不同年龄的人成骨细胞体外培养生物活性测定

目的 对14例不同年龄取材人骨组织行成骨细胞原代培养,观察其生长及碱性磷酸酶(AKP)活性,为骨科疾病及组织工程学的研究寻找适宜的细胞来源。方法 取材于引产胎儿颅盖骨6例、青年及中年髂骨各4例,改良联合法培养,观察细胞形态及生长情况,Von kossa及AKP组化染色法鉴定细胞,AKP活性检测,比较不同年龄的取材及不同活性的胎儿细胞生长速度及AKP活性的差异。结果 改良联合培养法可在短时间内获得大量高纯度成骨细胞,细胞生长速度与取材年龄呈负相关,AKP含量由大到小顺序为青春期>胎儿>中年;细胞生长情况与胎儿产出后情况相关。结论 青春期来源的成骨细胞更适用于组织工程骨重建的需要,成骨细胞的成骨活性与人体身高增长趋势吻合。     

正丁醇法制备大鼠脂肪组织细胞膜TSHR

目的:利用正丁醇对大鼠脂肪组织细胞膜上的促甲状腺素受体(TSHR)进行提纯,以获得膜受体的均一水溶性溶液。方法:使用差速离心法获得大鼠含TSHR脂肪组织细胞膜碎片后,用正丁醇进一步提纯;采用SDS-PAGE和ELISA法鉴定所得蛋白完整性、生物学活性,并用BCA法测定相关蛋白含量。结果:正丁醇提纯的大鼠TSHR结构完整;经正丁醇提纯后的TSHR包被酶标孔孔间测定值变异系数较未经正丁醇提取组以及阳性对照组低。结论:经正丁醇提纯后的大鼠TSHR可以满足临床ELISA法检测Graves病患者血清TRAb的要求,同时可以降低酶标孔间测定值的误差。     

腹腔镜下肾血管平滑肌脂肪瘤单纯剜除术

目的探讨后腹腔镜肾血管平滑肌脂肪瘤单纯剜除术的手术方法及临床疗效。方法2005年6月～2006年12月,采用后腹腔镜途径对11例肾血管平滑肌脂肪瘤行单纯剜除术。术中沿瘤体边缘外用电钩或超声刀切开肾包膜,肿瘤突出部分沿边缘整块取出,深部剩余部分富脂瘤体组织由吸引器吸出,再以小方纱擦拭瘤窝表面,双极电凝止血。生物蛋白胶、止血纱布及可吸收线缝合肾脏创面。结果11例手术均成功完成,无中转开放者。平均手术时间84.5min(60～110min),平均术中出血量51ml(20～100ml),平均术后住院时间8.8d(6～14d),无并发症。术后肾功能正常。随访7～23个月(平均13.4月),影像学检查无局部肿瘤组织残留或复发。结论后腹腔镜肾血管平滑肌脂肪瘤单纯剜除术具有创伤小、出血少、恢复快、住院时间短等优点。     

腹腔镜手术治疗腹膜后纤维化致肾积水的疗效观察

目的:探讨腹腔镜手术治疗腹膜后纤维化致肾积水的疗效.方法:对4例(5侧)腹膜后纤维化致肾积水患者,在腹腔镜下利用不同器械对包裹压迫的输尿管逐步进行安全有序的分离、松解,直至输尿管被完全游离出,术前或术中将双J管置入输尿管内,于输尿管后缝合侧后腹膜,使其腹膜内化.其中1例患者通过术中换体位再次进行双侧输尿管松解并腹膜内化,2例患者此前各有一侧输尿管已在开放手术下进行松解治疗.对此2例患者进行自身对照分析.结果:开放手术和腹腔镜手术均能松解腹膜后纤维化引起的输尿管压迫,消除肾积水,促进肾功能恢复.腹腔镜手术创伤小,恢复快,术中出血极少,住院时间短,无手术并发症,但手术时间稍长,费用稍高.结论:腹腔镜手术可以对腹膜后纤维化包裹压迫的输尿管进行良好松解,输尿管留置内支架管并腹膜内化是一种疗效确实、患者易接受的微创治疗方法.     

特发性腹膜后纤维化并发肾积水

目的:探讨特发性腹膜后纤维化(IRF)并发肾积水的临床特征.方法:报告12例IRF并发肾积水患者的临床资料.12例均以腰、腹痛为首发症状.B超均发现肾积水及输尿管病变,3例发现腹膜后肿块.腹部CT均发现腹膜后肿块,对肿块的大小和部位均能明确.术前诊断准确率为83.3%.10例行输尿管松解 大网膜包裹或腹腔移位术,1例逆行置人输尿管支架管,1例肾穿刺造瘘.后2例情况好转后,仍行手术治疗.结果:10例随访无复发,1例因同侧肾积水复发行二次治疗,1例因对侧肾积水而行二次手术.结论:腰、腹痛患者应考虑到特发性腹膜后纤维化的可能;B超对肾积水敏感,腹膜后肿块依赖腹部CT检查,两者联合应用有利于诊断.输尿管松解 大网膜包裹或腹腔移位术是主要的有效的治疗手段.单侧腹膜后纤维化患者,随访应同时注意对侧发病的可能.     

