TRAIL分子胞外区基因工程蛋白的制备与鉴定

目的 制备人TRAIL配体胞外区基因工程蛋白。方法 应用RT-PCR技术从激活的人外周血淋巴细胞总RNA中扩增TRAIL配体胞外区cDNA，克隆入PCR^21载体，测序验证后用基因重组法构建了TRAIL配体胞外区和组氨酸盒的原核表达质粒pQE-hTRAIL。将重组质粒转人大肠杆菌M15中表达，经1mmol／L IPTG在37℃条件下诱导4h，亲和层析柱纯化。用SDS—PAGE电泳和Western blot鉴定表达产物。结果 所表达融合蛋白为人TRAIL配体胞外区分子，分子量30kD。表达量约为2mg／ml。结论 人TRAIL配体胞外区在大肠杆菌中得到良好表达，为深入研究TRAIL配体分子在肿瘤与自身免疫病中的可能应用提供了材料。     

重组人可溶性TRAIL分子诱导细胞凋亡机理探讨

目的探讨重组人可溶性TRAIL蛋白(rhsTRAIL)诱导细胞凋亡的机理.方法应用DNA染料和流式细胞仪定性分别检测rhsTRAIL诱导的细胞凋亡;流式细胞仪检测靶细胞膜表面TRAIL受体表达格局,荧光定量法检测凋亡细胞中Caspase-3活性.结果100ng/ml人可溶性TRAIL蛋白分子对外周血淋巴细胞无明显毒性,但可诱导肿瘤细胞凋亡,不同的肿瘤细胞凋亡率有差异,凋亡范围在26%～57%.不同细胞表面TRAIL受体表达量不同,外周血淋巴细胞的死亡受体DR4、DR5受体表达5%,而诱骗受体DcRl表达55%,相反肿瘤细胞上的DR4、DR5表达高(40%～88%),而DcRl表达很低(8%～17%).rhsTRAIL诱导HL-60细胞发生凋亡,其细胞内Caspase-3活性增高.ActD可增加TRAIL抑制细胞生长活性.结论重组人可溶性TRAIL蛋白分子可诱导肿瘤细胞凋亡,凋亡活性TRAIL受体类型及Caspase-3活性增高有关.     

天花粉蛋白合成肽通过激活抑制性CD8~+ T细胞诱导免疫抑制

为了探讨天花粉蛋白合成肽(M-Tk)诱导免疫抑制的机制,应用小鼠针对可溶性抗原OVA的增殖系统,检测M-Tk处理后对淋巴细胞增殖的抑制作用和细胞因子格局的变化,以及M-Tk激活的T淋巴细胞亚群的表型及功能。结果表明,M-Tk可诱导一群CD8+ T抑制性细胞,其表型为CD8+CD28-CTLA4+,采用双层非接触共培养系统发现,该群抑制性细胞主要依赖于细胞因子IL-10、IL-4和细胞间接触发挥免疫抑制作用。     

FasL基因转染Hela细胞体外诱导淋巴细胞凋亡的作用

目的 应用FasL基因转染具有上皮细胞特性的Hela细胞，探讨FasL基因的表达对诱导同种异体淋巴细胞凋亡的作用，为解决同种异体组织工程化皮肤的免疫排斥问题提供一条研究途径。方法 PLNCX2-FasL质粒转化大肠杆菌，抽提纯化的PLNCX2-FasL质粒用限制性内切酶xho Ⅰ，Not Ⅰ酶切，琼脂糖凝胶电泳得到755bp大小的目的条带。紫外灯下切割回收目的条带并抽提纯化得到FasL基因，用xhoⅠ，Not Ⅰ酶切PCDNA3．1质粒载体并在相同位点插入FasL基因，T4酶连接，构建PCDNA3．1-FasL重组质粒。脂质体转染法将PCDNA3．1-FasL基因转染Hela细胞，G418筛选；经过免疫细胞化学法，RT-PCR鉴定后，进行单项淋巴细胞混合试验，检测FasL基因对诱导淋巴细胞凋亡的作用。结果 表达FasL基因的Hela细胞的淋巴细胞刺激指数较对照组转染空白质粒的Hela细胞下调，仅达到对照组刺激指数的17．0l％。结论 FasL基因转染上皮细胞可诱导淋巴细胞凋亡，为研究避免同种异体组织工程化皮肤的免疫排斥提供了一种可行的方法和设想。     

天花粉蛋白(TCS)诱导肿瘤细胞凋亡及其抗肿瘤作用机制的研究进展

 天花粉蛋白(trichosanthin,TCS)是一种植物蛋白,具有多种药理学活性。近年来类于TCS抗肿瘤的研究有较多进展,但就其抗肿瘤机制尚未达成共识。一种观点认为,TCS可以诱导肿瘤细胞凋亡;另一种观点认为,TCS可以作为核糖体活性抑制蛋白(ribosome inactivating protein,RIP)不可逆地抑制蛋白质合成,从而发挥抗肿瘤作用。本文就TCS的抗肿瘤机制加以综述。     

