胃癌细胞凋亡中miR-301的作用及其机制

采用实时定量PCR技术检测60例胃癌、癌旁组织、胃癌细胞株中的miR-301表达,并探讨miR-301作用机制。结果发现胃癌组织、胃癌细胞株中miR-301高表达,抑制miR-301影响细胞凋亡;整合膜蛋白2A为miR-301直接调控基因。miR-301能通过调控靶基因参与胃癌细胞凋亡。     

脂质体转染VEGF-C反义寡核苷酸对人胃癌OCUM-2MD3细胞VEGF-C表达的影响

目的探讨脂质体转染VEGF-C反义寡核苷酸在人胃癌OCUM-2MD3细胞中的转染效率及对VEGF-C表达的影响。方法以VEGF-C基因翻译起始区为靶点合成反义寡核苷酸,脂质体介导转染人胃癌OCUM-2MD3细胞,荧光显微镜观察转染效率,RT-PCR检测转染后VEGF-CmRNA表达水平,流式细胞术检测VEGF-C蛋白表达。结果经脂质体介导可成功将VEGF-C反义寡核苷酸转染至胃癌OCUM-2MD3细胞,12 h达其峰值87.93%。反义组VEGF-CmRNA相对吸光度值为0.38±0.11,显著低于正义组(0.83±0.17)和对照组(0.80±0.14)(P<0.01)。反义组VEGF-C蛋白表达水平(31.26±5.17)%,较正义组(41.83±7.49)%和对照组(38.65±7.11)%亦明显下降(P<0.01)。结论VEGF-C反义寡核苷酸经脂质体介导转染胃癌OCUM-2MD3细胞,可降低胃癌细胞VEGF-CmRNA及其蛋白表达水平。     

梗阻性黄疸大鼠肾皮质微循环变化及丹参的治疗作用

目的 探讨梗阻性黄疸大鼠肾皮质微循环变化及丹参的干预效果.方法 将SD大鼠分为假手术组(A组),胆总管结扎组(B组),丹参干预组(C组),每组分3、7、10 d三个时相,每个时相8只.应用WX-9型微循环显微镜观测各组相应时相肾皮质微血管管径和密度变化及微血管周围的渗出情况.结果 B组与A组比较各时相肾皮质微血管收缩,7、10 d组微血管数量减少,并随时间延长血管收缩、数量减少更加明显(P＜0.05),B组7、10 d微血管周围出现渗出.C组与B组比较7、10 d肾皮质微血管扩张,数量增加(P＜0.05),C组7、10 d微血管周围渗出减轻.结论 梗阻性黄疸可引起大鼠肾皮质微循环障碍,丹参注射液可改善肾皮质微循环.     

Survivin反义寡核苷酸对人卵巢癌细胞株中survivin和SMAC/DIABLO基因表达的影响

目的 观察survivin反义寡核苷酸(ASODN)对人卵巢癌细胞株SKOV3中survivin、Smac/DIABLO表达的影响,探讨survivin、Smac/DIABLO在ASODN诱导卵巢癌细胞凋亡和细胞周期改变中的作用和分子机制.方法 用脂质体(LipofectamineTM 2000)介导survivin ASODN转染人卵巢癌细胞株SKOV3,用MTT比色法检测细胞生长活性,流式细胞学技术检测细胞凋亡指数、细胞周期分布及survivin、Smac蛋白表达改变,逆转录酶链反应检测survivin、Smac/DIABLO基因表达改变.结果 同对照组比较,不同浓度ASODN作用后细胞生长明显减慢,转染后48 h IC50在600 nmol/1左右.用600 nmol/LASODN转染48h后,细胞凋亡指数(AI)明显增加,(t=6.3671,P＜0.05);更多的细胞停留在G0/G1期(t=10.3832,P＜0.01).Survivin mRNA和蛋白表达明显下调(t=3.5031,P＜0.05,t=7.8146,P＜0.01),SmacmRNA和蛋白表达上调(t=2.8011,P＜0.05,t=11.3917,P＜0.01).结论 ASODN诱导细胞凋亡,使更多的细胞停留在G0/G1期,减少进入有丝分裂细胞数的作用,是通过下调survivin基因,上调Smac基因表达来共同完成的,survivin、Smac/DIABLO基因在调节SKOV3细胞周期、凋亡的功能上密切相关,二者的相互作用是卵巢癌发生、发展的重要分子机制之一.     

