应用抑制性消减杂交技术克隆和筛选白血病多药耐药相关基因

目的 克隆和筛选白血病多药耐药（MDR）相关基因。方法 以MDR白血病细胞株K562/DOX为检测样本。以K562细胞株为驱赶样本（对照）。应用抑制性消减杂交（SSH）技术分离和克隆K562/DOX细胞中过高表达的基因。构建cDNA消减库；通过反向Northern斑点杂交法进一步筛选消减库，对阳性克隆进行序列测定和同源性分析；并采用RT-PCR和Northern blot方法对某些阳性克隆进行进一步的验证。结果 发现了11个在K562/DOX细胞中高表达的基因。包括S3核糖体蛋白（S3ribosomal protein,S3rp)基因，尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸脱氢酶亚单位2（NADHdehydrogenase subunit2,ND2）基因，My023基因等，其中多数基因与肿瘤MDR的关系尚未见报道。结论 筛选到几个可能与白血病MDR形成有关的基因。提示了白血病MDR发生的新机制。     

美罗华治疗慢性淋巴细胞白血病并发贫血和血小板减少1例

患者 ,女 ,45岁。 1 999年 6月体检时发现外周血ＷＢＣ增高而就诊于某医院。当时体检 :两侧颈部可触及肿大之淋巴结 ,脾肋下 2ｃｍ。血象 :ＷＢＣ2 3 .9× 1 0 9/Ｌ ,Ｌ 0 .6 8,Ｈｂ和ＰＬＴ正常。骨髓象 :有核细胞增生明显活跃 ,红系 0 .0 7,成熟淋巴细胞0 .6 75 ,幼淋 0 .0 8。诊断 :慢性淋巴细胞白血病(ＣＬＬ)。未予特殊治疗 ,门诊随访。 2 0 0 0年 7月自觉头昏乏力明显收住我院。体检 :重度贫血貌。两侧颈部各可触及 1～ 2枚肿大之淋巴结 ,1ｃｍ× 1ｃｍ～ 2ｃｍ× 2ｃｍ大 ,质硬。脾肋下 4ｃｍ。实验室检查 :ＷＢＣ 8.4× 1 0 9/Ｌ ,…     

青蒿琥酯对不同急性白血病细胞株凋亡抑制的实验研究

[目的]观察青蒿琥酯对不同急性白血病细胞株的增殖抑制作用及凋亡机制探讨。[方法]应用不同浓度青蒿琥酯作用U937、HL60、Jurkat细胞株,MTT法检测抑制率;细胞形态学、DNA琼脂糖凝胶电泳、流式细胞术检测细胞凋亡;Western-blot法检测细胞凋亡过程中Bcl-2、Bax、Caspase 8和ICAD蛋白表达的变化。[结果]青蒿琥酯能够明显抑制U937、HL60、Jurkat细胞增殖;8μg/ml以上浓度青蒿琥酯作用三种细胞24h、48h、72h抑制率均为Jurkat〉HL60〉U937(均P<0.01);其增殖抑制作用与诱导细胞凋亡有关;随药物浓度的增高Bcl-2和ICAD蛋白表达量下降,而Bax蛋白表达上调,Caspase8蛋白出现明显的剪切激活带。[结论]青蒿琥酯既能通过线粒体途径又能通过外源性途径诱导急性白血病细胞凋亡,对Jurkat的抑制最强。     

1,25-二羟基维生素D_3诱导HL-60细胞分化并下调nm23基因的表达

目的　观察 1,2 5 二羟基维生素D3 [1,2 5 (OH) 2 D3 ]对白血病细胞株HL 6 0的诱导分化作用并探讨其机制。方法　通过MTT试验、细胞形态观察、表面标志分析和硝基四氮唑蓝 (NBT)还原反应 ,观察 1,2 5 (OH) 2 D3 作用后HL 6 0细胞增殖的改变和分化情况 ;通过流式细胞仪和RT PCR检测细胞周期和nm2 3基因表达的变化。结果　HL 6 0细胞经 1,2 5 (OH) 2 D3 作用后增殖受抑制、向成熟单核细胞系分化、细胞被阻滞在G1 期、nm2 3基因的表达下调。结论　 1,2 5 (OH) 2 D3 对HL 6 0细胞株具有诱导分化作用 ,其作用机制可能与下调nm2 3基因的表达有关。     

青蒿琥酯诱导HL-60细胞凋亡的研究

本研究旨在研究青蒿琥酯体外诱导HL-60细胞凋亡及其过程中Bcl-2与ICAD蛋白表达的变化。采用MTT法测定青蒿琥酯对HL-60细胞的生长抑制作用;用光学显微镜检、琼脂糖凝胶电泳、流式细胞术观察和检测青蒿琥酯诱导HL-60细胞的凋亡;应用蛋白印迹法检测青蒿琥酯诱导HL-60细胞凋亡过程中Bcl-2与ICAD的表达变化情况。结果表明：青蒿琥酯对HL-60细胞有明显的生长抑制作用,并呈时间、剂量依赖性。48小时IC50值为18.33μg/ml,其增殖抑制作用与诱导细胞凋亡有关;Bcl-2和ICAD在HL-60细胞中均有表达,且随药物浓度的增高表达量逐渐降低。结论：青蒿琥酯可诱导HL-60细胞凋亡,Bcl-2和ICAD在青蒿琥酯诱导HL-60细胞凋亡的信号传导途径中可能是重要的调控因子。