人CYP450 2E1异源性表达模型的建立及底物的表达诱导作用

目的:探讨化学致癌物二亚硝基哌嗪(DNP)对人CYP2E1异源表达的诱导作用。方法:脂质体介导法将外源人CYP2E1cDNA导入NIH3T3细胞,G418筛选后挑取克隆,Southernblot鉴定外源基因的整合,用不同浓度乙醇和DNP处理阳性克隆,RT-PCR和Westernblotting检测各组细胞CYP2E1表达水平。结果:获得二个具有外源基因CYP2E1cDNA整合及稳定表达的细胞克隆;随着乙醇和DNP处理浓度的提高,细胞CYP2E1mRNA和蛋白质水平的表达增强。结论:DNP与乙醇能稳定诱导CYP2E1异源表达,其作用可能与其mRNA转录增强有关;DNP致癌可能与CYP2E1对其原位代谢活化相关。     

细胞色素p450 2E1基因在鼻咽组织中的表达及多态性分析

鼻咽癌 (ＮＰＣ)的化学病因主要涉及亚硝胺类化合物 ,这类物质需经体内细胞色素ｐ450 2Ｅ1 (ＣＹＰ2Ｅ1 )等酶代谢活化后方具致癌潜能。我们曾单独用二亚硝基哌嗪 (ＤＮＰ)体外诱导人鼻咽上皮细胞 ,获得恶性转化表型 ,而对ＤＮＰ的活化过程却不明确。方法和结果 :采用ＲＴ -ＰＣＲ和Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ方法检测了正常鼻咽上皮细胞 ,首次发现ＣＹＰ2Ｅ1在鼻咽部的表达 ,提示ＤＮＰ在体外作用于鼻咽细胞后可能被ＣＹＰ2Ｅ1代谢活化而致细胞癌变 ,为ＮＰＣ的化学病因提供了重要证据。另有研究提示在ＣＹＰ2Ｅ1基因上游 5’ -侧端区调控序列…     

矿物纤维理化特性与致癌

矿物纤维理化特性与致癌刘京跃，贺智敏综述陈主初审校ＮＩＥＨＳ，Ｕ．Ｓ．Ａ湖南长沙医科大学肿瘤研究所长沙４ｌ０００８矿物纤维分为天然矿物纤维（ＮａｔｕｒａｌＭｉｎｅｒａｌＦｉｂｅｒｓ）和人造矿物纤维（Ｍａｎ－ＭａｄｅＭｉｎｅｒａｌＦｉｂｅｒｓ）两大类。...     

ASSAY OF SENSITIVITY OF CANCER CELL TO ANTICANCER DRUG IN GLASS CAPILLARIES

A newly established human tumor clonogenecity assay - the glass capillary tube culture technique (CAP assay) to described. With this method, we observed the in vitro anticancer efficiency of several antineoplastics on human solid tumors and acute non-lymphatic leukemia (ANLL) specimen. Comparing with the conventional two-layer agar culture assay (2-LAC assay). The CAP-assay had a higher culture success rate, higher plating efficiency (PE) and shorter experimental period. The preliminary data suggesting and that the CAP assay has the potential to replace the conventional 2- LAC assay for in vitro drug- sensitivity testing and may be applied clinically.     

TCRP1通过PI3k-Akt途径介导口腔鳞癌顺铂化学治疗耐受

目的:研究新的耐药相关基因TCRP1在口腔鳞癌组织中的表达及其与顺铂临床疗效的关系,同时对TCRP1的作用机制进行初步探索。方法:采用免疫组织化学法检测TCRP1在舌癌组织中的表达及其与临床顺铂化学治疗疗效之间及体外药敏实验的相关性,Western印迹法及免疫共沉淀甄别TCRP1下游的作用分子。结果:在TCRP1低表达的患者中,缓解率达84.62%,而高表达患者组中缓解率为37.5%。体外药敏结果显示类似的结果。TCRP1表达改变影响Akt信号通路分子的表达,而且TCRP1与Akt存在物理上的相互结合。结论:TCRP1的表达影响口腔鳞癌的顺铂化学治疗疗效。TCRP1介导顺铂耐药的作用机制至少部分与TCRP1对Akt信号通路调节有关。     

反义四环素转录激活子表达细胞系的构建及鉴定

目的:构建反义四环素转录激活子(reverse Tc-controlled transactivator,rtTA)表达细胞系。方法:将RevTet-On基因表达系统中调控载体pRevTet-On转染NIH3T3细胞,经G418筛选及RT-PCR鉴定。结果:获得7个rtTA不同表达水平的细胞克隆。结论:成功构建rtTA表达细胞模型,为进一步研究特定外源基因的功能提供一个理想实验平台。     

人体肿瘤干细胞软琼脂集落培养——Ⅲ、玻璃毛细管法

作者采用玻璃毛细管法对人体实体瘤和急性非淋巴细胞白血病共40份标本进行了体外集落培养,成功率为80％(32/40),集落形成率介于0.045％—0.79％之间。此法简便可靠,可用于测定体外药物敏感信息,适宜国内推广使用。     

家兔MT-Ⅰ基因克隆及其在大肠杆菌中的表达与分离

采用RT-PCR方法扩增镉诱导后的家兔肝脏金属硫蛋白-Ⅰ(Metallothionein-Ⅰ,MT-Ⅰ)基因的cDNA全长,克隆入原核融合表达载体pQE40,转化大肠杆菌M15.菌落印迹法检测阳性菌株;Western blotting 分析重组融合蛋白的表达方式;经SDS-PAGE电泳后,ImageMaster VDS software 分析融合蛋白诱导表达条件;并采用Ni-NTA agarose纯化融合蛋白.结果发现,重组融合蛋白在原核细胞中表达存在可溶和不可溶(包涵体)两种形式,表达量随IPTG诱导时间延长而增加,9 h达高峰(占菌体不溶性蛋白总量的57.4%),经Ni-NTA亲合层析纯化得到重组融合蛋白,为进一步分离目的蛋白单体并研制和开发这一产品提供了可靠依据.     

PIK3CA在不同鼻咽癌细胞株中的表达及其与放射敏感性的关系

放射治疗是鼻咽癌的主要治疗手段,而相对放射抵抗的亚细胞系残存并增殖,成为复发的根源.临床实践表明,即使是同一病理类型的鼻咽癌患者对放射线的敏感性也不同,对于不同的鼻咽癌患者的治疗需要放疗的个体化.因此,发现预测鼻咽癌放射敏感性相关分子标志物,对指导鼻咽癌个体化治疗和改善其预后具有重要的意义.     

LMP1羧基末端第三活性区对鼻咽上皮细胞生物学特性的影响

目的探讨EB病毒潜伏性膜蛋白1（LMP1）羧基末端第三活性区在鼻咽上皮细胞生长中的作用。方法采用逆病毒感染的方法,建立稳定表达野生型LMP1（LMP1^WT）和突变型LMP1（LMP1^△232-351）的鼻咽上皮细胞（NP69）系,然后通过细胞生长曲线、平皿克隆形成与软琼脂集落实验、细胞周期与抗凋亡检测等方法,观察LMP1羧基末端第三活性区对鼻咽上皮细胞生物学特性的影响。结果LMP1^△232-351体外促转化细胞生长能力较LMP1^WT明显降低（P〈0.01）;NP69-LMP1^△232-351细胞的凋亡与细胞G1期分布均较NP69-LMP1^WT细胞增加（P〈0.01）。结论LMP1羧基末端第三活性区可能通过调节细胞周期与凋亡而影响鼻咽上皮生物学特性。