进展期胃癌新辅助治疗后病理完全缓解相关因素分析及风险预测模型建立

目的:探讨局部进展期胃癌新辅助治疗后病理完全缓解(pathological complete response,pCR)的临床相关因素。方法:回顾性分析2011年6月至2018年3月河北医科大学第四医院收治的452例局部进展期胃癌患者cT3～4N+～M0新辅助治疗及手术的临床资料,采用单因素分析及Logistic多因素回归分析法研究pCR的临床相关因素。结果:452例患者全部完成新辅助治疗及根治性手术,其中44例(9.7%)患者达到pCR。治疗前T分期为T3期、肿瘤最长径<4 cm、治疗前CA199≤30 U/mL、治疗结束与手术时间间隔≥6周、同步放化疗或联合靶向治疗方案与进展期胃癌新辅助治疗后高pCR率有关(均P<0.05)。治疗前T分期为T3期、CA199≤30 U/mL、肿瘤最长径<4 cm、新辅助同步放化疗或联合靶向治疗是影响进展期胃癌新辅助治疗后出现pCR的独立因素(均P<0.05)。以上每项指标出现pCR的预测评分均为1分。评分>2分患者出现pCR的概率为34.48%,评分≤2分患者出现pCR的概率为6.09%。结论:治疗前临床分期、CA19...     

4-1BB基因在不同分化胃癌细胞株中的表达

目的：研究共刺激因子4-1BB在人胃高分化腺癌细胞株MKN-28、人胃中分化腺癌细胞株SGC-7901、人胃低分化腺癌细胞株BGC-823、人胃粘液腺癌细胞株MGC-803中的表达及其生物学意义。方法：用RT-PCR法测定胃癌细胞株中4-1BB mRNA表达;免疫细胞化学法测定胃癌细胞株中4-1BB蛋白表达;MTT法测定人淋巴细胞对胃癌细胞的体外杀伤活性;ELISA法检测人淋巴细胞与胃癌细胞共培养上清液中IL-2、IL-10、TNF-α的含量。结果：RT-PCR结果示4-1BB mRNA表达率从高到低依次为：MGC-803（77.30%）、BGC-823（71.68%）、SGC-7901（40.06%）、MKN-28（37.65%）。免疫细胞化学结果显示4-1BB着色程度由深到浅依次为：MGC-803、BGC-823、SGC-7901、MKN-28。MTT结果显示各时间段（24、48、72h）不同效靶比（10∶1,20∶1,40,∶1）下,人淋巴细胞对胃癌细胞的体外杀伤活性由高到低的顺序为：MKN-28、SGC-7901、BGC-823、MGC-803。ELISA结果显示在各效靶细胞比下,人淋巴细胞与胃癌细胞共培养上清液中IL-2、TNF-α的含量由高到低的顺序均为：MKN-28、SGC-7901、BGC-823、MGC-803。而IL-10的含量由高到低的顺序为：MGC-803、BGC-823、SGC-7901、MKN-28。结论：人胃癌细胞株MKN-28、SGC-7901、BGC-823、MGC-803中4-1BB基因的mRNA和蛋白均有表达,且胃癌细胞株的恶性程度越高其4-1BB表达水平越高;淋巴细胞对低表达4-1BB胃癌细胞的杀伤力较高;提示4-1BB可能通过抑制细胞因子TNF-α、IL-2和促进细胞因子IL-10的产生调节肿瘤免疫。     

沉默KLF11表达通过Wnt/β-catenin信号通路对胃癌细胞BGC823增殖和凋亡的影响

目的:探讨KLF11在胃癌组织中的表达及其对胃癌细胞BGC823增殖和凋亡的影响。方法:收集60例胃癌组织及其对应的癌旁组织,用RT-PCR检测KLF11 mRNA表达,通过小分子RNA干扰抑制胃癌细胞BGC823中KLF11表达水平;MTT法检测细胞的活力;流式细胞仪检测细胞周期、凋亡率;采用Western blot...     

