靶向SET的shRNA真核表达质粒的构建及鉴定

目的:针对PP2A内源性抑制剂SET基因的不同部位,构建靶向SET的shRNA真核表达质粒,鉴定并筛选出最佳抑制效率的表达质粒.方法:针对SET基因的不同部位设计4对短发卡RNA(shRNA)的寡核苷酸片段,克隆到真核表达载体pGPU6中,构建靶向SET的shRNA真核表达质粒pGPU6/GFP/Neo-SET-shR...     

IFN-γ通过非依赖STAT1途径对人胃癌组织中P53表达的调控机制

目的:探讨胃癌中IFN-γ通过非依赖STAT1途径对P53表达调控的作用及机制.方法:SGC7901经IFN-γ及STAT1反义寡核苷酸处理,RT-PCR及灰度分析法检测STAT1和p53 mRNA水平变化,应用Hoechest33258观察细胞凋亡.人胃癌组织经免疫组织化学染色检测STAT1和P53蛋白.各组平均吸光...     

Comparative Study of the Effect of Shugan Shuru Granule(疏肝舒乳颗粒)on Pathology and p53 Gene Expression in Patients with Hyperplastic Disease of Breast

Objective: To study the effect of Shugan Shuru Granule (疏肝舒乳颗粒, SSG) on the p53 gene expression in patients with hyperplastic disease of breast (HDB) to indirectly explore the mechanism of SSG's effect on HDB on the molecular pathological level. Methods: Sixty-six patients with HDB were allocated in the treated group and the control group, with the former treated with SSG and the latter not. All patients underwent breast operation and their diseased mammary tissues were cut out, sectioned, and observed under microscopy with HE staining and immunohistochemical staining, with ABC method adopted to estimate the degree of hyperplasia and p53 gene expression. The severity of HDB was classified into normal, mild, moderate and severe grades (marked as 0 to Ⅲ ), according to the degree of hyperplasia in the mammary gland.Results: Hyperplasia in the control group mostly belonged to grade Ⅰ - Ⅲ before treatment, showing overgrowth of gland and proliferation of glandular epithelial cells, which were high columnar shaped, more stratified, with papillary or substantive dysplasia. While in the treated group, most belonged to grade 0- Ⅰ after SSG treatment, with proliferated gland and dysplasia recovered to normal or disappeared. The positive rate of p53 gene expression in the treated group was 9.09%, and in the control group 39.39%, comparison between the two groups showing significant difference ( P＜0.01), the intensity in the former was significantly weaker than that in the latter. Conclusion: SSG could not only inhibit the proliferation of mammary duct epithelia and Iobuli, but also inhibit the over-expression of P53. Therefore, it could be regarded as an effective remedy for treatment of HDB and prevention of mammary cancer genesis.     

元胡止痛口服液对原发性痛经的镇痛作用及机制研究

[目的]观察元胡止痛口服液对原发性痛经的治疗作用并探讨其作用机制,为其在临床治疗原发性痛经提供实验依据。[方法]采用缩宫素诱导原发性痛经大鼠模型,考察不同剂量元胡止痛口服液对动物模型扭体反应的影响,并检测大鼠血浆雌二醇（E₂）、孕酮（Prog）、丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）与谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）水平,以及子宫组织前列腺素F_2α（PGF_2α）、前列腺素E₂（PGE₂）、血栓素B₂（TXB₂）、6-酮-前列腺素F_1α（6-keto-PGF_1α）、钙离子（Ca²⁺）与一氧化氮（NO）含量。[结果]元胡止痛口服液可显著减少痛经大鼠模型的扭体次数（P<0.05）,降低扭体发生率。与模型组大鼠相比,元胡止痛口服液治疗组大鼠血浆MDA水平显著降低（P<0.05）,子宫组织PGF_2α水平与Ca²⁺含量显著下调（P<0.05）,且子宫6-keto-PGF_1α水平显著升高（P<0.05）。[结论]元胡止痛口服液对原发性痛经大鼠模型具有显著的镇痛作用,其作用机制可能与调节血浆MDA水平及子宫组织内PGF_2α、6-keto-PGF_1α、Ca²⁺含量相关。     

