骨肉瘤免疫治疗的现状和前景

骨肉瘤（Osteosarcoma）是一种具有高度侵袭性和转移性的恶性肿瘤，预后极差，迫切需要一种可以根本改善骨肉瘤预后的新型治疗方案。肿瘤免疫治疗是通过重新激活体内的免疫系统，再次启动并维持“肿瘤-免疫循环”进而杀伤肿瘤细胞的手段。CD8+细胞毒性T淋巴细胞（CTL）、CD4+T细胞、NK细胞和NKT细胞在肿瘤免疫中发挥重要功能，而体液免疫既可发挥抗肿瘤效应，也可促进肿瘤进展。近年来在肿瘤免疫反应研究的基础上，研究者们开发了各种手段来刺激免疫系统对肿瘤的应答。本综述从增强患者自身免疫系统对肿瘤的应答和外源性增强患者免疫功能两个方面对骨肉瘤的免疫治疗进行总结。     

腺病毒介导转化生长因子β1基因阻逆兔椎间盘退行性变的实验

目的：观察腺病毒载体搭载的人转化生长因子基因对兔椎间盘退行性变模型的治疗作用。方法：实验于2003-03／2004-09在协和医院骨科实验室进行。取4个月龄健康雌性日本大白兔30只，于协和医院骨科实验室行L4-5,L5-6前外侧纤维环损伤手术以构建椎间盘退行性变模型。术后8周将动物随机分人3组。治疗组14只，注射20μL（10&;#215;10^6pfu）腺病毒载体介导人转化生长因子β1基因；对照组8只，注射20μL（10&;#215;10^6pfu）腺病毒载体介导标志基因（Ad／CMV-LacZ）；空白组6只，注射20μL生理盐水。另取2只同类的健康白兔作为正常对照，不予任何手术或治疗。注射后3周取各组椎间盘组织行苏木精一伊红染色、T2加权磁共振成像、蛋白免疫印迹、转化生长因子β1免疫组织化学观察。结果：①兔椎间盘组织切片观察结果：注射3周后，治疗组切口已基本愈合，髓核细胞大量增生；空白组纤维环外侧内2／3部分仍未愈合，部分髓核细胞坏死、凋亡；对照组较空白组改善不明显。②MRI扫描结果：治疗组椎间盘信号较对照组及空白组有所恢复，但并未完全达到正常椎间盘水平。③蛋白质免疫印迹分析结果：治疗组转化生长因子β1含量较对照组和空白组有显著上升（P〈0．01）。④转化生长因子Bl免疫组织分析结果：治疗组转化生长因子β1为强阳性表达（〉50％），空白组几乎没有转化生长因子β1表达，对照组与空白组相似。治疗组显著高于对照组（χ^2=20．563，肚0．00）。结论：腺病毒载体介导人转化生长因子β1基因转染退行性变的椎间盘细胞能够有效提高髓核细胞内转化生长因子β1含量，阻逆椎间盘退行性变。     

RGD序列肽修饰的丝素蛋白仿生支架材料对骨髓间充质干细胞黏附、增殖的影响

目的:为了促进种子细胞在韧带组织工程支架材料上的黏附增殖,在丝素薄膜上共价接枝人工合成的具有生物活性的GRGDS序列,并观察RGD多肽修饰的丝素蛋白支架材料对骨髓间充质干细胞的黏附、增殖的影响。方法:实验于2006-07/2007-07在华中科技大学同济医学院协和医院中心实验室和骨科实验室完成。利用市购的白色家蚕蚕丝制备丝素蛋白薄膜,在丝素蛋白支架材料表面接上海吉尔公司合成的RGD多肽,为丝素-RGD组,以未接多肽的丝素蛋白材料和细胞培养板分别作丝素组和阳性对照组。取第3代骨髓间充质干细胞接种到以上材料和培养板上培养4,12 h后,沉淀法定量检测黏附的细胞数检测细胞黏附率;培养1,2,3,4 d后比较材料上的细胞标准化细胞密度来反映细胞的增殖程度;培养24 h后对细胞骨架作免疫荧光染色,在激光共聚焦显微镜下观察两组细胞骨架的组织情况。结果:培养4,12 h时丝素-RGD组细胞黏附率均显著高于丝素组(P<0.01),但与阳性对照组无明显差异(P>0.05)。培养1,2,3,4 d时各组细胞的增殖程度无显著性差异(P>0.05)。培养24 h丝素-RGD组细胞完全铺展开,有粗大的细胞骨架组织,细胞内应力纤维清晰可见,其肌动蛋白的荧光强度显著高于丝素组(P<0.05)。结论:RGD多肽修饰能显著促进骨髓基质细胞在丝素蛋白支架材料上的黏附、铺展,但对细胞增殖无明显促进作用。     

