腹腔镜直肠癌根治术1例报告

腹腔镜直肠癌根治术目前已成为继腹腔镜胆囊切除术后开展最为成功的微创外科手术之一。本文就我院腹腔镜直肠癌根治术1例报告如下。     

腹腔镜联合手术的临床应用体会

目的探讨腹腔镜联合手术的临床应用价值和体会。方法回顾分析2005年1月～2008年12月间55例腹腔镜联合手术的临床资料。结果55例腹腔镜手术成功,无并发症发生,术后4～7 d痊愈出院。结论腹腔镜联合手术可以安全有效的处理多种腹部疾病,可在同一专科或多专科中联合应用,需严格掌握手术适应证。并且以各专科医师为主处理其专科疾病,不能擅自盲目独立跨科操作。     

FTY720在同种肝细胞移植大鼠中的免疫抑制作用

<正>FTY720是一种新合成的免疫抑制剂,由冬虫夏草提取物中的ISP-1经结构修饰而成,具有突出的免疫抑制功能。本实验旨在评价FTY720在大鼠肝细胞移植治疗大鼠肝功能衰竭时的免疫抑制作用及对预后的影响。     

FTY720对大鼠肝细胞移植后脾脏T细胞亚群的实验研究

<正>目前,肝细胞移植已经成为继原位肝移植后又一治疗各类肝功能衰竭及遗传代谢性肝脏疾病的有效方法,但是如何提高肝细胞移植的成活率成为医务工作者需解决的棘手问题。新型免疫抑制剂FTY720是一种新合成的,将冬虫夏草提取物中具有免疫抑制作用的成分多球壳菌素(ISP-I)进行结构改造[1],其在保护移植器官方面有良好的效果。本研究主要通过动物实验探究新型免疫抑制剂FTY720在保护肝脏移植     

反义肽核酸下调树突状细胞CCR7基因表达抑制大鼠肝移植急性排斥反应

目的 研究反义肽核酸(PNA)下调树突状细胞(DC)趋化因子受体CCR7基因表达在大鼠肝移植急性排斥反应中的作用.方法 体外培养大鼠骨髓来源的DC,设计靶向CCR7 mRNA翻译起始区的反义PNA组,以随机PNA组和空白组为对照.免疫细胞化学染色法检测反义PNA对CCR7蛋白表达的影响;趋化试验检测DC的趋化活性.建立大鼠肝移植排斥反应模型,在供肝冷保存和肝移植术后应用反义PNA,以随机PNA组和空白组为对照,观察术后受者存活时间.于术后第7、10天取移植物标本观察肝脏病理学改变;免疫组织化学染色法检测淋巴结DC数量变化以及T淋巴细胞的活化增殖情况.结果 反义PNA显著下调体外培养的DC表达CCR7蛋白,DC体外趋化活性受到明显抑制,与随机PNA组和空白组相比,差异有统计学意义(P＜0.05).肝移植术后,反义PNA组与随机PNA组和空白组相比,受者腹腔淋巴结中DC;数量明显减少,T淋巴细胞活化增殖受到显著抑制,受者术后存活时间明显延长(P＜0.05).结论 通过反义PNA下调CCR7基因表达,阻断DC迁移和抗原提呈,能有效抑制急性排斥反应,延长受者存活时间.     

乌司他丁对肝脏缺血再灌注损伤中线粒体的作用

目的探讨乌司他丁在肝脏缺血再灌注损伤中对线粒体的作用及其机制。方法采用健康杂交狗全肝缺血再灌注模型,检测肝功能、线粒体H+-ATP酶活性及电镜观察线粒体形态的变化。结果肝功能指标的测定:对照组、实验组较假手术组丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)均增高,差异有统计学意义(P<0.05),肝脏缺血再灌注损伤实验模型制作成功。实验组较对照组ALT、AST均降低,差异有统计学意义(P<0.05)。线粒体结构及功能检测:阻断组较假手术组H+-ATP酶活性均降低,差异有统计学意义(P<0.05)。实验组较对照组H+-ATP酶活性均增高,差异有统计学意义(P<0.05)。手术组线粒体分级为0级;对照组:缺血15min线粒体分级为2￣3级;再灌注损伤1h线粒体分级为4级;实验组:缺血15min,分级为1￣2级;再灌注损伤1h线粒体分级为2￣3级。结论乌司他丁对线粒体损伤有保护作用,其作用机制为稳定线粒体脂质双分子膜,增高线粒体H+-ATP酶活性,保护线粒体结构及其功能,从而保护肝细胞,减轻肝脏缺血再灌注损伤。     