胃癌组织及区域淋巴结微转移与胃癌生物学标志基因的临床关系

目的 从分子水平上,探讨细胞角蛋白(CK6、CK18)联合检测在胃癌淋巴结微转移中的诊断价值和临床意义.方法 应用RT-PCR方法,以CK6、CK18为标志基因,检测正常胃黏膜60例,原发胃癌组织60例,胃癌组无转移淋巴结(PNo)180枚,比较其表达差异以及与临床病理参数之间的关系.结果 ①60例正常胃黏膜中几乎无CK6、CK18的表达;②原发胃癌组织和其相应的淋巴结转移灶中CK6、CK18的表达相一致;③CK6在淋巴结转移灶中的表达水平低于原发癌中的表达水平,而CK18则相反;④CK6阳性多在WHO分型中的高分化腺癌及其他特殊类型癌组织中存在;在芬兰Lauren分类中,CK6多在肠型胃癌组织和淋巴转移灶中表达;⑤CK6的表达与较好的分化程度,较轻的病变进展,较浅的肿瘤浸润、较早的肿瘤分期有关;⑥CK18多表达在胃腺癌中;⑦CK18在较晚期的肿瘤中表达较多;⑧CK18淋巴结微转移多发于pTNM三期以上的肿瘤;⑨在原发肿瘤以及淋巴结转移灶中,CK6、CK18的表达与患者的性别、年龄无明显统计学差异.结论 用RT-PCR法检测胃癌无转移淋巴结CK6、CK18 mRNA是发现胃癌淋巴结微转移敏感而特异的方法,对胃癌临床分期及指导治疗有较大的临床意义.     

Tat结合蛋白30在胃癌肿瘤组织中的表达及其与患者预后的关系研究

背景　胃癌是一种侵袭性强、预后差的恶性肿瘤,明确有效的治疗靶点对胃癌的治疗具有重要意义。Tat结合蛋白30（TIP30）是新发现的一种抑癌基因,其具有多种功能,包括抑制肿瘤生长、诱导凋亡和抑制血管生成的特性。目前国内外关于TIP30与胃癌相关性的研究鲜有报道。目的　探究TIP30在胃癌肿瘤组织中的表达情况,并分析其与患者预后的关系。方法　收集2012年5月-2013年2月在河北医科大学第四医院行手术治疗的106例胃癌患者的肿瘤组织石蜡标本。另收集2017年就诊于河北医科大学第四医院行胃镜活检的30例胃溃疡患者的正常胃黏膜组织标本。采用免疫组化法检测肿瘤组织和正常胃黏膜组织TIP30、基质金属蛋白酶9（MMP-9）表达情况。分析TIP30、MMP-9在肿瘤组织及正常胃黏膜组织中的阳性表达情况,不同临床特征与肿瘤组织TIP30、MMP-9表达情况以及肿瘤组织中TIP30、MMP-9表达情况的关系。随访截至2018-02-28。采用Kaplan-Meier法绘制胃癌患者的生存曲线,并分析胃癌患者预后的影响因素。结果　TIP30在肿瘤组织中的阳性表达率为41.5%（44/106）,低于胃正常黏膜组织的86.7%（26/30）（χ2=19.089,P<0.001）。不同浸润深度、淋巴结转移情况、TNM分期患者肿瘤组织中TIP30表达情况比较,差异有统计学意义（P<0.05）。MMP-9在肿瘤组织中的阳性表达率为82.1%（87/106）,高于正常胃黏膜组织的23.3%（7/30）（χ2=37.800,P<0.001）。不同浸润深度、淋巴结转移情况、TNM分期患者肿瘤组织中MMP-9表达情况比较,差异有统计学意义（P<0.05）。Spearman秩相关分析结果显示,肿瘤组织中TIP30、MMP-9表达呈负相关（rs=-0.405,P<0.001）。TIP30阳性表达的胃癌患者中位生存时间为45个月,TIP30阴性表达的胃癌患者中位生存时间为23个月;不同TIP30表达情况的胃癌患者生存曲线比较,差异有统计学意义（χ2=9.025,P=0.003）。Cox比例风险回归模型分析结果显示,淋巴结转移情况〔HR=2.842,95%CI（1.597,5.057）〕、TIP30表达情况〔HR=0.517,95%CI（0.299,0.895）〕是胃癌患者预后的影响因素（P<0.05）。结论　TIP30在胃癌肿瘤组织中低表达,且与肿瘤的侵袭转移有关,同时是患者预后的影响因素。     

大肠癌细胞DNA倍体分析及其临床意义

应用流式细胞术对５２例大肠癌行肝瘤、交界和残端组织ＤＮＡ倍体分析，以深讨倍体与大肠癌组织学类型、癌浸润深度、淋巴结转移以及临床分期的关系。结果：肿瘤组织均为异倍体，残端组织为二倍体，少数病例残端组织学阴性，而ＤＮＡ含量仍为异常值，Ｓ．Ｇ２、Ｍ（细胞周期）增高，细胞增殖活跃。