Rho激酶-1在肺纤维化小鼠肺组织中的表达变化与上皮-间充质转化

目的 观察Rho激酶-1(Rock-1) 在博莱霉素（BLM）致小鼠肺纤维化中的表达变化, 探讨其在肺纤维化中与上皮间充质细胞转化(EMT) 的关系。 方法 将60只小鼠随机分成正常对照组（Cont组）, BLM致肺纤维化模型组, 地塞米松（DXM）治疗组。BLM组给予0.04ml BLM (5mg/kg)一次性气管内灌注,治疗组在BLM一次性气管内灌注后每天给予DXM 5mg/kg腹腔注射。各组分别于第3、7、14和28天各处死5只小鼠, 取肺组织, 做病理切片,HE染色观察小鼠肺炎症和纤维化的程度, 以样本碱水解法检测肺组织中羟脯氨酸(HYP)含量, 免疫组织化学检测不同实验组小鼠间充质细胞标记物α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA) 和上皮细胞标记物上皮钙黏素( E-Cad) 的表达,应用Western blotting法测定不同实验组小鼠Rock-1的表达水平。 结果 BLM组肺组织病理切片按时间顺序呈现由肺泡炎至纤维化的动态改变,肺组织胶原含量在第7天明显增加, 第28天达高峰, HYP含量测定动态增高。与Cont组比较、BLM组、DXM组E-Cad的蛋白表达降低,α-SMA蛋白表达增高。Western blotting结果显示,BLM组Rock-1的表达与正常对照组比较显著增高( P<0.05),第14天时达到高峰。DXM组Rock-1的表达逐步下降。 结论 Rock-1在小鼠肺纤维化中表达增高, 表明其可能是肺纤维化形成的促进因子, 且随着Rock-1的增高,α-SMA逐步增高 E-Cad逐步降低, 推测Rock-1在肺纤维化形成中的机制可能与促进EMT有关。     

IL-33／TLR4信号通路在A549细胞上皮间质转化中的作用

［摘要］目的: 探讨IL-33／TLR4信号通路在上皮来源的A549细胞上皮间质转化中的作用。方法: 培养A549细胞,用5 ng／mL的转化生长因子β1(TGF-β1)刺激A549细胞;在不同时间点(0,12,24,48 h)MTT法检测TGF-β1对A549细胞增殖的影响;荧光定量PCR方法检测IL-33信号通路中关键因子IL-33,Toll样受体4(TLR4)基因的表达改变;蛋白质印迹法检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、E钙黏蛋白(E-cad)、磷酸化蛋白激酶(p-AKT)的动态表达。结果： TGF-β1刺激A549细胞后,细胞增殖无明显变化(P>0.05),IL-33 表达量先升高,后下降(P<0.05);E-钙黏蛋白表达量逐渐下降,α-SMA表达量逐渐升高,TLR4先升高后下降(P<0.05);p-AKT表达量逐渐升高(P<0.05)。结论： IL-33／TLR4信号通路在A549细胞的上皮间质转化中发挥了重要作用。     

特发性肺纤维化免疫学指标的变化及临床意义研究

对２５例ＰＩＦ患者的血清免疫学指标（ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＭ、Ｃ３、ＣＨ５０和ＣＩＣ）进行了检测,并分析了１５例激素疗效与免疫学指标的关系。结果显示：（１）ＩＰＦ发病机理中存在体液免疫功能异常;（２）部分指标与病程密切相关;（３）ＩｇＭ和ＣＩＣＩ增高明显者,治疗有效率亦明显提高,本文提示：ＩｇＭ和ＣＩＣ对判断ＩＰＦ活动性和指导治疗有一定的临床意义。     

转化生长因子-β1诱导A549细胞向间充质细胞转化的作用研究

目的:观察重组人转化生长因子-β1(rhTGF-β1)对人肺上皮细胞株(A549)的转化作用。方法:将体外培养的A549用不同浓度的rhTGF-β1干预后,倒置显微镜观察细胞形态学的变化,用MTT法检测rhTGF-β1对A549增殖的影响。48 h收集蛋白用蛋白质印迹和间接免疫化学方法检测间充质细胞表型Fibronectin-EDA(Fn-EDA)表达变化。结果:rhTGF-β1诱导A549向间充质细胞形态转化,在体外对A549增殖无明显影响,上调间充质细胞表型Fn-EDA表达。结论:rhTGF-β1可诱导A549发生上皮细胞-间质转化(ephethlial-mesenchymal transition,EMT),支持肺上皮细胞发生EMT的观点。     

肺功能测定对结缔组织疾病肺损害的评价

分析４６例结缔组织疾病的肺功能特性，主要改变为肺容积减少，最大通气量降低，弥散功能障碍和低氧血症。Ｘ线胸片阳性组和阴性组之间，除动脉血氧分压存在差异外，其余指标的差异无显著意义。结论：肺功能测定对结缔组织疾病肺损害的早期诊断及病情判断均有重要临床意义。     