用简并寡核苷酸引物构建人类染色体区带特异性探针池的技术

目的建立快速有效构建人类染色体区带特异性探针池及其文库的技术。方法显微切割人类染色体３ｐ２３－ｐ２６，３ｑ２１－ｑ２２，４ｐ１２－ｐ１６区带，用简并寡核苷酸引物－ＰＣＲ（ｄｅｇｅｎｅｒａｔｅｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｅｄｐｒｉｍｅｒｅｄ－ＰＣＲ，ＤＯＰ－ＰＣＲ）扩增，并用荧光原位杂交（ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅｉｎｓｉｔｕｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ，ＦＩＳＨ）检测扩增产物来源，再将区带特异性扩增产物克隆于ｐＵＣ１９载体构建区带特异性文库，以及用α－３２ＰＡＴＰ标记的ｇＤＮＡ行菌落原位杂交。结果经ＦＩＳＨ证实，３ｐ２３－ｐ２６，３ｑ２１－ｑ２２，４ｐ１２－ｐ１６探针池均在切割相应区带出现特异性信号。其中３ｑ２１－ｑ２２获得的１．２×１０４个阳性克隆。随机分析３０个含插入片段的白色菌落，其插入片段平均约４２０ｂｐ。２２０个白色克隆菌落原位杂交示单拷贝和低度重复序列占８１％（１７８／２２０）。结论改进的显微切割结合ＤＯＰ－ＰＣＲ为人类染色体探针池及文库构建建立了一个简易、高效的方法，这将有助于基因克隆和人类基因的全序列分析。     

元胡止痛口服液对原发性痛经的镇痛作用及机制研究

[目的]观察元胡止痛口服液对原发性痛经的治疗作用并探讨其作用机制,为其在临床治疗原发性痛经提供实验依据。[方法]采用缩宫素诱导原发性痛经大鼠模型,考察不同剂量元胡止痛口服液对动物模型扭体反应的影响,并检测大鼠血浆雌二醇(E2)、孕酮(Prog)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)与谷胱甘肽过氧化物酶(GSHPx)水平,以及子宫组织前列腺素F2α(PGF2α)、前列腺素E2(PGE2)、血栓素B2(TXB2)、6-酮-前列腺素F1α(6-ketoPGF1α)、钙离子(Ca2+)与一氧化氮(NO)含量。[结果]元胡止痛口服液可显著减少痛经大鼠模型的扭体次数(P0.05),降低扭体发生率。与模型组大鼠相比,元胡止痛口服液治疗组大鼠血浆MDA水平显著降低(P0.05),子宫组织PGF2α水平与Ca2+含量显著下调(P0.05),且子宫6-keto-PGF1α水平显著升高(P0.05)。[结论]元胡止痛口服液对原发性痛经大鼠模型具有显著的镇痛作用,其作用机制可能与调节血浆MDA水平及子宫组织内PGF2α、6-keto-PGF1α、Ca2+含量相关。     