CⅡTA表达与喉鳞状细胞癌(LSCC)患者预后的关系

目的 探讨MHC-Ⅱ类反式激活蛋白（class Ⅱ trans-activator,CⅡTA）的表达水平与喉鳞状细胞癌（laryngeal squamous cell carcinoma,LSCC）患者预后的关系。方法 收集2013年9月至2015年6月于复旦大学附属眼耳鼻喉科医院行手术治疗的喉癌患者的病例资料及组织标本。根据纳入标准最终入组67例,采用免疫组织化学方法检测LSCC组织标本中CⅡTA的表达情况。采用χ²检验、Kaplan-Meier、Log-rank检验、Cox比例风险模型多因素回归方法对CⅡTA的表达水平与LSCC患者的临床特征、术后总生存期（overall survival,OS）之间的关系进行分析。利用GEPIA分析CⅡTA的表达与头颈部鳞状细胞癌（head and neck squamous cell carcinoma,HNSCC）预后的关系。结果 CⅡTA的表达与LSCC的病理分级、临床分期、年龄、性别等临床特征无明显相关性;Kaplan-Meier分析显示在LSCC患者中CⅡTA高表达较低表达的预后好（P<0.05）;GEPIA分析显示HNSCC患者中CⅡTA高表达较低表达的预后好（P<0.05）;Cox多因素回归分析显示饮酒、CⅡTA的表达、淋巴结转移是LSCC术后生存时间的独立影响因素。结论 CⅡTA表达与LSCC患者术后OS的关系密切,可作为预测LSCC患者预后的辅助指标之一。     

肿瘤相关中性粒细胞的异质性及潜在的临床意义

恶性肿瘤组织中肿瘤相关中性粒细胞（TAN）是肿瘤微环境的重要组成部分。TAN在肿瘤中的作用具有两面性。一方面,TAN可直接杀伤肿瘤细胞,或介导其他免疫细胞协同抗肿瘤。另一方面,TAN也可促进肿瘤血管生成、重塑细胞外基质及参与肿瘤细胞免疫逃逸。以上TAN功能的异质性是其在肿瘤微环境中多种复杂机制的交互调控下形成的,对肿瘤的发展或抑制产生重要的作用。因此,阐明TAN的异质性、不同亚群转化机制及其潜在的临床意义显得尤为重要,不仅有助于开发针对促肿瘤型中性粒细胞亚群的抑制类药物和疗法,还可进一步促进免疫治疗更多获益人群的新评估标准建立和筛选。     

CⅡTA 反义基因体外转染对HLA-Ⅱ类抗原表达的抑制作用的研究

目的针对同种异体细胞移植的免疫反应主要由HLA-Ⅱ类抗原介导,而CⅡTA基因对HLA-Ⅱ分子的表达起严格且专一性的调控作用,拟通过CⅡTA的反义cDNA抑制细胞表面HLAⅡ分子的表达.方法以RT-PCR从HLAⅡ抗原组成型表达的Raji细胞株克隆CⅡTA反义片段(arⅡ),插入腺相关病毒载体psNAV中(pAarⅡ).将该质粒通过脂质体稳定转染Hela细胞(pAarⅡH),检测其表面HLAⅡ分子表达,并以RT-PCR检测其CⅡTA、HLA-Ⅱ(DR、DP及DQ)及Ii分子的mRNA水平.结果pAarⅡH在重组人IFN-γ诱导下,DR、DP及DQ抗原表达分别降低了79±12%、90±15%及40±8%;同时HLA-Ⅱ及Ii分子的mRNA被明显抑制.结论提示CⅡTA反义基因片段抑制了自身组成型及诱导型表达量,并相应阻止了CⅡTA所调控的基因(HLA-Ⅱ及Ii)的表达,从而为进一步探讨免疫耐受形成及其在组织工程中的应用奠定了基础.     

IL-9的研究进展

多种免疫细胞能够分泌细胞因子IL-9,例如Th2、Th9、Th17、Treg细胞、NKT细胞、肥大细胞等。最近有关IL-9的研究又有新进展,本文就IL-9的细     

天花粉蛋白对不同小鼠品系T细胞亚群分化的影响

为进一步探讨不同品系小鼠对天花粉蛋白(Tk)免疫抑制敏感性不同的机制,选择Tk高敏感品系(C57BL/6)和低敏感品系(C3H/He)小鼠,建立OVA特异性体外增殖系统,应用流式细胞术胞内细胞因子染色技术分析Th和Tc细胞亚群,real-time PCR检测细胞因子及相关转录因子的mRNA水平。发现Tk作用下,高敏感品系小鼠C57BL/6 IL-4阳性T细胞明显增多,表达IFN-γ阳性T细胞则显著减少。而低敏感品系C3H/He相关变化不明显。T细胞分化相关细胞因子IL-4、IL-10和IFN-γ及转录因子T-bet、gata-3的基因表达水平也呈现类似的格局。提示Tk发挥免疫抑制作用可能与其诱导的以Th2/Tc2为主的T细胞亚群有关,且这种诱导特定细胞亚群的作用在小鼠中和H-2b基因型相关。