SEREX方法在筛选和鉴定骨肉瘤抗原中的应用

引言肿瘤抗原及其编码基因的理论研究和实验技术使肿瘤抗原的筛选和肿瘤免疫的研究进入一个新阶段[1]。肿瘤抗原的筛选与鉴定是临床特异性免疫治疗的前提和关键,随着对肿瘤生物学和肿瘤免疫学的深入认识,设计了基于体液免疫的重组cDNA文库的血清学分析(serological analysis of recombi-nant cDNAexpressionlibraries,SEREX)方法,简便易行[2]。本文对SEREX方法的原理、技术步骤、及其在骨肉瘤肿瘤基因筛选的应用及研究现状作一简要介绍。1SEREX方法原理重组cDNA表达文库的血清学分析最早由Pfreundsch小组建立[2]。SEREX方法将分子克隆技术和利用患者自体血清对肿瘤细胞的自体分型技术融为一体,不仅可检测抗体反应,而且能在抗原与患者自体血清反应的基础上,直接从分子水平确定具有免疫原性的肿瘤蛋白质(抗原)。此方法的流程主要是以新鲜瘤组织或细胞样本构建cDNA文库并连接入噬菌体表达载体,以重组的噬菌体转染E.coli大肠杆菌,将细菌表达的重组蛋白转移至NC膜上,与稀释后的病人自体血清共孵育,用酶联特异性抗人IgG二抗识别与高滴度血清抗体反应的克隆,阳...     

p19~(ARF)和p16~(INK4a)在人骨肉瘤中表达的比较研究

目的比较p16INK4a和p19ARF两种抑癌基因在可切除的人骨肉瘤组织中的表达形式,探讨其在人骨肉瘤的发生、发展中的意义。方法人骨肉瘤切除石蜡标本37例,用单克隆抗体间接免疫荧光法同时测定肿瘤组织的p16、p19蛋白的表达。结果p16INK4a表达率56.8%(21/37),p19ARF表达率40.5%(15/37);p16与p19表达无相关性;p16和p19与骨肉瘤的外科分期、病理分级、血管浸润和肺部转移均无显著相关。结论p16、p19的下调都很可能是骨肉瘤发生发展的重要原因之一,未发现这两种抑癌基因之间的表达有显著关系。     

不同物种股骨头坏死模型的研究进展

股骨头坏死的动物模型对探索治疗模式必不可少，但迄今为止还没有一种理想的动物模型。现就不同物种股骨头坏死模型的建模方法及特点进行综述，为选择理想的动物模型提供参考。     

Effect of MicroRNA-101 on Proliferation and Apoptosis of Human Osteosarcoma Cells by Targeting mTOR

Studies have proved that microRNA-101 （miR-101） functions as a tumor suppressor and is associated with growth and apoptosis of various human cancers. However, the role of miR-101 in os- teosarcoma and the possible mechanism by which miR-101 affects the tumor growth and apoptusis have not been fully elucidated. In this study, we found that the expression ofmiR-101 was down-regulated in osteosarcoma tissues and Saos-2 cell line as compared with that in adjacent non-neoplastic bone tissues and the osteoblastic cell line. To better characterize the role of miR-101 in osteosarcoma, we used a gain-of-function analysis by transfecting human osteosarcoma cell line Saos-2 with chemically synthe- sized miR-101 mimics. The results showed that overexpression of miR-101 inhibited the proliferation and promoted the apoptosis of Saos-2 cells. Meanwhile, bioinformatic analysis demonstrated that mTOR gene was a direct target of miR- 101. Overexpression of miR- 101 significantly decreased the ex- pression of roTOR at both mRNA and protein levels in Saos-2 cells, consequently inhibiting Saos-2 cells proliferation and promoting ceils apoptosis in an mTOR-dependent manner. Taken together, these data suggest that miR-101 may act as a tumor suppressor, which is commonly downregulated in both osteosarcoma tissues and cells, roTOR plays an important role in mediating miR-101 dependent bio- logical functions in osteosarcoma. Reintroduction of miR-101 may be a novel therapeutic strategy bydown-regulating mTOR expression.     

糖酵解与恶性肿瘤

大多数增殖快的恶性肿瘤细胞糖酵解活跃,经糖酵解获取能量多。恶性肿瘤糖酵解活跃与发生糖酵解的细胞结构和功能,以及催化糖酵解的酶有很大关系。恶性肿瘤糖酵解活跃还有促进细胞增殖和抑制细胞凋亡的作用。近年针对恶性肿瘤高糖酵解特点的研究取得了一些成果,该文就恶性肿瘤中糖酵解特点、糖酵解活跃的细胞结构和功能、糖酵解关键酶己糖激酶对肿瘤细胞增殖和凋亡的调节等方面的研究和应用进展作一综述。     

锁定式颈椎融合器治疗单节段颈椎间盘突出症

目的探讨应用颈椎前路减压结合锁定式颈椎融合器治疗单节段颈椎间盘突出症的临床疗效。方法 21例单节段颈椎间盘突出症应用颈椎前路减压加锁定式颈椎融合器植骨融合术治疗,并对其疗效进行评价。结果所有病例随访12~24个月,平均17.6个月。6个月后椎体间均达到骨性融合,无并发症出现,脊髓功能状态评分术后1个月及术后6个月优良率分别达66.67%、85.71%。结论应用颈椎前路减压结合锁定式颈椎融合器治疗单节段颈椎间盘突出症疗效肯定。     

