新型冠状病毒M蛋白表达及多克隆抗体制备北大核心CSCD

目的利用原核表达系统表达新型冠状病毒M蛋白,纯化后免疫新西兰大白兔,制备多克隆抗体,并与M真核质粒免疫效果相比较,为新型冠状病毒感染检测试剂盒的研制奠定基础。方法将酶切鉴定正确的原核重组表达载体PMAT-9s-M转化BL21,异丙基-β-D-硫代半乳糖苷诱导表达M蛋白并进行鉴定。M蛋白经镍离子亲和层析柱纯化浓缩后免疫大白兔,制备多克隆抗体。将M真核重组质粒转化至DH5α,碱裂解法大量抽提质粒后免疫大白兔,制备多克隆抗体。采用ELISA检测2种抗血清的抗体效价,采用Western blot检测2种抗血清与M蛋白的反应性。结果PMAT-9s-M转化BL21后表达70 ku的His-MBP-M融合蛋白,且该蛋白主要存在于包涵体中。纯化后免疫大白兔,制备的多克隆抗体血清效价与真核重组质粒免疫制备的抗血清抗体效价均达1︰16000,且2种抗血清均与凝血酶切M蛋白有良好反应性。结论原核表达的M蛋白免疫制备的多克隆抗体特异性强,效价高,且重组M蛋白制备简便、经济高效,为新冠病毒感染诊断试剂盒的研制奠定了基础。     

新型冠状病毒RDRP的原核表达、多克隆抗体制备及生物信息学分析北大核心CSCD

目的应用原核表达系统制备重组新型冠状病毒依赖RNA的RNA聚合酶(RNA-dependent RNA polymerase,RDRP),纯化后免疫新西兰大白兔获得高效价多克隆抗体,并对RDRP进行生物信息学分析。方法鉴定正确的pET-22b RDRP质粒转化表达载体,诱导表达RDRP蛋白,纯化后免疫大白兔,间接ELISA法检测其多克隆抗体效价。运用Expasy PortParam、SWISS MODEL等生物信息学软件对RDRP蛋白的等电点、分子质量、亲疏水性等理化性质、蛋白的空间结构、跨膜结构域、磷酸化位点、蛋白信号肽进行预测;构建系统进化树,进行亲缘性分析。结果pET-22b RDRP重组质粒酶切鉴定正确,经诱导重组蛋白以包涵体的形式表达,8 mol/L尿素梯度复性后得到纯度高的RDRP蛋白。用纯化蛋白免疫大白兔,间接ELISA检测血清抗体效价>1∶256000,Western blot检测抗体具有良好特异性。经生物信息学分析RDRP蛋白为亲水性,非跨膜蛋白,且无信号肽。11种病毒系统进化树显示,SARS-CoV-2 RDRP蛋白与SARS-CoV RDRP亲缘关系较近。结论成功获得重组SARS-CoV-2 RDRP蛋白,用该蛋白免疫大白兔能刺激产生高效价的多克隆抗体。预测与SARS-CoV RDRP亲缘关系较近,为亲水性非跨膜蛋白,为研究SARS-CoV-2 RDRP蛋白的生物学功能及其疫苗的制备奠定了基础。     

形状记忆合金环抱器治疗髋关节置换术后股骨假体周围骨折

随着老年平均寿命延长，人工髋关节假体的研究发展及人工髋关节置换术增多。人工髋关节术后股骨假体周围骨折发生率逐渐增加。股骨假体周围骨折的处理较为困难，并被认为是髋关节置换术后的一个重要并发症。自2001．3～2007．5，笔者共收治髋关节置换术后股骨假体周围骨折9例，采用切肝复位形状记忆合金环抱器内固定的方法治疗取得较好结果。现报告如下：     

纤维喉镜检查致持续性喉痉挛1例

患者 ,女 ,72岁。因咽喉部异物感 2个月就诊。纤维喉镜检查见咽喉粘膜慢性充血 ,舌根淋巴滤泡增生。当将纤维喉镜头端退至鼻腔时 ,患者突感憋气 ,继之出现吸气性喘鸣及阻塞性呼吸困难 ,口唇紫绀 ,面色苍白。立即静脉输液 ,内加地塞米松 2 0mg,嘱患者深呼吸 ,并吸氧。约 30 min后 ,患者呼吸困难有所缓解 ,间隔约 5min,上述症状再次加重 ,继续吸氧 ,舌下含服速效救心丸 (6粒 ) ,并做好气管切开准备。约 1 5 min后 ,呼吸困难又缓解 ,如1 北京矿务局总医院耳鼻咽喉科 (北京 ,10 2 30 0 )此反复发作 4次。约 2 h后患者恢复正常。此时用间接喉镜检…     

