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目的:研究真核表达质粒DNA在巨噬细胞免疫功能激活中的作用及其机制。方法:体外培养巨噬细胞,检测巨噬细胞一氧化氮(NO)分泌水平、FACS检测巨噬细胞表面分子的表达、MTT法测定巨噬细胞的细胞毒作用,以这些指标测定质粒DNA、质粒DNA/IFN-γ、质粒DNA/CH50多肽对体外巨噬细胞的直接激活作用。或腹腔注射质粒DNA,取腹腔巨噬细胞进行功能检测。结果:pCH510质粒和pcDNA3.1质粒在体内、外均可刺激巨噬细胞产生NO。激活的巨噬细胞表达分子MHC-Ⅱ、B7-1表达增加,细胞毒作用增强,在体外,质粒DNA协同IFN-γ对巨噬细胞产生更强的激活作用,而CH50多肽与质粒DNA没有协同作用,腹腔注射质粒DNA后,取出巨噬细胞再与IFN-γ共培养时,巨噬细胞的激活程度没有改变,而再与CH50作用时,巨噬细胞的激活明显增强,结论:质粒DNA在体内外能够激活巨噬细胞,但在体内,外的作用显然具有不同的机制。体外可以直接刺激巨噬细胞,且与IFN-γ有协同作用;体内则是间接激活巨噬细胞,这些巨噬细胞随后可被CH50多肽进一步激活。真核表达质粒用于肿瘤的基因治疗时,除了其表达产物的功能之外,质粒自身的免疫激活作用将进一步增强肿瘤治疗作用。 相似文献
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目的 研究转染细胞周期依赖性蛋白激酶1(cyclin-dependent kinase 1,CDK1)siRNA、以及转染后进行凋亡刺激对细胞周期和凋亡的影响,探讨CDK1在细胞凋亡中的确切作用,揭示细胞周期与细胞凋亡协调的分子机制.方法 以人宫颈癌细胞株HeLa细胞为研究对象,脂质体转染CDK1 siRNA,转染后48 h加紫杉醇(Taxol) (20 μg/ml)刺激凋亡,Western印迹检测CDK1和抗凋亡蛋白BCL2表达,AnnexinV/PI法检测细胞的凋亡,流式细胞仪分析DNA含量检测细胞周期.结果 转染CDK1 siRNA后,CDK1蛋白的表达下降,细胞周期G2/M期比例增加,细胞凋亡率与对照相比没有明显升高.只加Taxol刺激12 h后细胞凋亡率增加并伴有S期和G2/M期比例增加. 转染CDK1 siRNA后再用Taxol刺激,其细胞凋亡率没有明显改变,G2/M期阻滞效应也没有叠加.BCL2蛋白只在加Taxol刺激组表达下降,与CDK1表达减少没有相关性.结论 siRNA沉默导致的CDK1表达降低只导致细胞周期G2/M期阻滞,没有引起细胞凋亡;CDK1的表达降低对紫杉醇所诱导的细胞周期阻滞和细胞凋亡效应没有明显影响. 相似文献
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目的研究大肠癌组织的细胞周期分布状态与临床病理因素的关系,以及和细胞周期调节蛋白的表达水平是否相关。方法应用流式细胞术检测45例大肠癌临床标本细胞周期中G0/G1、S、G2/M期所占的比例,并检测每例标本的细胞周期蛋白CyclinD1、CyclinE、CyclinA、CyclinB1的表达水平。结合临床病理因素进行统计分析。结果肿瘤细胞G0/G1、S、G2/M期所占的比例和患者性别、年龄、肿瘤部位、病理分级、浸润深度、淋巴结转移、Dukes分期均无明显相关性,均P>0.05。G0/G1期的比例与CyclinD1、CyclinE,S期与CyclinE、CyclinA,G2/M期与CyclinA的表达水平均不相关,均P>0.05;但是G2/M期的比例与CyclinB1的表达水平正相关,r=0.335,P=0.035。结论大肠癌肿瘤细胞的周期分布和临床病理因素无关,肿瘤细胞周期蛋白的表达特点与体外培养的细胞系不同,表现得更加复杂多样。 相似文献
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目的:观察穿膜融合多肽TAT-24对结肠癌细胞增殖的影响。方法:观察TAT-N24对HT29细胞内蛋白表达的影响,流式细胞仪检测HT29细胞周期进程,应用BrdU掺入的方法检测TAT-N24对细胞DNA合成的影响,证实TAT-N24的抗肿瘤作用。 结果:Western blot结果显示TAT-N24能够有效进入细胞内,TAT-N24处理的细胞内Rb蛋白的表达无显著变化,但可见磷酸化Rb蛋白表达量显著降低。BrdU/PI双掺入法检测细胞DNA合成结果显示,对照组BrdU阳性细胞数占总细胞的比例为(52.2±1.88)%,而TAT-N24组BrdU阳性细胞数占总细胞的比例为(29.9 ±2.14)%,两组间比较差异有统计学意义(P<0.05)。 对照组HT29细胞中G0/G1期细胞为(55.27±2.48)%,S期和G2/M期细胞数分别为(26.97±0.94)%和(17.76±1.77)%,而TAT-N24组HT29细胞G0/G1期细胞减少到(65.10 ± 1.79)%,S期和G2/M期细胞分别为(18.49±0.68)%和(16.40±1.51)%,较对照组差异有统计学意义(P<0.05)。 结论:融合多肽TAT-24能有效抑制Rb蛋白磷酸化,阻滞结肠癌HT29细胞周期进程,抑制细胞DNA合成。 相似文献