Ⅰ型和Ⅲ型胶原的测定对隐源性致纤维化性肺泡炎活动性诊断意义的探讨

应用免疫组织化学的过氧化酶-抗过氧化酶复合物(PAP)染色方法,对13例隐源性致纤维化性肺泡炎(CFA)病人的肺组织标本,进行Ⅰ型和Ⅲ型胶原的半定量测定。结合11例皮质激素治疗效果,分析其对疾病活动性的诊断意义。结果显示:①病程早期(≤3月者),肺组织中Ⅲ型胶原占优势,后期(≥24月者),以Ⅰ型胶原为主。两组间有显著差异(P=0.05);②激素治疗的11例中,有效6例,其Ⅲ型胶原/Ⅰ型胶原≥1;无效5例,两者之比小于1。两组间差异也有显著意义(P<0.05)。提示Ⅰ型与Ⅲ型胶原的半定量测定,有助于判断病程早晚和指导临床治疗,即具辅助诊断疾病活动性的价值。     

血管生成与肺纤维化的发生发展

特发性肺纤维化是一种持续发展且不可逆性的肺间质疾病, 以上皮细胞反复损伤, 伴有纤维化性异常修复为特征, 最终导致肺部结构错乱及蜂窝肺形成。其准确发病机制尚未完全阐明, 而在众多机制中, 血管生成也可能是促成IPF的始动因素之一。慢性进行性微血管重塑紊乱已被证实存在于IPF中, 本文就血管生成的诱因、调节因子、调控机制、生成规律、治疗靶点等方面与肺纤维化发生发展关系作一阐述。     

间质性肺疾病支气管肺泡灌洗液的酶活性研究

目的探讨支气管肺泡灌洗液（ＢＡＬＦ）多项酶活性与间质性肺疾病（ＩＬＤ）的关系。方法检测３０例ＩＬＤｓ：包括特发性肺纤维化（ＩＰＦ）１８例和结节病（Ｓａｒｃ）１２例与９例正常对照者的ＢＡＬＦ中超氧化歧化酶（ＳＯＤ）、谷胱甘肽过氧化物酶（ＧＳＨ－ＰＸ）、血管紧张素转换酶（ＡＣＥ）和乳酸脱氢酶（ＬＤＨ）活性，并分类计数ＢＡＬＦ细胞成份。结果（１）ＩＰＦ组ＢＡＬＦ中各项酶活性均与对照组间差异有显著性（ＳＯＤ和ＧＳＨ－ＰＸ降低，ＡＣＥ和ＬＤＨ升高）（Ｐ＜０．０５）；而Ｓａｒｃ组仅见ＡＣＥ明显增高（Ｐ＜０．０５）。（２）ＢＡＬＦ－ＡＣＥ与Ｓａｒｃ组淋巴细胞百分比及ＣＤ＋４／ＣＤ＋８比值均有显著线性相关（Ｐ＜０．０５）。结论ＢＡＬＦ中ＳＯＤ、ＧＳＨ－ＰＸ、ＡＣＥ和ＬＤＨ活性测定，有助于进一步探讨ＩＬＤ发病机理和提供辅助诊断依据，ＢＡＬＦ－ＡＣＥ对判断Ｓａｒｃ活动性有重要临床意义。     

IL-13促进小鼠肺成纤维细胞增殖及表达

目的 研究重组小鼠IL-13对肺成纤维细胞的作用及其机制.方法 取生长良好的NIH/3T3,给予无血清培养基饥饿24 h,在培养液中加入IL-13.MTT法、RT-PCR等方法 测定肺成纤维细胞的增殖及TGF-β_1、PDGF-AA、α-SMA等因子的表达.MTT法观察TGF-β单克隆抗体干预后,IL-13对NIH/3T3细胞增殖反应的影响.结果 与对照组相比,IL-13促进NIH/3T3细胞增殖(P<0.05).IL-13能够显著地促进NIH/3T3细胞中TGF-β1和PDGF-AA mRNA的表达,刺激NIH/3T3分泌α-SMA.TGF-β单克隆抗体能抑制IL-13诱导引起的NIH/3T3细胞增值.结论 IL-13能促进成纤维细胞的增殖,其可能的机制是通过促进成纤维细胞分泌TGF-β_1和PDGF-AA来发挥作用.     

TGF-β_1诱导肺泡上皮细胞间质转化

目的:通过观察TGF-β1诱导下A549细胞出现的细胞形态学和E-cad表达的变化,探讨上皮细胞-间质细胞转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)过程在肺纤维化发病机制中的作用。方法:体外培养A549细胞,以TGF-β1进行干预,收集不同时段的细胞,应用荧光实时定量PCR(RT-PCR)检测TGF-β1干预前后E-cad的mRNA表达变化;倒置相差显微镜观察细胞形态学的变化;间接免疫荧光观察E-cad蛋白表达的变化。结果:倒置相差显微镜观察到TGF-β1干预后A549细胞由鹅卵石状变为梭形,形态如同肌纤维母细胞。间接免疫荧光显示A549细胞的E-cad表达(红色荧光染色)随时间延长逐渐减少。RT-PCR显示E-cad的mRNA表达下调(P<0.05)。结论:TGF-β1在体外诱导肺泡上皮细胞向间质细胞转化,肺泡上皮细胞间质转化是肺纤维化的重要发病机制之一。