人α干扰素诱导骨肉瘤细胞Anoikis凋亡

目的: 恶性肿瘤细胞逃避Anoikis凋亡的特性是其原位侵袭和远处转移的一个重要原因.本文旨在研究应用人干扰素(IFN)α2a诱导骨肉瘤细胞出现Anoikis凋亡,并深入探讨其产生机理及信号传导途径.方法: 采用抑制接触培养法建立细胞Anoikis凋亡诱导模型.观测IFN-α2a诱导骨肉瘤细胞MG- 63产生的Anoikis凋亡.TUNEL法形态学检测MG- 63细胞凋亡,流式细胞仪定量检测细胞凋亡程度和细胞表面整联蛋白受体表达.特异性底物切开法检测半胱氨酸天门冬氨酸特异性蛋白酶 (cysteine aspartate-specific proteases, caspase)信号途径.结果: 人IFN-α2a可明显诱导骨肉瘤细胞MG- 63产生Anoikis现象,并诱导了MG- 63细胞caspase-8和caspase-3的活性,但IFN对整联蛋白亚单位α4,α5及αv无明显影响,上述整联蛋白封闭抗体对IFNα-2a诱导的MG- 63细胞Anoikis凋亡无明显影响.结论: 人干扰素α2a可以在体外通过调节细胞caspase信号途径,诱导骨肉瘤细胞MG- 63产生Anoikis现象,从而抑制骨肉瘤的转移.     

抗HPV16E6核酶和抗HPV18E6核酶的设计与表达

以核酶的锤头结构为模型，采用计算机软件针对ＨＰＶ１６Ｒ６、ＨＰＶ１６Ｅ６基因，设计了相应的ｒｉｂｏｚｙｍｅ。体外合成ｒｉｂｏｚｙｍｅ基因后，克隆于带自身修剪功能的原核质粒ＰＲＧ５２４中，构建成质粒ｐＲＧ１６ＨＲ、ｐＧＲ１８ＨＲ，为下一步研究抗１６ＨＲ，抗１８ＨＲ的体外活性效应，从而为探索以ｒｉｂｏｚｙｍｅ治疗ＨＰＶ相关性肿瘤的途径打下基础。     

UPLC-MS/MS法同时测定同仁牛黄清心丸中15个胆汁酸的含量

目的 建立同时测定同仁牛黄清心丸中15个胆汁酸成分含量的方法,并采用该法测定15批样品的含量。方法 以脱氢胆酸为内标,采用超高效液相色谱-串联质谱（UPLC-MS/MS）技术进行测定。色谱柱为Hypersil GOLD C18,以甲醇-0.1%甲酸溶液为流动相进行梯度洗脱,流速为0.2 mL/min,柱温为40℃,进样量为2μL;采用加热型电喷雾离子源,在负离子模式下进行平行反应监测模式扫描。采用SPSS 24.0软件对含量测定结果进行化学模式识别分析。结果 15个胆汁酸成分在各自检测质量浓度范围内与峰面积线性关系良好（R2均不小于0.998 9）,精密度、重复性、稳定性均良好（RSD均不大于5.49%）,平均加样回收率为93.8%～105.7%(RSD为0.5%～5.8%)。牛磺胆酸、7-酮-3α,12α-羟基胆烷酸、12-脱氢胆酸、甘氨胆酸、3-oxo-7α,12α-hydroxy-5β-cholanoic acid、牛磺鹅脱氧胆酸、3α-羟基-7-氧代-5β-胆烷酸、猪胆酸、牛磺脱氧胆酸钠、猪脱氧胆酸、胆酸、甘氨鹅脱氧胆酸、甘氨脱氧胆酸、鹅脱氧胆酸、脱氧胆酸的平均含量分别为670...     

栝楼桂枝汤对氧糖剥夺损伤皮层脑片的神经保护作用

目的 观察栝楼桂枝汤对氧糖剥夺损伤皮层脑片的神经保护作用.方法 将培养t4d的皮层脑片行氧糖剥夺损伤45min后,药物干预3d,采用碘化丙啶(PI)染色法检测皮层脑片损伤程度,微量酶标法检测脑片培养液上清中LDH的释放量.结果 与空白对照组比较,模型对照组PI荧光强度、LDH释放量明显升高,栝楼桂枝汤干预后,PI荧光强度、LDH释放量明显减少,呈剂量依赖性.结论 栝楼桂枝汤对皮层脑片氧糖剥夺后的神经损伤具有较好的保护作用.     

石斛合剂含药血清对高糖诱导小鼠足细胞损伤的保护作用

目的：探讨石斛合剂含药血清对高糖诱导的小鼠足细胞损伤的影响及作用机制。方法：体外培养小鼠肾小球足细胞(MPC5),筛选高糖造模浓度和时间及石斛合剂含药血清最佳给药浓度;将细胞分为正常组(5.5 mmol·L^-1葡萄糖+10%空白血清)、模型组(30 mmol·L^-1葡萄糖+10%空白血清)、石斛合剂含药血清组(30 mmol·L^-1葡萄糖+10%石斛合剂含药血清),铁死亡抑制剂(Fer-1)组(30 mmol·L^-1葡萄糖+10%空白血清+1μmol·L^-1 Fer-1)。采用试剂盒检测细胞中Fe²⁺、乳酸脱氢酶(LDH)水平;酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测细胞谷胱甘肽(GSH)、过氧化脂质(LPO)含量;荧光探针检测活性氧(ROS)水平;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测足细胞中肾母细胞瘤基因-1(WT-1)、结蛋白(Desmin)、长链脂酰辅酶A合成酶4(ACSL4)和谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4) m RNA表达水平...     

