郑州市食品卫生微生物实验室质控工作与体会

为提高我省食品卫生微生物检验质量，将检验误差控制在允许的限度之内，使检验结果达到给定置信水平下的精密度、准确度。省食品卫生监督检验所对我站食品卫生微生物检验室进行了微生物质控考核工作，现将实验结果与工作体会报告如下：１材料与方法１．１材料由省食品卫生...     

某污水处理厂职业卫生学调查与评价

为了解污水处理项目职业卫生学状况，应用《建设项目职业病危害评价规范》，对郑州市污水处理厂进行了职业卫生学调查与评价。本次调查结果较直观地表达了各车间及总体工程的卫生学状况，为企业有毒有害因素防治提供了可靠的依据，为预防性卫生监督工作开展起到积极的作用。     

乙型肝炎病毒（adr亚型）转基因小鼠的研究

目的：制备含有2.0拷贝乙型肝炎病毒（HBV,adr亚型）基因组的转基因小鼠,为HBV相关医学问题的研究准备实验动物模型。方法：应用受精卵原核显微注射的方法,产生HBV转基因小鼠。用PCR, Southern-blotting杂交、放射免疫、免疫组织化学以及亚显微结构分析等方法,研究外源基因在转基因小鼠体内的整合、表达以及复制。应用常规病理切片及血清生物化学方法分析转基因小鼠的病理学改变。结果：得到了4只整合有HBV基因组的建立者小鼠,并证明HBV基因在转基因小鼠体内可以稳定遗传,在肝、肾组织内可特异性表达、复制,并在肝细胞内发现了Dane颗粒。转基因小鼠的肝、肾组织未见明显的病理学改变。结论：获得了HBV的转基因小鼠,其病毒基因可以表达,并有病毒颗粒形成。该小鼠对于HBV的各个基因产物是免疫耐受的,其基本生物学特性与人类的HBV携带者特征相似。     

乙型肝炎病毒纯合子转基因小鼠(adr 1.2)的培育

目的：通过遗传学育种使外源基因整合位点随机的HBV转基因小鼠成为单一整合位点的纯合子转基因小鼠。方法：产生founder小鼠以后,将正常小鼠与转基因小鼠交配,通过PCR,Dot-blotting,Southern-blotting等方法检测 HBV DNA在转基因小鼠体内的整合状况,阳性率达50％左右后,进行近亲交配。结果：共得到了7代HBV转基因小鼠,其中包含有整合HBV基因纯合子的转基因小鼠。结论：外源基因在转基因小鼠体内可以稳定遗传,并得到了整合有HBV基因的纯合子转基因小鼠。 目的：通过遗传学育种使外源基因整合位点随机的HBV转基因小鼠成为单一整合位点的纯合子转基因小鼠。方法：产生founder小鼠以后,将正常小鼠与转基因小鼠交配,通过PCR,Dot-blotting,Southern-blotting等方法检测 HBV DNA在转基因小鼠体内的整合状况,阳性率达50％左右后,进行近亲交配。结果：共得到了7代HBV转基因小鼠,其中包含有整合HBV基因纯合子的转基因小鼠。结论：外源基因在转基因小鼠体内可以稳定遗传,并得到了整合有HBV基因的纯合子转基因小鼠。 目的：通过遗传学育种使外源基因整合位点随机的HBV转基因小鼠成为单一整合位点的纯合子转基因小鼠。方法：产生founder小鼠以后,将正常小鼠与转基因小鼠交配,通过PCR,Dot-blotting,Southern-blotting等方法检测 HBV DNA在转基因小鼠体内的整合状况,阳性率达50％左右后,进行近亲交配。结果：共得到了7代HBV转基因小鼠,其中包含有整合HBV基因纯合子的转基因小鼠。结论：外源基因在转基因小鼠体内可以稳定遗传,并得到了整合有HBV基因的纯合子转基因小鼠。     

庚型肝炎病毒E2蛋白在转基因小鼠细胞内的定位及致病性研究

目的 :在已建成庚型肝炎病毒 (HGV)转基因小鼠模型的基础上 ,研究 HGV包膜蛋白 E2在转基因小鼠体内的表达及定位 ,并探讨 HGV在转基因小鼠体内是否引起病理学改变。 方法 :取小鼠的器官组织用免疫组织化学方法 ,以 HGV E2蛋白的单克隆抗体对 HGV包膜蛋白 E2的表达进行分析和定位。通过血清 AL T检测及常规病理学技术观察转基因小鼠不同器官的病理学变化。 结果 :免疫组织化学结果表明 ,HGV E2主要表达于转基因小鼠肝细胞膜 ,少量表达于胞质内 ;肾脏、心脏、肺及脾脏均未呈现 E2蛋白的阳性反应。组织病理学检查显示转基因小鼠的肝细胞出现水样变性、脂肪变性及淋巴细胞浸润等轻度炎性反应 ,这些变化不随年龄增长而加重 ;其他组织的病理学检查无异常。转基因小鼠血清转氨酶 AL T与对照小鼠无明显差异。 结论 :HGV包膜蛋白 E2的表达具有相对的嗜肝性 ,主要分布在转基因小鼠的肝细胞膜 ,并可引起轻度肝细胞损伤。     

