目的：探讨在非清髓性预处理条件下,纯化的供鼠NK细胞对MHC半相合小鼠骨髓移植（BMT）造血重建的影响。 方法：以CB6F₁^H-2d/b（BALB/c^H-2d×C57BL／6^H-2b）小鼠为受者,C57BL／6^H-2b小鼠为供者。60只受者小鼠根据不同照射剂量及不同NK细胞输注量随机分为10组,每组6只,经9.0、7.0、6.0 Gy 3个剂量⁶⁰Co照射。经9.0 Gy照射后分为单纯照射组（Ⅰ）、半相合BMT组（Ⅱ）。经7.0 Gy照射后分为单纯照射组（Ⅲ）、半相合BMT组（Ⅳ）、NK细胞移植1组（Ⅴ）和NK细胞移植2组（Ⅵ）。经6.0 Gy照射后分为单纯照射组（Ⅶ）、半相合BMT组（Ⅷ）、NK细胞移植1组（Ⅸ）和NK细胞移植2组（X）。在照射后4 h移植供鼠骨髓细胞,其中NK细胞移植1组（Ⅴ、Ⅸ）每只受鼠移植前输注纯化供鼠NK细胞1×106,NK细胞移植2组（Ⅵ、X）每只受鼠移植前输注供鼠NK细胞5×10⁵。以血常规、体重、生存期等变化为指标,观察60 d。 结果：①生存期：Ⅰ组为（5.83±0.98）d,其他组小鼠生存期均大于60 d。②移植后第10天时白细胞及血小板计数：Ⅴ、Ⅵ组WBC和PLT分别为（1.05±0.30）×10⁹•L^-1、（53.50±12.11）×10⁹•L^-1及（0.95±0.26）×10⁹•L^-1、（47.17±11.82）×10⁹•L^-1,明显高于Ⅲ、Ⅳ组（P<0.01）;Ⅸ、X组WBC和PLT分别为（0.98±0.34）×10⁹•L^-1、（50.67±12.58）×10⁹•L^-1及（0.88±0.29）×10⁹•L^-1、（45.33±14.36）×10⁹•L^-1,明显高于Ⅶ、Ⅷ组（P<0.05）。 结论：MHC半相合BMT小鼠移植前输注纯化的供鼠NK细胞促进其造血重建。     

广东汉族人群HLA-Cw多态性及单体型分析

目的检测广东汉族人群HLA．Cw及HLA-A、B、DRB1基因频率，分析该人群HLA-Cw等位基因多态性及其单体型特点。方法骨髓移植供者185例，抗凝血提取DNA，半量全自动PCR-RSSO分型检测HLA-A、B、Cw、DRB1基因型。结果在分辨水平检出Cw等位基因11个，其中分布频率较高的依次为：Cw*03(0．2580)、Cw*07(0．1887)、Cw*01(0．1732)、Cw*08(0．1070)。统计分析呈现显著连锁不平衡的HLA-Cw．A单体型7个，HLA-Cw-B单体型20个，HLA—Cw．DRB1单体型10个。结论广东汉族群体HLA-Cw基因具有较为丰富的多态性，其与HLA-A、B、DRB1间连锁不平衡单体型具有地区性遗传特征。     