手术显微镜下与椎间盘镜下治疗腰椎间盘突出症的比较研究

 目的 对比研究手术显微镜下腰椎间盘切除术(microsurgical lumbar discectomy, MSLD)与椎间盘镜下腰椎间盘切除术(microendoscopic discectomy, MED)治疗单节段腰椎间盘突出症的方法、特点与疗效。方法 2006年 1月至 2009年 12月, 900例单节段腰椎间盘突出症患者被随机分为两组, MSLD组与 MED组各 450例, 术后分别平均随访 36个月和 38个月。比较两组手术病例的平均切口长度、手术时间、出血量、并发症、住: 天数及恢复情况。结果 MSLD组及 MED组的切口长度分别为(3.8±1.1) cm和(2.4±0.7) cm, 手术时间分别为(51.0±14.2) min和(62.0±16.3) min, 术中出血量分别为(60±35) ml和(106±43) ml, 以上指标两组间差异均有统计学意义(P 0.05)。末次随访时, MSLD组及 MED组的疼痛视觉模拟评分(visual analogue scales, VAS)改善率和 Oswestry功能障碍指数(Oswestry disability index, ODI)改善率差异均无统计学意义(P >0.05)。 MSLD组硬脊膜撕裂、急性竖脊肌血肿、神经根及马尾损伤等并发症及术后复发的发生率均明显少于 MED组(P< 0.01)。两组均未出现定位错误、大血管损伤和术后感染。结论 MSLD与 MED治疗单节段腰椎间盘突出症均可获得满意的远期疗效, 但 MSLD操作简单、并发症少、学习曲线短。     

小肠黏膜下层包绕丝素纤维复合韧带的生物力学测定

背景：基于仿生化思想,综合丝素蛋白纤维和小肠黏膜下层的优点,利用小肠黏膜下层分层包绕丝素蛋白纤维,拟构建良好生物活性和力学性能的复合韧带。 目的：检测小肠黏膜下层包绕丝素纤维复合韧带的生物力学特性。 设计、时间及地点：对比观察实验,于2008-03/06在华中科技大学附属协和医院骨科实验室完成。 材料：小肠取自封闭饲养的经过检疫的健康猪;蚕丝由湖北省德中茧丝有限公司惠赠。 方法：用裹有纱布的刀柄去除小肠的浆膜层和肌层,制备符合要求的小肠黏膜下层。分层包绕脱胶后的蚕丝丝素纤维。直径分别为4,5,6,7,8,9 mm,长度为15 cm。将复合韧带置于AGS-H多功能材料实验机的夹具中,固定后以10 mm/min的速度行拉断试验。 主要观察指标：检测复合韧带的最大载荷,刚度和最大拉伸长度力学指标。 结果：力学性能检测结果：复合韧带(以直径为7 mm为例)的最大载荷,刚度和最大拉伸长度分别达到(2 258±241) N, (309±16) N/mm和(43.0±1.5)%;而正常前交叉韧带的最大载荷,刚度和最大拉伸长度分别为2 195 N,306 N/mm和33%。复合韧带和正常前交叉韧带的力学性质差异无显著性意义(P > 0.05)。 结论：复合韧带力学性能优秀,满足韧带组织工程支架材料力学要求。     

术前CT测量椎体变异对特发性脊柱侧弯矫形手术的意义

[目的] 探讨术前CT测量椎体变异对脊柱侧弯后路矫形手术的意义.[方法] 回顾性分析本院在采用CT三维重建技术测量椎体变异,以指导脊柱侧弯矫形术中内固定植入这一新方法前后,两组特发性脊柱侧弯病例矫形术中椎弓根螺钉使用率,矫形率异等情况.[结果] 末使用CT测苗椎体变异组患者27例,椎弓根钉使用率65%±21%,术前Cobb's角61.7°±9.0°,术后Cobb's角29.7°±4.8°,矫正率为52%±4%;使用CT测量椎体变异指导手术内植物植入组患者23例,椎弓根钉使用率94%±9%,术前Cobb's角64.0°±7.6°术后Cobb's角21.1°±3.1°,矫正率为67%±6%.两绀病例在椎弓根钉使用率和畸形矫正率上有极显著差异,P值皆小于0.001.[结论] 使用CT测量椎体变异能提供同定椎体椎弓根直径、内倾角、椎弓根钉的可使用长度等重要个性化资料,能提高术中植入椎弓根钉的植入成功率,提高侧弯畸形的矫形效果.     

阻断转化生长因子β1自分泌环对骨肉瘤细胞恶性表型的影响

[目的]观察阻断转化生长因子β1(TGFβ1)自分泌环对骨肉瘤细胞恶性表型的影响。[方法]将反义TGFβ1基因转染骨肉瘤细胞MG-63,G418筛选14d后获得转染细胞系MG-TGFβ1(-)。取MTT法检测转染细胞增殖活性,并观察细胞软琼脂克隆形成数和裸鼠体内致瘤能力。[结果]与MG-63和空载体转染细胞MG-pcDNA3相比,MG-TGFβ1(-)细胞增殖活性明显受到抑制。MG-TGFβ1(-)的软琼脂克隆形成数(28·2±5·6)比MG-63组(48·6±8·1)和MG-pcDNA3组(45·2±4·7)明显减少,裸鼠体内形成肿瘤的体积(83·4±27·4)mm3也明显小于MG-63组(191·3±21·5)mm3和MG-pcDNA3组(204·2±30·7)mm3。[结论]反义TGFβ1基因转染骨肉瘤细胞可以逆转肿瘤细胞的恶性表型,进一步的研究将有助于提高骨肉瘤的治疗效果。