6株NDV鄱阳株对肝癌细胞杀伤作用的初步研究

目的：研究从江西鄱阳湖野鸭分离的6株NDV对肝癌细胞的杀伤效应，进-步筛选NDV溶瘤毒株。方法：用MTT法研究6株NDV鄱阳株对两株传代肝癌细胞株Novikoff和HepG-2及一株正常肝细胞株HL-7702的杀伤效应。结果：6株NDV鄱阳株对肝癌细胞株Novikoff和HepG-2有湿著杀伤效应，而对人正常肝细胞HL-7702无明显影响；病毒对细胞的杀伤活性与病毒作用剂量和病毒作用时间成正比；病毒在肝癌细胞中有明显复制增殖现象；Novikoff肝癌细胞对NDV敏感性强于HepG-2肝癌细胞。结论：6株NDV鄱阳株对Novikoff及HepG-2肝癌细胞产生显著的杀伤作用，而对正常肝细胞HL-7702未见明显影响。     

新城疫病毒对小细胞肺癌裸鼠移植瘤生长的抑制作用

目的:探讨新城疫病毒(Newcastle disease virus, NDV)7793株在体内对肿瘤生长的抑制作用及机制.方法:体外培养人小细胞肺癌NCI-H446细胞,通过皮下接种NCI-H446细胞建立人小细胞肺癌裸鼠移植瘤模型.NDV组裸鼠瘤内注射新城疫病毒,阳性对照组注射顺铂(cisplatin,DDP),阴性对照组注射PBS.观察移植瘤生长情况和裸鼠体质量变化,绘制肿瘤生长曲线.6周后处死裸鼠剥取肿瘤组织,HE染色观察细胞学变化,免疫组织化学法检测移植瘤细胞Bax和Bcl-2蛋白表达情况.结果:NDV注射对肿瘤生长有显著抑制作用,抑瘤率达34.1%;NDV对荷瘤鼠无不良反应;光学显微镜下观察发现,NDV治疗组肿瘤组织有许多散在分布的凋亡/坏死区域.NDV能明显上调Bax蛋白的表达量(P＜0.01),对Bcl-2蛋白表达则无影响.结论:新城疫病毒7793株在体内能够有效抑制移植瘤生长,其抗肿瘤机制可能与上调Bax蛋白的表达有关.     

女性不孕不育与优生优育4项病毒检查关系的流行病学调查

TORCH是一组病原微生物的英文名称字头组合,TO代表刚地弓形虫,R代表风疹病毒,C代表巨细胞病毒,H代表单纯性疱疹病毒.孕妇感染其中任何一种病毒均可能通过胎盘、产道或母乳传染给胎儿或新生儿,而孕妇本人几乎不表现出明显的症状.胎儿感染可导致流产、早产、死胎或胎儿生长迟缓和畸形,新生儿感染可造成智力障碍、瘫痪、失明以及失聪等严重后遗症.本文对280名不孕不育女性患者进行流行病学调查,为尽可能减少并预防孕妇在妊娠期间感染TORCH,降低不孕不育发病率,提供一些参考意见.     

新城疫病毒7793株抑制人结肠癌LoVo细胞裸鼠移植瘤的生长及其机制

目的:观察新城疫病毒7793株(Newcastle disease virus 7793 strain,NDV 7793)对人结肠癌LoVo细胞裸鼠移植瘤生长的作用,并探讨其可能机制。方法:建立LoVo细胞裸鼠移植瘤模型,随机分成3组,分别静脉注射PBS、5-FU以及NDV 7793,观察各组裸鼠肿瘤的生长情况,流式细胞术检测移植瘤细胞的坏死率和凋亡率,免疫组织化学法检测移植瘤组织中Bax、Bcl-2蛋白的表达,细胞色素C试剂盒检测移植瘤组织中细胞色素C的含量,ELISA法检测移植瘤组织中TNF-α含量。结果:NDV 7793较5-FU更明显抑制LoVo细胞移植瘤的生长(抑制率50.14%vs 37.14%,P<0.05)。NDV 7793组移植瘤LoVo细胞凋亡率显著高于5-FU对照组[(28.7±1.5)%vs(1.46±0.3)%,P<0.01],且NDV 7793组诱导LoVo细胞的凋亡率和坏死率[(28.7±1.5)%vs(27.80±3.32)%]相当。NDV 7793能促进移植瘤组织中Bax蛋白的表达,对Bcl-2蛋白的表达无影响。NDV 7793可提高移植瘤组织中的细胞色素C含量[(2.28±0.68)vs(0.68±0.13)μg/μl]和TNF-α的水平[(489.6±5.2)vs(167.9±3.9)pg/ml]。结论:NDV 7793可抑制人结肠癌LoVo细胞移植瘤的生长,其机制可能与其上调Bax蛋白、细胞色素C和TNF-α的表达,以及促进肿瘤细胞凋亡有关。     