大鼠bFGF基因荧光定量PCR检测方法的建立

目的 建立用荧光定量PCR方法检测大鼠bFGF基因mRNA水平.方法 以Trizol-步法提取新鲜骨组织总RNA,以Oligo(dt)18为引物逆转录产生eDNA并进行扩增,以T-A克隆法将纯化的目的片断与PGEM.T Easy载体连接成重组质粒并转化E.coli DH5a.采用碱裂解法提取重组质粒,经蓝白筛选、酶切、测序鉴定后,根据标准品建立标准曲线,由软件自动计算出待测样本中靶基因mRNA准确含量,并以靶基因和内参GAPDH mRNA含量的比值作为评价靶基因表达水平的指标.结果 由PGEM.T Easv.bFGF所构建的标准曲线线性关系良好(反应体系中含1×102-1×107拷贝大鼠bFGF基因分子时,扩增反应Ct值与拷贝数的对数成线性关系)、灵敏度高、特异性强、准确可靠.批内和批间重复性测定的变异系数分别为1.03%～4.59%以及2.24%～6.46%.结论 成功建立了用实时荧光定量PCR检测大鼠bFGF基因表达量的方法.     

老年性骨质疏松患者股骨近端骨质量的改变

目的:骨质疏松主要表现为骨质含量减少,钙量减少,骨质量定量评估为骨质疏松的治疗提供了客观依据,为此探讨老年性骨质疏松股骨近端骨质量的改变。方法:调查于2002-08/2004-03在广东省第二人民医院完成,采用骨密度测量仪(NorlandXR36,USA)对40例老年测试者股骨近端骨质量进行测量,同时进行血清钙和磷含量的检测。结果:股骨颈的骨密度值为(0.735±0.118)g/cm2,股骨转子的骨密度值为(0.584±0.121)g/cm2,血清钙值为(2.7±0.6)mmol/L,血清磷值为(0.99±0.40)mmol/L。结论:老年人股骨近端骨密度明显降低,易并发股骨颈或股骨转子间骨折。骨密度测量为骨质疏松提供定量评估依据,并为预防股骨近端骨折并发症的发生提供理论基础。     

股骨转子间骨折手术方式与术后早期康复干预对患肢功能恢复的影响

目的：探讨股骨转子间骨折的手术方式及术后早期康复干预对患肢功能恢复的作用。方法：对36例股骨转子间骨折病例中的2l例行Richard钉板内固定，15例行解剖型钢板内固定，术后进行康复治疗，包括持续被动运动(CPM)、主动抗引力运动、关节屈伸运动及关节抗阻力运动。过渡性部分负重行走，直至完全负重行走。结果：36例患者随访6个月～5年，患髋关节屈伸范围为伸至180&;#176;，屈至60&;#176;，骨折全部愈合，5例行走轻度跛行，Richard钉板固定组2例股骨头缺血性坏死。结论：股骨转子间骨折内固定术后行早期康复干预，可减轻肌肉萎缩及关节挛缩，有利于患肢关节功能恢复。     

重组大鼠TSHα亚基在大肠杆菌中表达的实验研究

目的：通过构建重组大鼠TSHα链原核表达系统及表达产物的纯化工作,获得重组GST-—rrTSHα融合蛋白,以备作为免疫原制备抗大鼠TSHα链的抗体。方法：提取大鼠垂体组织总RNA,RT—PCR扩增大鼠TSHa链编码序列,构建pGEX-3X／TSHα融合表达质粒转化人大肠杆菌中进行诱导表达。亲和层析纯化重组蛋白并以SDS—PAGE及Western Blot进行鉴定。结果：DNA序列分析表明重组pGEX-3X／TSHα质粒含有读码框正确的髑H仅链编码序列,纯化产物的SDS—PAGE及Western Blot结果表明所获得的目的蛋白与预期分子量相符且可与抗GST抗体发生免疫识别。结论：成功获得重组GST—rrTSHα融合蛋白,为下一步的抗体制备奠定了基础。     

临床免疫学与免疫检验课程设计性实验教学的探索与实践

以“酶联免疫吸附试验检测乙肝表面抗原方法的建立”设计性实验的实施过程为例对临床免疫学与免疫检验课程设计性实验教学中的选题、实施、总结及教学方法进行了探索与实践,进一步阐明了设计性实验对学生实践能力、观察能力、分析能力、解决问题能力、创新能力培养的重要作用。