不同种类骨移植后路矫治青少年特发性脊柱侧凸

背景：同种异体骨被广泛应用于脊柱侧凸后路手术,大量研究显示同种异体骨移植与自体髂骨移植可取得相近的临床效果。 目的：观察不同种类骨移植材料在青少年特发性脊柱侧凸后路矫形植骨融合中的临床应用效果。 设计、时间及地点：回顾性对比分析,病例来自2000-01/2005-12华中科技大学同济医学院附属协和医院骨科。 对象：选择行后路钉-棒系统矫形手术且具有完整随访资料的71例青少年特发性脊柱侧凸患者,其中自体骨移植组21例,同种异体骨移植组23例,自体骨混合同种异体骨移植组27例。同种异体骨为冻干同种异体松质骨,由山西省医用组织库提供。 方法：3组骨移植融合手术方法保持一致,按脊柱侧凸类型及后路矫形植骨融合原则进行植骨床准备及植骨。自体骨移植组植入修剪成火柴状的自体髂骨;同种异体骨移植组植入经生理盐水浸泡30~40 min 的冻干同种异体松质骨条;自体骨混合同种异体骨移植组植入髂骨碎块与经上述处理的冻干同种异体松质骨碎块。 主要观察指标：比较术后第3,9,15,36个月的植骨融合率、Cobb角丢失率及各组术后不良反应。 结果：71例患者均进入结果分析。自体骨移植组平均融合节段7个,同种异体骨移植组平均融合节段7.6个,自体骨混合同种异体骨移植组平均融合节段8个。术后第9个月,自体骨移植组融合率高于其他2组(P < 0.05);Cobb角丢失率3组差异无显著性意义(P > 0.05)。术后第3,15,36个月,植骨融合率、Cobb角丢失率3组间差异亦无显著性意义(P > 0.05)。3组均未发生螺钉及棒的松动、断裂、感染等并发症,其中自体骨移植组发生取骨处疼痛3例,自体骨混合同种异体骨移植组发生取骨处疼痛1例。 结论：同种异体骨移植、自体骨混合同种异体骨移植与自体骨移植在青少年特发性脊柱侧凸后路矫形中对维持矫形可取得相近的近远期临床效果。     

显微镜与显微内窥镜下微创手术治疗腰椎间盘突出症的疗效比较

目的:比较显微镜下腰椎间盘切除术(MSLD)与显微内窥镜下椎间盘切除术(MED)治疗单节段腰椎间盘突出症(LDH)的疗效.方法:2006年4月～2007年10月收治单节段LDH患者278例,随机分为两组,其中148例采用MSLD治疗,130例采用MED治疗.比较两种手术的切口长度,手术时间、并发症、住院天数,手术后VAS、SF-36量表躯体疼痛评分、ODI改善率和改良MacNab评分情况.结果:MSLD组及MED组的切口长度分别为4.5±1.5cm和2.5±0.8cm.手术时间分别为40.0±13.8min和56.0±15.9min,两组间均有显著性差异(P<0.05);术中出血量分别为96±77ml和111±45ml、住院天数分别为9.4±2.6d和9.8±2.8d,两组间均无显著性差异(P>0.05).MSLD组及MED组随访时间分别为平均18.3个月和18个月,未次随访时MSLD组及MED组的VAS改善率分别为(85.3±1.8)%和(84.5±2.1)%,SF-36量表躯体疼痛评分改善率分别为(81.3±5.6)%和(80.1±6.1)%,ODI改善率分别为(85.3±1.8)%和(82.3±2.0)%,改良MacNab评分优良率分别为94.0%和93.7%,两组间比较均无显著性差异(P>0.05).MSLD组及MED组并发症分别为:腹部不适14例(9.46%)和12例(9.23%)、急性尿潴留21例(14.19%)和18例(13.84%),两组比较均无显著性差异(P>0.05);硬脊膜撕裂0例和2例(1.54%)、急性竖脊肌血肿2例(1.36%)和5例(3.85%),MSLD组明显少于MED组(P<0.01).结论:MSLD与MED治疗单节段腰椎间盘突出症均可取得满意疗效,但MSLD操作简便、并发症少,是目前更为理想的微创手术方法.     