腹腔镜肝切除术临床应用的经验体会

目的探讨腹腔镜肝切除术的应用指征、技术要点和疗效.方法回顾分析本研究所463例腹腔镜肝切除术患者的临床资料和随访结果.结果2007年3月1日至2011年3月31日共完成各类腹腔镜肝切除手术463例.其中原发性肝癌165例,转移性肝癌29例,肝血管瘤143例,肝胆管结石病81例,其他肝脏良性占位病变(肝血管平滑肌脂肪瘤、肝细胞腺瘤、局灶性结节增生、慢性肝脓肿等)45例.手术方式包括腹腔镜下左肝外叶切除术93例,左半肝切除71例,超左半肝切除4例,右半肝切除29例,右肝后叶切除24例,Ⅵ段切除56例,超右半肝切除2例,中肝切除8例,特殊部位肝段切除(Ⅶ/Ⅷ段、Ⅳa、尾叶及Ⅵ段、Ⅶ段交界处)41例,病变局部不规则性切除121例,两个以上部位联合切除14例.手术时间(244.71±105.07)min,术中出血量(460.26±425.81)ml,无手术死亡,术后并发症发生率9.29%,平均住院时间(15.51±4.36)d.194例肝脏恶性肿瘤患者中185例获得2～50个月随访,术后1年、3年总体生存率为90.8%和84.2%,无瘤生存率为87.9%和73.7%.结论腹腔镜肝切除术作为一种微创治疗手段,可选择性应用于肝脏各个部位、各类病变的手术治疗.该法且具有创伤小、恢复快、切口美容的优点.其近期疗效优于开腹手术,远期疗效与开腹手术相当.肝脏良性病变、小肝癌和转移性肝癌是现阶段腹腔镜肝切除术较理想的适应证.     

肺减缩综合征1例治疗体会并文献复习

系统性红斑狼疮（systemiclupus erythematosus,SLE）是以血清中出现抗核抗体（antinuclear antibodies,ANA）为代表的多种自身抗体和多系统受累为主要临床特点的自身免疫疾病。其中呼吸系统受累并不少见,而肺减缩综合征（shrinkinglung syndrome,SLS）则少见,到目前为止在国内尚未见报告。我们于4年前曾治疗1例SLS患者,并随访至今,收到了满意的治疗效果,现报道如下。     

实验动物麻醉剂使用的福利伦理问题

在进行动物实验时需要选择合适的麻醉剂来保证实验操作的顺利进行,获得可靠的实验数据,同时又将实验动物所遭受的痛苦降至最低,保证实验动物的福利。近年来,关于实验动物的福利伦理问题已越来越引起人们的关注。本文主要对动物实验常用的麻醉剂（包括吸入性麻醉剂：乙醚、七氟烷、异氟烷,非吸入性麻醉剂：戊巴比妥钠、水合氯醛、氯胺酮、乌拉坦）的选择及使用过程中可能存在的福利伦理问题做一综述。     

内镜下“沉船”减压技术治疗胸椎后纵韧带骨化症——基于尸体标本的技术报道

【摘要】 目的：建立尸体标本的胸椎后纵韧带骨化（ossification of posterior longitudinal ligament,OPLL）模型,探究在模型上进行内镜下OPLL“沉船”减压技术（sink boat technique,SBT）的可行性。方法：采用新鲜冰冻尸体标本,在导航机器人定位和CT引导下,从侧方经胸腔按术前规划路径穿刺T9椎体后缘。穿刺到达椎体后缘中份后,推注骨水泥并使之沿后纵韧带渗透到椎管内,CT扫描确认骨水泥渗入椎管并分布在T9椎体后方即认为模拟OPLL制备成功。采用内镜下SBT,从一侧椎间孔和对侧部分椎弓根入路进入椎体,从两侧向中心磨除部分椎体,直至双侧贯通,形成凹槽状椎体后缘的缺损,能够容纳模拟的OPLL。使用带线锚钉,将OPLL骨块锚定下沉并固定在椎体凹槽内,以达到椎管腹侧减压的目的。结果：我们成功在尸体标本上制备了胸椎OPLL的骨水泥模型,T9椎体后缘模拟OPLL椎管侵占率达49%。内镜下SBT手术顺利完成了胸脊髓腹侧的减压,术后CT证实模拟的OPLL通过内镜下SBT技术成功沉入并固定在椎体内,椎管矢状径恢复率达218%。结论：内镜下SBT是一种创新的胸椎内镜手术方法,在尸体上可以将模拟的节段性胸椎OPLL沉入椎体内达到椎管减压的目的。