新城疫病毒对人NK细胞表达TRAIL的促进作用

目的:研究新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)刺激自然杀伤(natural killer,NK)细胞产生肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TNF-related apoptosis-inducing ligand,TRAIL)的作用机制。方法:采用免疫磁珠分选(magnetic activated cell sorting,MACS)法,分离得到高纯度的NK细胞;乳酸脱氢酶释放法检测NDV激活的NK细胞对人肝癌HepG2细胞的杀伤作用;实时荧光定量-PCR(real-time fluorogenic quantitative-PCR,RFQ-PCR)检测NDV刺激NK细胞4h后对TRAILmRNA表达水平的影响;FCM检测NDV刺激NK细胞16h时TRAIL蛋白的表达情况;ELISA法检测NDV刺激NK细胞后对其分泌干扰素γ(interferon-γ,IFN-γ)的影响;最后采用抗IFN-γ抗体中和IFN-γ后,再采用FCM检测NDV刺激的NK细胞中TRAIL蛋白的表达情况。结果:FCM检测结果显示,分离得到的NK细胞的纯度达(90.60±1.15)%;NDV刺激NK细胞16h后,明显增强NK细胞的杀伤肿瘤作用,NDV效价为204.8HU刺激组的杀伤率达到(22.28±0.84)%;RFQ-PCR及FCM检测结果显示,不同效价的NDV刺激NK细胞后,NK细胞中TRAILmRNA及蛋白表达水平均明显升高;ELISA检测结果显示,NDV刺激NK细胞后IFN-γ的分泌水平明显增加,在NDV效价为25.6HU刺激16h时达到峰值(796.47±37.87)pg/mL;采用抗IFN-γ抗体中和IFN-γ后,NK细胞中TRAIL蛋白表达水平明显下降。结论:NDV刺激NK细胞后可增强IFN-γ的分泌水平,进而通过IFN-γ上调TRAIL的表达,此途径为NDV刺激NK细胞表达TRAIL的机制之一。此外,NDV直接刺激NK细胞表达TRAIL是另一条重要的途径。     

壮族大学生中HIV-1感染相关基因CCR5多态性的初步研究

目的:了解CCR5Δ32基因突变在广西壮族人群基因组中的分布,初步估计壮族人群对人类免疫缺陷病毒(HIV-1)感染的遗传易感性.方法:分别抽取50名壮族大学生外周血6 ml,从血中提取DNA样品,对其基因组DNA中CCR5基因进行PCR扩增.结果:在50名壮族大学生外周血中未检测到CCR5Δ32基因突变.结论:50名壮族大学生对HIV-1可能较易感.     

Changes and their significances of IFN-γ, TNF-α and IL-2 level in mouse peripheral blood following intraperitoneal injection with influenza viruses

Objective To observe changes of IFN-γ, TNF-α and IL-2 levels in mouse peripheral blood following intraperitoneal injection with influenza viruses. Methods Mice were divided into 3 groups randomly and injected with human H3N2 influenza virus, avian H9N2 influenza virus and sterilized virus-free allantoic fluid, respectively. Sera in different groups were collected at several time points after virus injection, and the levels of IFN-γ, TNF-α and IL-2 in peripheral blood were tested by sandwich ELISA. Statistical analysis was made using analysis of variance and LSD-t test. Results The levels of IFN-γ and IL-2 in peripheral blood in influenza viruses injection groups were significantly higher than those in negative control group, and no significant difference in TNF-α level was found between influenza viruses injection groups and negative control group. Conclusion Intraperitoneal injection with human or avian influenza viruses can promote the production of IFN-γ and IL-2 in mouse peripheral blood, but it has little effect on the production of TNF-α.     

NDV7793活化的NK细胞对人肝癌HepG2细胞的杀伤及其机制研究

目的:研究NDV7793激活的NK细胞对人肝癌HepG2细胞的杀伤作用,并探讨可能的相关机制。方法:用免疫磁珠分离法分离人NK细胞,用乳酸脱氢酶释放法(LDH法)检测不同血凝单位(25.6Hu,51.2Hu,102.4Hu,204.8Hu,512.0Hu)的NDV7793刺激NK细胞后对人肝癌HepG2细胞的杀伤作用,分别用ELISA法和流式细胞术检测活化后的NK细胞分泌肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的水平及细胞膜表面的TRAIL蛋白表达水平。结果:人外周血NK细胞分离纯度达(90.6±1.15)%;NDV7793能提高NK细胞对人肝癌HepG2细胞的杀伤作用,其杀伤效力(释放的LDH活力值)随着效靶细胞作用时间的增加及效靶细胞比的增大而增强;NDV7793能显著提高NK细胞TNF-α的分泌水平,其中204.8HuNDV7793刺激NK细胞12h后,TNF-α分泌水平达到高峰(0.184±0.01);102.4HuNDV7793刺激NK细胞16h后,NK细胞膜表面TRAIL表达达到高峰(22.77±1.8)%。结论:NDV7793能增强NK细胞对人肝癌HepG2细胞的杀伤作用,杀伤机制可能是和提高NK细胞分泌的TNF-α及上调细胞膜表面TRAIL蛋白有关。     

NDV7793促进人CD4＋T细胞表达TRAIL的实验研究

目的：研究新城疫病毒（Newcastle disease virus,NDV）弱毒株NDV7793能否促进人CD4＋T细胞表达肿瘤坏死因子相关凋亡因子诱导配体（TNF-related apoptosis-inducing ligand,TRAIL）。方法：首先用免疫磁珠分选法（magnetic activated cell sorting,MACS）分选外周血静止CD4＋T细胞,然后加抗CD3抗体、抗CD28抗体和白细胞介素-2（interleukin-2,IL-2）使之成为能被NDV激活的CD4＋T细胞。用流式细胞技术（flow cytometry, FCM）检测NDV刺激的CD4＋T细胞的TRAIL的表达水平。结果：MACS法分选外周血得到的CD4＋T细胞纯度达到（97.38±0.28）%;能被NDV激活的CD4＋T细胞表面分子CD25和CD69双阳性表达率可达（29.30±1.08）%,与PBS阴性对照组（2.40±1.30）%相比,差异有统计学意义（P〈0.05）;FCM检测结果显示,与对照组比较, NDV7793刺激的CD4＋T细胞TRAIL表达水平均有显著升高,且在NDV7793效价为25 HU时达到最大值。结论：NDV7793可刺激CD3抗体、CD28抗体和IL-2预先活化的CD4＋T细胞表达TRAIL。