人幽门螺杆菌热休克蛋白A亚单位重组蛋白纯化及免疫活性研究

热休克蛋白 (ｈｅａｔｓｈｏｏｋｐｒｏｔｅｉｎ ,Ｈｓｐ)为幽门螺杆菌 (Ｈｐ)共同的抗原成分 ,分为Ａ(ＨｓｐＡ)、Ｂ(ＨｓｐＢ)两个亚单位。目前 ,通过细菌培养获得大量Ｈｐ,并从中纯化出足量的亚单位抗原非常困难。因此 ,我们采用基因工程技术构建重组ＨｓｐＡ基因工程菌 ,并对ＨｓｐＡ重组蛋白纯化条件及免疫学活性进行研究。试验证明ＨｓｐＡ以包涵体形式表达。采用本室建立的包涵体洗涤、溶解方法进行处理 ,溶解包涵体后ＨｓｐＡ纯度大于6 0 % (Ａ级纯化 )。之后我们采用分步稀释法将ＨｓｐＡ复性。对ＨｓｐＡ的Ｂ级纯化选择ＱＳｅｐｈ…     

基于单个外周血浆细胞技术筛选MRSA人源性单克隆抗体的实验研究

目的建立耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(meticillin-resistant Staphylococcus aureus,MRSA)人源性单克隆抗体筛选方法。方法从52份重组MRSA多价亚单位疫苗的Ⅰ期临床研究受试者血液样本中筛选出抗体滴度高的血样,利用流式细胞术分选其外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC)中浆细胞,以mRNA为模板PCR扩增抗体重链、轻链可变区基因,通过重叠延伸PCR分别将将抗体重链、轻链可变区基因与CMV启动子、人恒定区及多聚A尾连接,构建成单克隆抗体线性表达载体,PEI瞬时转染293T细胞进行抗体表达。结果流式细胞术分选出1 120个浆细胞,筛选出了39个针对MRSA 5种保护性抗原α-溶血素(Hla)、铁离子表面决定蛋白B(Isd B)、金葡菌蛋白A(SpA 5)、肠毒素B(SEB)及锰离子结合蛋白C(Mnt C)的人源性单克隆抗体,ELISA结果显示抗体能与抗原蛋白结合。结论通过单个外周血浆细胞技术,成功筛选出了能够与抗原结合的MRSA人源性单克隆抗体,为研究MRSA治疗性人源性抗体奠定了良好基础。     

幽门螺杆菌双价亚单位分子内佐剂疫苗的构建表达与纯化

目的 克隆表达幽门螺杆菌外膜蛋白烷基过氧化氢还原酶ahpC、ureB414功能片段基因,与大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位构建融合基因ahpC-ureB414-ltB(aul).方法 采用重叠延伸PCR的方法,以AhpC做为融合蛋白前端,与UreB414功能片段及黏膜佐剂ltB依次串联,在片段间引入5个氨基酸的柔性Linker GGGGS进行连接;将融合基因构建在原核表达载体pET-22b( )中,经酶切及测序鉴定后转化宿主菌E. coli BL21(DE3),IPTG诱导表达融合蛋白ahpC-UreB414.ltB(AUL).融合蛋白经AKTA-explore纯化仪纯化融合蛋白.结果 PCR扩增出1 350 bp的目的 基因片段aul,工程菌pET22b-aul/BL21经IPTG诱导后,SDS-PAGE显示有新生的蛋白表达条带,相对分子质量约为50×103,与预期值一致,目的 蛋白约占菌体总蛋白的28.7%,重组蛋白用Ni2 -NTA树脂提纯.纯化后的蛋白质经SDS-PAGE分析可见单一条带,图像软件分析表明纯度可达85%以上.Western blot显示重组蛋白质具有良好的免疫反应性.结论 成功构建、表达融合蛋白rAUL,纯化后的融合蛋白保持各亚单位组分及佐剂的独立免疫反应性.     

医学本科教学中构建创新教育体系

通过“产学研一体化”教学平台的实践,分析创新教育管理体制、创新教育资源、创新教育模式及创新教育评价标准,探索创新教育体系在医学本科教学中的实践与优化。     

重组人幽门螺杆菌尿素酶B亚单位及其生物学性质

目的基因重组人幽门螺杆菌(Hp)尿素酶B亚单位(UreB)并分析重组蛋白的生物学性质。方法采用PCR从我国临床分离的Hp菌株中克隆UreB基因,并通过DNA重组技术构建非融合表达UreB的重组质粒pET-11C-UreB,转化至大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导表达。结果重组UreB在大肠杆菌中表达,相对分子质量约62 000,表达率26%,N端15个氨基酸序列为MKKISRKEYVSMYGP,肽图及氨基酸组成成分分析结果与理论预测值吻合。以重组UreB免疫BalB/c小鼠,能产生抗UreB抗体。ELISA及Western blotting分析显示,重组UreB具有良好的免疫原性和反应性,表现出与天然Hp UreB相似的生物学功能。结论为重组UreB作为Hp亚单位疫苗成分奠定了免疫学基础。     

微小RNA在免疫调节中的作用研究进展

微小RNA(miRNA)是一类新发现的内源性非编码RNA分子,能在转录后水平调控基因的表达.研究证实,miRNA在细胞增殖、发育、分化、凋亡、代谢、信号转导以及肿瘤发生中发挥重要的调节作用.近年来,一系列的miRNA已被证实参与了免疫反应调控,如固有性免疫应答,T、B淋巴细胞的分化,病原体感染与免疫及炎症的免疫调控等.文中就miRNA在固有性与获得性免疫应答中的调控作用作一综述.     

新型免疫调节肽佐剂CEL-1000

CEL-1000是一种新型的免疫调节肽，它在抗疟疾、人类免疫缺陷病毒（HIV）、单纯疱疹病毒（HSV）感染和肿瘤疫苗的研制方面具有潜在的佐剂活性，能促进1型辅助性T淋巴细胞（Th1）型免疫应答。     

横跨医学检验专业主干课程的“三性”实验课设计与初步实践

医学检验专业主要包括临床微生物学与微生物检验、临床免疫学与免疫检验、临床生物化学与检验等主干课程,但长期以来各课程均独立开展实验课教学,存在部分实验内容重复,各学科间有机结合不够,学生对医学检验专业理论知识掌握和实验技能培训不连贯等问题。本文对检验医学各主干课程的实验课内容进行深入调研,寻找出彼此间重叠的实验内容与项目,重新整合设计出横跨医学检验专业主干课程的“三性”实验项目,并进行初步的教学实践与分析,为医学检验专业实验课的教学改革奠定了工作基础。     

幽门螺杆菌粘附素基因hpaA研究

目的 克隆表达幽门螺杆菌鞭毛粘附素基因hpaA,筛选Hp疫苗有效抗原成分。方法采用PCR技术从幽门螺杆菌基因组中扩增hpaA基因,克隆至表达载体pET-28a(+)中,IPTG诱导表达重组蛋白HpaA(rHpaA),鉴定rHpaA蛋白的表达形式。结果 pPHA重组菌以包涵体形式表达rH-paA,表达量约占全菌的35％。纯化后的rHpaA免疫家兔获得了高效价的兔抗HpaA抗血清,且该抗血清能够与不同Hp菌株中相应分子量条带发生抗原抗体反应,并能在一定程度上抑制由Hp引起的RBC凝集现象。结论 Hp鞭毛粘附素HpaA在重组大肠杆菌中能够高效表达,且具有良好的免疫反应性。