造血干细胞移植中HLA-DP不相合对移植物抗宿主病的影响

【目的】探讨HLA DP座位免疫基因与造血干细胞移植 (HSCT)中移植物抗宿主病 (GVHD)发生程度的相关性。【方法】采用PCR SSP HLA DPB1基因分型方法和Thomas分度标准对已知HLA A、B、DR全相同的 12例同胞 (SiblingDonor,SD)、4例无关供者 (Unrelat edDonor,UD)和 1例父亲 (FatherDonor ,FD)捐髓的HSCT进行回顾性的调查。【结果】 12例SD中GVHD 0～Ⅲ°,HLA DPB1不相吻合率约为 4% ( 1/2 4) ,其中DP相同者的受者发生GVHD最强达到Ⅱ°。DP不同者仅为Ⅰ°,4例UD中GVHDⅡ°～Ⅳ°,HLA DPB不吻合率约为 37%( 3/8) ,其中 1例仅有DP不相同和DP相同受者的GVHD均为Ⅱ° ;而DP不相同基础上 ,1例CW 亦不相同为Ⅲ° ,另 1例DR低分辨率相同但高分辨率不相同 ( 0 40 4∶0 40 5 )和DQ不相同则发生Ⅳ°。父亲捐髓的受者GVHD为Ⅰ°,HLA DP为半相合。【结论】 17例造血干细胞移植回顾性分析显示 ,在HLA A、B、DR全相同的条件下 ,SD HLA DP配合与否与GVHD之间无相关性 ,UD HLA DP配合与GVHD显著关联 ;HLA非全相同的亲缘捐髓和无关捐髓的供受者应做HLA DPB1基因配型以准确预测和预防GVHD。     

BALB/c小鼠MHCI类基因的克隆与逆转录病毒载体的构建

目的　构建BALB/c小鼠MHCI类分子的逆转录病毒表达载体。方法　用RT -PCR从BALB/c小鼠脾细胞基因组中扩增BALB/c小鼠MHCI类分子H -2Dd的编码基因 ,克隆于载体pGEM -T中。经EcoRI和XhoI双酶切后 ,亚克隆于逆转录病毒载体pMSCV ,构建pMSCV -H2Dd重组逆转录病毒表达质粒 ,并进行酶切和序列测定鉴定。结果　用EcoRI和XhoI双酶切鉴定证实 ,H -2Dd基因正确插入载体pMSCV。H -2Dd的编码基因经序列测定证实 ,与文献报道完全一致 ,阅读框架与设计相符。结论　成功构建BALB/c小鼠MHCI类分子编码基因的逆转录病毒载体 ,为进一步研究MHC分子在移植免疫中的作用奠定了基础     

BALB/c小鼠MHCⅠ类基因的克隆与逆转录病毒载体的构建

目的：构建BALB/c小鼠MHCⅠ类分子的逆转录病毒表达载体。研究：用RT－PCR从BALB/c小鼠脾细胞基因组中扩增BALB/c小鼠MHCⅠ类分子H－2Dd的编码基因，克隆于载体pGEM-T中。经EcoRⅠ和XhoⅠ双酶切后，亚克隆于逆转录病毒载体pMSCV，构建pMSCV-H2Dd4重组逆转录病毒表达质粒，并进行酶切和序列测定鉴定。结果：用EcoRⅠ和XhoⅠ双酶切鉴定证实，H－2Dd基因正确插入载体pMSCV,H-2Dd的编码基因经序列测定证实，与文献报道完全一致，阅读框架与设计相符。结论：成功构建BALB/c小鼠MHCⅠ类分子编码基因的逆转录病毒载体，为进一步研究MHC分子在移植免疫中的作用奠定了基础。     

不同肿瘤细胞表面MICA的表达及NK细胞杀伤活性的研究

目的：观察不同肿瘤细胞表面MICA的表达及其对NK细胞杀伤活性的影响。方法：以体外培养的K562（人慢性髓原白血病细胞株）、MCF-7（乳腺癌细胞株）、HR-8348（直肠腺癌细胞株）、CNE-2（人鼻咽癌细胞株）、Hela（人宫颈癌细胞株）为靶细胞，流式细胞仪检测细胞表面MICA的表达，以K562细胞作为对照，应用LDH释放法检测不同效靶比情况下体外培养的NK细胞对靶细胞的杀伤活性。结果：K562、MCF-7、HR-8348、CNE-2、Hela细胞表面均表达MICA，体外杀伤试验表明NK细胞对上述肿瘤细胞均有杀伤活性，anti-MICA单抗可部分封闭NK细胞对靶细胞的杀伤活性。结论：NK细胞对K562、MCF-7、HR-8348、CNE-2、Hela细胞具有较高的杀伤活性，可作为一种生物治疗手段。