糜酶抑制剂对肺纤维化的干预作用及其机制研究

目的 观察糜酶抑制剂对博莱霉素（BLM）致大鼠肺纤维化模型干预作用及对糜酶、转化生长因子-β1（TGF-β1）mRNA表达的影响,并探讨糜酶参与肺纤维化的机制。方法 健康SD雌性大鼠60只随机分3组：正常对照组（生理盐水）、模型组（博莱霉素）、干预组（博莱霉素＋糜酶抑制剂）,每组20只。分别在第7、14、21、28天处死,每组检测5只大鼠,观察支气管肺组织病理改变,支气管肺泡灌洗液（BALF）白细胞计数及分类,逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）法检测肺组织糜酶和TGF β1mRNA表达的含量。结果 ① 干预组、模型组较对照组肺泡炎程度明显加重,但干预组和模型组相差不明显;② 干预组、模型组较对照组纤维化明显增高,干预组较模型组纤维化明显减轻;③ 干预组和模型组大鼠的BALF中白细胞总数、巨噬细胞、中性粒细胞及淋巴细胞构成与对照组差异有统计学意义（P＜0,01）,干预组的中性粒细胞在第7和14天比模型组减少（P＜0,01,P＜0,05）;④ 模型组和干预组肺组织中糜酶、TGF-β1的mRNA的表达持续增强,与对照组比较差异有统计学意义（P＜0,01）,干预组比模型组表达明显减少（P＜0,01）。结论 糜酶抑制剂能减轻博莱霉素诱导的大鼠肺纤维化,其主要机制是通过下调糜酶、TGF-β1的mRNA的表达发挥作用。     

特发性肺纤维化支气管肺泡灌洗液抗氧化酶的研究

为探讨特发性肺纤维化支气管肺泡灌洗液(BALF)中抗氧化酶活性检测的临床意义。对18例特发性肺纤维化患者和9例正常对照者的BALF进行超氧化歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-px)活性进行检测,并分类计数BALF的细胞成份。结果:①研究组BALF中SOD和GSH-px活性显著低于正常对照组(P<0.05);②BALF细胞计数及各分类组成则明显高于对照组(P<0.05),其中以中性粒细胞数增高尤著(P<0.01);③研究组BALF中抗氧化酶活性与中性粒细胞绝对计数呈密切负相关(P<0.05)。从而得出,BALF中抗氧化酶活性的测定,结合细胞分份分析,有助于进一步探讨IPF发病机理和提供临床辅助诊断依据。     

柴胡皂甙d对特发性肺纤维化肺泡上皮细胞自噬作用机制研究北大核心CSCD

目的研究柴胡皂甙d(SSd)对特发性肺纤维化(IPF)中Ⅱ型肺泡上皮细胞(AT-Ⅱ)自噬的调控作用及其对纤维化程度的干预作用。方法转化生长因子β1(TGF-β1,5 ng/mL)诱导A549细胞48 h建立肺纤维化细胞模型,分别联合SSd低、中、高浓度(2.5、5、10μg/mL)、雷帕霉素(100 ng/mL)处理细胞。CCK8法检测各组细胞存活率,Western Blot法检测E-钙黏蛋白(E-cadherin)、Ⅰ型胶原蛋白(Col-Ⅰ)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Beclin1、微管相关蛋白1轻链3B-Ⅱ(LC3B-Ⅱ)/LC3B-Ⅰ、p62、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)通路活化蛋白表达水平,单丹磺酰尸胺(MDC)染色法检测细胞内自噬泡形成。结果与正常组比较,模型组细胞存活率下降(P<0.05),E-cadherin、Beclin1、LC3B-Ⅱ/LC3B-Ⅰ蛋白表达水平亦降低(P<0.05,P<0.01),Col-Ⅰ、α-SMA、p62、mTOR通路活性蛋白表达水平升高(P<0.05,P<0.01),胞质内荧光标记的自噬泡较少。与模型组比较,SSd高浓度组细胞存活率升高(P<0.05),SSd组及雷帕霉素组E-cadherin、Beclin1、LC3B-Ⅱ/LC3B-Ⅰ蛋白表达水平升高(P<0.05,P<0.01),Col-Ⅰ、α-SMA、p62蛋白表达水平降低(P<0.05,P<0.01),SSd高浓度组及雷帕霉素组p-mTOR/mTOR、p-AKT1/AKT1、p-S6K1/S6K1表达水平降低(P<0.05,P<0.01),SSd高浓度组及雷帕霉素组细胞质内荧光标记的自噬泡增多。与SSd低、中低浓度组比较,SSd高浓度组及雷帕霉素组Ecadherin、LC3B-Ⅱ/LC3B-Ⅰ表达水平升高(P<0.05,P<0.01),Col-Ⅰ、α-SMA、p62表达水平降低(P<0.05,P<0.01)。结论SSd可改善TGF-β1诱导的ATⅡ纤维化改变,可能通过抑制mTOR通路激活诱导细胞自噬发挥作用。     