sCD40基因修饰树突状细胞抑制T细胞表型及细胞因子分泌

目的探讨sCD40基因修饰树突状细胞（DC）对T细胞表型及Th1和Th2类细胞因子分泌的影响及其体外诱导T细胞免疫耐受的机制。方法分别以sCD40基因及空载体修饰的13（2（实验组和对照组）作为刺激细胞，尼龙毛柱法收集Balb／c小鼠淋巴细胞作为反应细胞，初次进行混合淋巴细胞培养（MLC）7d。在培养的第1、3、4、5、7天时采用新型四唑氮盐（MTS）比色法检测淋巴细胞增殖率；酶联免疫吸附（EuSA）法测定培养液上清中的白细胞介素2（IL-2）、γ干扰素（IFN-γ）、白细胞介素4（IL-4）、白细胞介素10（IL-10）水平；第5天采用流式细胞仪检测CD4^＋、CD8^＋T细胞上CD25及CD69的表达。再次进行MLC5d，在培养的第1、3、5天时检测与初次MLC相同的项目，并比较初次及再次MLC后的各项检测指标。结果初次及再次MLC后，实验组（经sCD40基因修饰的DC）刺激细胞增殖反应明显低于对照组（空载体修饰的DC）。初次MLC中，实验组CD4^＋、CD8^＋T细胞比例及CD4^＋CD25^＋、CD8^＋CD25^＋、CD4^＋CD69^＋、CD8^＋CD69^＋T细胞比例明显低于对照组（P〈0．05）；实验组和对照组培养液上清中IL4和IL-10不能测出，而实验组培养液上清中IFN-γ和IL-2的水平均明显低于对照组（P〈0．01）。再次MLC后，培养液上清中IFN-γ、IL-2和IL-4、IL-10的分泌水平均明显低于对照组（P〈0．01）。结论体外MLC体系中，经sCD40基因修饰的DC可同时作用于CD4^＋和CD8^＋T细胞，使CD69和CD25表达降低，引起T细胞早期活化和成熟障碍，抑制T细胞增殖及Th1和Th2类细胞因子的分泌，诱导出T细胞免疫耐受状态。     

胸腺肽对胆囊癌细胞侵袭能力的抑制作用

目的研究胸腺肽（Ta1）对人胆囊癌细胞株（GBC-SD）侵袭能力的影响。方法培养GBC-SD,将其分为对照组、不同浓度的Ta1给药组（100、200、400μg/m1）。经细胞侵袭实验观察Ta1对GBC-SD细胞侵袭能力的影响;MMPs明胶酶谱分析检测细胞MMP-2、MMP-9的蛋白表达变化。结果与对照组比较,随着Ta1给药浓度的升高,各组癌细胞的侵袭能力呈浓度依赖性下降,各组间的差异有统计学意义（P〈0.05）。Ta1不同浓度组胆囊癌细胞MMP-9蛋白表达较对照组明显下降,且随着Ta1浓度的升高,MMP-9蛋白表达逐渐下降。而Ta1对MMP-2蛋白的表达无明显影响。结论 Ta1对GBC-SD侵袭能力具有抑制作用,且随Ta1浓度的升高,GBC-SD侵袭能力逐渐下降,其机制之一可能是降低了胆囊癌细胞MMP-9的蛋白质表达。     

胆囊良恶性肿瘤中PTEN和Ki-67的表达及其意义

目的探讨PTEN和Ki-67在胆囊良恶性肿瘤中的表达及其意义。方法采用SP免疫组化法对41例原发性胆囊癌和14例胆囊炎、11例胆囊腺癌组织蜡块切片进行染色,检测PTEN和Ki-67蛋白的表达。结果胆囊癌与胆囊炎和胆囊腺瘤组织中PTEN和Ki-67蛋白阳性表达率有明显差异（P〈0.01）。胆囊癌中PTEN呈明显低表达,而Ki-67呈明显高表达。PTEN和Ki-67在性别和年龄上无明显差异（P〉0.05）。PTEN和Ki-67在组织分化和Nevin分期上有明显差异（P〈0.05）,PTEN随着组织分化降低和Nevin分期升高表达明显降低（P〈0.05）,Ki-67则明显升高（P〈0.05）。PTEN和Ki-67在胆囊癌中的表达呈明显负相关（rs=-0.744,P〈0.01）。结论胆囊癌的进展过程中PTEN的低表达与Ki-67的高表达起重要作用。     

Nucleophosmin基因表达载体的构建及其在HepG2中的表达

目的克隆Nucleophosmin(NPM)的编码序列,构建含Nucleophosmin基因的真核细胞表达载体并在肝癌细胞系HepG2中表达,为进一步研究该基因在肝癌多药耐药中的作用奠定基础。方法根据已发表的Nucleophosmin基因的核苷酸序列设计合成一对引物,以人乳腺癌组织抽提的RNA为模板进行反转录-聚合酶链反应(RT-PCR),扩增产物用BamHI和XhoI双酶酶切后定向克隆到真核细胞表达载体pEGFP-N1中,用限制性内切酶酶切重组质粒pEGFP/NPM和DNA序列测定进行鉴定。用脂质体法将pEGFP/NPM导入肝癌细胞系HepG2中,G418选择培养,经免疫组织化学法和RT-PCR鉴定其表达。结果 RT-PCR扩增出长894bp的特异性片段,经克隆至pEGFP-N1后酶切鉴定证实,并测序表明序列与GenBank报道完全一致。pEGFP/NPM在HepG2细胞中有稳定表达。结论成功克隆了NPM的编码序列,构建了其真核细胞表达载体pEGFP/NPM/1,有助于对NPM基因在肝癌多药耐药中的机制做进一步研究。