多动行为偏异儿童血5-羟色胺测定及其意义

目的　探讨心理卫生偏异 (简称行为异常 )多动行为偏异儿童 (简称多动 )与正常儿童血 5 -羟色胺 (5 -HT)含量差别。方法　用Achenbach儿童行为量表筛查并根据因子分分类对 30例行为异常儿童进行血 5 -HT含量测定 ,与 30例正常儿童对照组比较。结果　行为异常组血 5 -HT含量与正常组比较 ,无显著差异。而多动组与正常组比较 ,有显著差异 (P <0 .0 5 )。内向型因子组与正常组比较 ,有显著差异 (P <0 .0 5 )。结论　多动行为偏异儿童血 5 -HT含量明显降低 ,心理卫生偏异内向型组血 5 -HT含量明显升高。     

沙参麦门冬汤合加味左金丸治疗久吐伤阴

呕吐病因有感受外邪,肝火上逆,脾胃不和,饮食所伤之不同,任何病变,有损于胃,皆可引起呕吐,然临床因治不及时或治不得法而致律伤,阴虚不足者常见:轻者表现为口燥咽干,五心烦热等胃阴不足之症;重者胃燥津枯.     

黄芪甲苷减轻环磷酰胺诱导的早发性卵巢功能不全模型大鼠卵巢炎症反应

目的：研究黄芪甲苷(astragaloside Ⅳ, AS-IV)是否通过抑制核因子κB(nuclear factor-κB, NF-κB信号通路降低环磷酰胺(cyclophosphamide, CTX)诱导的早发性卵巢功能不全(premature ovarian insufficiency, POI)模型大鼠炎症反应。方法：动情周期正常的雌性SD大鼠80只,选取12只为正常对照组,其余68只大鼠用CTX腹腔注射诱导建立POI模型。将模型制备成功的60只大鼠随机分为5组,每组12只,分别为POI模型组、芬吗通组、低剂量AS-IV组、中剂量AS-IV组和高剂量AS-IV组,干预28 d后取样。采用ELISA法测定血清中17β-雌二醇(17β-estradiol, 17β-E2)、抗缪勒管激素(anti-Müllerian hormone, AMH)、促卵泡生成素(follicle-stimulating hormone, FSH)和黄体生成素(luteinizing hormone, LH)水平;转录组测序筛选差异表达基因及功能富集;HE染色法观察卵巢组织病理变化并进行卵泡计数;免疫组织...     

开展临床药学工作的体会

临床药学是医疗工作的重要组成部分。医药结合提高了合理用药水平,减少了药物的毒副反应,增加了治疗效果。我院坚持开展以提高临床合理用药,提高药物治疗水平为重点的临床药学工作,取得一定效果。     

剖腹产手术净化小鼠肝炎病毒的试验

本文报告以无菌剖腹产术净化小鼠肝炎病毒感染的小鼠种群的结果。剖腹产术前100％感染小鼠肝炎病毒的小鼠种群,经无菌剖腹产术净化后,结果均为阴性,并经5年的大规模生产、繁殖,至今仍保持阴性结果。     

兔出血症的诊断方法

兔出血症是由兔出血症病毒（ＲＨＤＶ）引起的一种急性、高度接触性传染病,对动物生产和动物实验造成严重危害。自１９８４年我国首次报道本病以来,为对本病做出早期和准确的诊断,防止疾病传播和流行,许多学者开展了这方面的研究,并建立了多种检测方法。本文就近十年来用于ＲＨＤＶ的检测方法作一概述。根据国内外学者对该病毒诊断方法的有关报道,归纳如下。１　血凝（ＨＡ）和血凝抑制（ＨＩ）试验ＨＡ和ＨＩ是在ＲＨＤＶ感染诊断方面应用最早的检测方法。由于这两种方法简便、快速、不需要特殊的仪器设备,已在ＲＨＤＶ诊断和免疫效…