分泌型卷曲相关蛋白4在不同DNA错配修复功能状态Ⅱ期肠癌中的表达及意义

目的探究分泌型卷曲相关蛋白4（SFRP4）在DNA错配修复（MMR）功能正常与MMR功能缺陷的Ⅱ期结肠癌中的表达及 意义。方法收集新鲜的Ⅱ期结肠癌组织标本,并根据MMR 状态分为pMMR 和dMMR 组。利用Affymetrix Human oeLncRNA 基因芯片检测两组不同MMR状态结肠癌组织中差异表达的mRNA情况。通过q-PCR和Westernblot 技术检测 dMMR和pMMR肠癌组织、细胞株中SFRP4的表达并分析两组间表达差异情况;通过免疫组化技术检测增殖标志物Ki-67的表 达并分析SFRP4与Ki-67表达的相关关系。利用HCT116细胞株,干扰SFRP4的表达,通过流式细胞术检测干扰SFRP4前与干 扰后HCT116细胞株的凋亡率并分析其差异。结果PCR和Western blot的结果提示SFRP4在dMMR状态的肠癌组织、细胞株 中的表达明显高于pMMR的肠癌组织（P=0.014）、细胞株（P=0.0079）,免疫组化结果提示SFRP4与Ki-67蛋白在肠癌组织的表 达呈负相关关系（P=0.041）。siRNA干扰SFRP4的表达后HCT116细胞株凋亡率下降,包括早期凋亡（P=0.003）和晚期凋亡率 （P=0.024）。结论SFRP4在dMMR型肠癌表达较pMMR型表达增高,促进肠癌细胞凋亡、抑制增殖,可能有助于改善MMR缺 陷型Ⅱ期肠癌预后。     

全机器人下胰十二脂肠手术患者护理体会与探讨

近几年来,随着三维视觉系统的发明,机器人手术及特殊手术器械的应用,使机器人系统完成手术成功为现实.目前已经开展的普外手术包括:胆囊切除、胃底折叠、Heller肌切开术、胃旁路手术、胃大部切除术、结肠切除术、脾切除术、胰脏切除等[2].全机器人系统临床使用具有创伤小、疼痛轻、恢复快、外观美容效果等优势也得到越来越多医护人员及患者的认可.     

采用达芬奇机器人行腹部手术患者的围术期护理

目的探讨采用达芬奇机器人行腹部手术患者的围术期护理方法。方法回顾分析2008年6月至2009年12月在第二炮兵总医院采用达芬奇机器人行腹部手术治疗的75例患者的临床资料,并进行分析、总结护理经验。结果 75例患者中,术中中转开腹手术3例,中转率4.0%。患者术中失血量为100～200 ml,平均(153±43)ml;术后重症监护20～28 h,术后平均住院时间为(16.4±4.1)d。有1例患者出现胰-消化道吻合口漏;7例患者发生皮下气肿;7例皮肤急性压疮,其中骶尾部5例、足跟部2例。结论采用达芬奇机器人行腹部手术患者的围术期护理是保证其手术顺利进行的关键。     

噬菌体呈现技术研制特异性人抗骨肉瘤干扰素

目的利用噬菌体表面呈现技术研制高活性、特异性抗骨肉瘤干扰素。方法将干扰素IFNαlc／86DDNA插入噬菌体质粒载体pCANTAB5E,并构建噬菌体IFNαlc／86DAB环突变文库;通过在OS732细胞上竞争性亲合洗脱、MTT法对比检测抗肿瘤活性,筛选针对OS732细胞的高活性噬菌体-IFN突变体。结果获得2个噬菌体-IFN突变体,其抗OS732细胞增殖活性较突变母体分别提高4和16倍。结论αl型干扰素可在噬菌体表面正确折叠表达。这一技术可用于研制高活性特异性IFN。     

2型糖尿病大鼠模型中医证型演变的实验研究

目的观察不同时期糖尿病大鼠模型的证型属性,探讨其证型演变。方法选用Wistar大鼠,除正常对照组普食喂养外,余均高脂高糖喂养4周后,腹腔注射链脲佐菌素(STZ)2次制备糖尿病模型大鼠。将成模大鼠按血糖水平分层后随机分为模型组、增液汤组、生脉散组、肾气丸组。每组再根据用药时间不同分为、、期。每期予相应药物干预4周后,进行血糖、血脂、胰岛素、胰高血糖素检测和病理观察。结果期肾气丸干预效果优于其他各组;期生脉散干预能显著改善各指标;期增液汤干预优于其他药物干预组。病理观察发现增液汤组胰岛细胞趋于正常,未见岛内纤维化。结论此法所形成的糖尿病模型类似于人类2型糖尿病,其成模初期(期)偏于阴阳两虚,中期(期)偏于气阴两虚,后期(期)偏于阴虚。