肺纤维化形成中细胞凋亡与p16蛋白表达的关系

目的分析小鼠肺纤维化（PF）形成中细胞凋亡与p16蛋白表达的关系,探讨特发性肺纤维化（IPF）的发病机制。方法将72只小鼠随机分为模型组、对照组各36只,模型组采用博来霉素导致PF。实验后3、7、14、28d分别处死两组小鼠8只,取出肺组织,采用苏木精—伊红及马松三色染色观察其肺组织病理变化;免疫组化及Western blot法检测肺组织p16蛋白表达;末端细胞凋亡原位标记法检测肺组织细胞凋亡情况。结果与对照组比较,模型组肺组织出现典型纤维化改变,肺泡上皮细胞凋亡指数升高,肺组织p16蛋白表达随时间延长而增强,p16蛋白阳性细胞数量增多（P〈0.05或〈0.01）。相关分析显示,p16蛋白表达与肺泡上皮细胞凋亡呈正相关（P〈0.05）。结论 PF进程存在p16蛋白异常表达,过表达的p16蛋白可能介导肺泡上皮细胞凋亡过程,这可能是最终IPF发生、发展的机制之一。     

人胚肺成纤维细胞中HSP47与TGF-β1关系的探讨

目的分析在人胚肺成纤维细胞(HELF)中热休克蛋白47(HSP47)与转化生长因子-β1(TGF-β1)之间的关系。方法将HELF分为4组:对照组、热休克组、TGF组及联合组。采用WST-8法检测HELF细胞活力和Western blot检测各组细胞HSP47、Ⅰ型胶原(ColⅠ)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、波形蛋白(Vi mentin)表达情况。结果 TGF-β1能促进HELF的增殖(P<0.05);在TGF-β1作用下HELF中上述蛋白表达上调,在TGF-β1联合热休克反应的作用下上调更明显,而单在热休克反应后细胞HSP47表达显著,ColⅠ却未见明显增强(P>0.05)。结论 HSP47参与TGF-β1促HELF胶原合成,在肺纤维化中起着重要的作用。     

IL-33在肺纤维化小鼠的表达

目的探讨IL-33在肺纤维化模型小鼠的表达。方法小鼠气管内一次性注入博来霉素制备急性肺纤维化模型(BLM组,20只),气管内注入等容积生理盐水作为对照(对照组,20只)。HE染色观察肺部炎症程度,Masson三色染色法检测纤维化程度。TUNEL细胞凋亡试剂盒检测肺上皮细胞凋亡,免疫组化法及Western blot检测IL-33、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和上皮型钙粘蛋白(E-cad)的动态表达。结果与对照组比较,在肺纤维化过程中,BLM组E-cad的表达量在第14、28天均明显下降,IL-33的表达在第3、7、14天明显增加,α-SMA的表达在第3、7、14、28天明显升高(P<0.05)。TUNEL显示BLM组在第7天凋亡细胞最多。结论肺纤维化过程中存在上皮细胞过度凋亡及成纤维细胞增殖失控,同时伴有IL-33的动态表达。     

BALF中SOD,HA和IL—2对间质性肺病的临床价值

ＢＡＬＦ中ＳＯＤ、ＨＡ和ＩＬ２对间质性肺病的临床价值郑金旭贾友明顾伟光孙晓光赵惠扬支气管肺泡灌洗液（ＢＡＬＦ）成分分析对间质性肺病（ＩＬＤ）的研究意义近年颇受关注〔１〕。本研究应用双盲对照放免分析法（ＲＩＡ）检测ＩＬＤ患者ＢＡＬＦ中超氧化物岐化酶（...