腺病毒载体搭载的TIMP-3基因对兔椎间盘基质的调节作用

[目的]考察腺病毒载体搭载的重组人组织金属蛋白酶抑制因子-3基因(RAdTIMP-3)转染兔椎间盘后对椎间盘内主要基质成分质量的影响,并探讨其用于椎间盘退变治疗的可行性.[方法]扩增Lac-Z基因标记的RAdTIMP-3和重组腺病毒载体RAd66,并进行纯化、鉴定及滴度测定.将30只日本大白兔随机分入5组,分别向L4、5、L5、6椎间盘内注射生理盐水(第1组)、1.0×1010OPU/mlRAd66(第2组)以及1.0×1010OPU/mlRAdTIMP-3(第3、4、5组)各25 μl.各组分别于注射后2、2、1、2、4周收集标本,X-gal染色检测转染效率,RT-PCR检测TIMP-3及聚集蛋白聚糖核心蛋白的表达,TIMP-3及H型胶原免疫组化染色、藏红O-快绿染色及Tunel染色考察转染对椎间盘基质的调控作用.[结果](1)RAdTIMP-3经扩增和纯化后浓度可达1.9×10TM OPU/ml.(2)RT-PCR显示,3、4、5组TIMP-3基因表达均较1、2组明显增加,3、4、5组核心蛋白基因表达较1、2组略有增强.(3)Tunel染色显示各组凋亡细胞比例无明显差异.(4)第5组藏红O-快绿染色及II型胶原免疫组化染色染色强度均好于1、2组.[结论]RAdTIMP-3能够广泛而安全地在兔椎间盘内表达,并改善椎间盘基质成分的质和量,具备用于椎间盘退变治疗的潜力.     

stathmin基因沉默协同增效多烯紫杉醇对骨肉瘤细胞化疗作用的实验研究

目的探讨stathmin基因沉默协同增效多烯紫杉醇(泰索帝)对骨肉瘤细胞的化疗敏感性。方法将已构建成功的针对stathmin mRNA的siRNA真核质粒经脂质体转染LM8骨肉瘤细胞并获得稳定的细胞系。泰索帝和顺铂分别诱导对照LM8细胞、转染的LM8细胞,台盼蓝染色法测定以上2组细胞的生长,软琼脂集落形成实验观察2组细胞的单个细胞体外增殖活力,噻唑蓝MTT法分别检测泰索帝和顺铂对2组细胞半数抑制浓度,流式细胞术定量分析泰索帝对2组细胞周期及细胞凋亡率的影响。结果与对照组相比,不同浓度的泰索帝和顺铂均抑制了LM8细胞的生长,但泰索帝对转染的LM8细胞生长抑制作用更为明显;泰索帝较顺铂更加明显减少了单个细胞,特别是转染LM8骨肉瘤细胞的体外增殖活力;泰索帝和顺铂对转染的LM8细胞半数抑制浓度均较对照组下降,但泰索帝半数抑制浓度下降更显著;流式细胞术检测显示,泰索帝更易使转染LM8细胞阻滞于G2/M期,更易诱导转染LM8细胞的凋亡。结论stathmin基因沉默能明显增加泰索帝对骨肉瘤LM8细胞的化疗敏感性并协同诱导细胞凋亡,为肿瘤的治疗提供了一种新思路。     

Mobilization efficiency of granulocyte colony-stimulating factor and stem cell factor to bone marrow mononuclear cells and mechanisms

The mobilization efficiency of granulocyte colony-stimulating factor (G-CSF) and stem cell factor (SCF) to bone marrow mononuclear cells (MNCs) in mice was observed, and the changes of CXCL12/CXCR4 signal were detected in order to find out the mobilization mechanism of stem cells. Kunming mice were randomly divided into two groups. The mice in treatment group were subjected to subcutaneous injection of G-CSF at a dose of 100 μg/kg and SCF at a dose of 25 μg/kg every day for 5 days, and those in control grou...     

脊索细胞研究进展

椎间盘再生研究中,脊索细胞独特的生理功能受到关注.成人髓核内脊索细凋亡与髓核内蛋白多糖含量降低、胶原含量增加、水含量丢失相关.脊索细胞分泌的可溶性因子具有引导终板软骨细胞向髓核迁移,调节髓核细胞蛋白多糖合成的作用.脊索细胞可促进髓核软骨样细胞增殖和表型维持,在维持髓核内细胞数量及细胞外基质含量中起着重要作用.脊索细胞独特的生理功能,在组织工程修复退变椎间盘研究中展现出广阔的应用前景.     

脊索细胞研究进展

椎间盘再生研究中,脊索细胞独特的生理功能受到关注。成人髓核内脊索细凋亡与髓核内蛋白多糖含量降低、胶原含量增加、水含量丢失相关。脊索细胞分泌的可溶性因子具有引导终板软骨细胞向髓核迁移,调节髓核细胞蛋白多糖合成的作用。脊索细胞可促进髓核软骨样细胞增殖和表型维持,在维持髓核内细胞数量及细胞外基质含量中起着重要作用。脊索细胞独特的生理功能,在组织工程修复退变椎间盘研究中展现出广阔的应用前景。