整骨膏外贴促进骨折愈合动物实验报告

观察整骨膏外贴促进动物骨折愈合效果。应用动物犬，分A、B、C三组，分别运用自由落体法制成后肢闭合性骨折，经复位后，分别对A组用速应接骨膏外贴，B组用整骨膏外贴，C组不用任何外用药，按不同时期摄X线片进行观察，分析骨痂生长情况。结果显示，整骨膏外贴组骨痂生长速度及骨痂质量均较其它二组快，质量也高。     

重组人源甲胎蛋白在毕赤酵母中的高效表达及纯化

目的：从毕赤酵母GS115蛋白表达体系入手,实现人源甲胎蛋白（AFP）的重组克隆、异源高效表达、蛋白纯化并得到具有临床免疫原性的高纯度AFP。方法通过聚合酶链反应（PCR）从重组质粒pReceiver‐AFP扩增到目的基因片段,构建酵母重组表达质pPICZαA‐AFP,经测序比对与GenBank公开的AFP序列一致。将重组质粒pPICZαA‐AFP转入毕赤酵母GS115,通过甲醇诱导表达目的蛋白AFP。收集蛋白后用硫酸铵分级沉淀法对AFP进行纯化,高效液相色谱法（HPLC）检测纯度,在临床医院通过电化学发光法对其蛋白含量定值。结果研究发现AFP在酵母GS115中经甲醇诱导表达主要分泌到胞外培养基上清,免疫印迹试验能够检测到AFP蛋白条带,经硫酸铵分级沉淀,87％AFP目的蛋白存在于55％硫酸铵沉淀集份,HPLC检测其纯度为98．844％,电化学发光法检测其水平为3473ng／mL。最后与临床肝癌患者血清标本比对,蛋白的相对分子质量大小一致,表明其糖基化水平与临床标本相当。结论通过毕赤酵母甲醇诱导表达系统可以制备高纯度的、具有生物活性的、可用于肿瘤临床检测的AFP标准物质及其可以溯源的校准品、质控品和相关诊断试剂。     

犬芥子气全身中毒后心肌酶的变化

目的探讨血清肌酸激酶 (CK)和肌酸激酶同工酶 (CK -MB)作为早期反映芥子气损伤指标的意义。方法以成年家犬为中毒模型 ,中毒剂量为 12mg·kg- 1,皮下注射。随机分为中毒对照组 (4条 ) ,治疗组 (6条 ) ,治疗组动物在中毒后 30min即进行相应的药物治疗。于中毒前所有犬各测一次CK、CK -MB的基础值 ,并于中毒后每日检测心肌酶的动态变化。对中毒致死动物及存活动物 (中毒或治疗后 11d及 2 8d)进行剖验 ,观察心肌细胞在光镜下组织学改变。结果中毒对照组犬于 3d内死亡 3条 ,治疗组犬全部成活。两组犬的CK、CK -MB值在中毒后均大幅度升高 ,中毒对照组尤甚 ,中毒后第 2天治疗组的CK与CK -MB值较中毒对照组分别下降5 3.7%和 4 0 .9% (P <0 .0 5 )。第 4天起治疗组的CK、CK -MB有明显的回落 ,之后趋于正常。 3d内死亡犬心肌细胞损伤较为明显 ,而存活至中毒后 11d或 2 8d犬心肌细胞未见异常。结论血清CK与CK -MB在芥子气中毒早期即显著升高 ,是反映芥子气损伤较敏感的指标     

病毒研究的新体系——转基因动物

转基因动物是通过遗传操作，使外源基因在体内稳定遗传的动物。转基因动物体系是研究基因功能的新手段，在病毒学研究中有广泛的运用前景。越来越多的含有病毒基因、病毒受体基因的转基因小鼠用于病毒与受体，病毒与宿主相互作用和功能的研究，从而探讨病毒的致病机理及防治方法。本文就近年来之方面有关问题的现况进行综述。