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目的寻找一种方法能够有效去除胃黏液,把胃黏膜制备成单细胞悬液以进行胃黏膜流式细胞术等单细胞的蛋白分析研究,为即将在胃组织开展细胞组学做好准备。方法应用酶反应去除胃黏液和分离黏膜层后.再使用机械法制备成单细胞悬液,并应用细胞免疫组织化学流式细胞术和激光共聚焦显微镜技术初步检测胃黏膜细胞主要周期蛋白cyclin D、E、A、B1的表达。结果0.1%的胃蛋白酶和1.2-2.4U/L的中性蛋白酶分别能够较好地去除胃黏液,获得黏膜层,从而制备成胃黏膜单细胞悬液,从流式中首次系统地显示出其细胞主要周期蛋白的时相性表达规律:cyclin D3、B1明显表达,cyclin D2较弱,cyclin D1、A、E表达不明显,并得到激光扫描共聚焦显微镜的验证。结论利用胃蛋白酶,中性蛋白酶作用后能够去除胃黏液.较容易获得胃黏膜单细胞悬液;并提示体内的细胞周期蛋白的表达规律与体外培养的细胞系的表达规律不同。 相似文献
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Roscovitine和Mimosine在Fas介导白血病细胞凋亡中的作用及其可能机制 总被引:1,自引:0,他引:1
摘 要 目的: 探讨细胞周期蛋白依赖性激酶(cyclindependent kinases,CDKs)抑制剂roscovitine和DNA合成阻滞剂含羞草碱(mimosine)在Fas介导的白血病细胞凋亡过程中的作用及其可能的机制。 方法:以急性成淋巴细胞白血病细胞Molt4和急性T细胞白血病细胞Jurkat为靶细胞,用rhFasL、Roscovitine、Mimosine分别单独作用Molt4细胞18 h(Jurkat细胞8 h)、24 h、24 h,或rhFasL分别与后两者联合作用靶细胞,用流式细胞术检测cyclins的表达和细胞凋亡率,Western blotting法检测CDK2和CDK1的磷酸化水平。 结果: Fas介导的细胞凋亡定位于G1期,Roscovitine和Mimosine作用后均可使Fas介导的细胞凋亡率明显增加(P<0.05)。Roscovitine作用后G1期的cyclin D3和cyclin E表达升高,靶细胞被阻滞在G1期的比例明显升高,并下调CDK2 Thr160位点的磷酸化水平;Roscovitine和rhFasL共同作用后,CDK2 Thr160位苏氨酸磷酸化水平进一步减弱。Mimosine作用后 cyclin D3的表达下降和CDK2 Thr160位点磷酸化水平明显下降,靶细胞被完全阻滞在G1期。Mimosine和rhFasL共同作用后cyclin D3、E、A和B1均有所下降,CDK2 Thr160位苏氨酸和CDK1 Thr161位苏氨酸的磷酸化水平明显减弱。结论:Roscovitine和Mimosine均有协同rhFasL促进白血病细胞凋亡的作用,其机制与该两制剂阻滞细胞于G1期、抑制CKD2活性以及影响细胞周期蛋白表达有关。 相似文献
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目的 运用人重组Fas配体(rhFasL),体外诱导稳定而又典型的Fas介导的细胞周期特异性凋亡模型,为针对其细胞凋亡过程中的细胞周期机制研究、肿瘤的生物学治疗和自身免疫性疾病的防治等提供科学的研究平台。方法 以白血病细胞系(Molt-4和Jurkat细胞系)和进入细胞周期的外周血淋巴细胞为载体,用人重组Fas配体诱导细胞6~36h后,用亚G1峰法、传统的AnnexinV/PI和改良后的API法进行标记并用流式细胞术检测细胞凋亡情况。结果 改良后的API法显示人重组Fas配体诱导的细胞凋亡具有细胞周期特异性及始动位点;传统的AnnexinV/PI显示在将细胞凋亡控制在10%~20%并以早期细胞凋亡为主时诱导的模型最典型;亚G1峰法只能检测晚期细胞凋亡和进行DNA直方图分析。结论人重组Fas配体体外诱导的细胞凋亡具有细胞周期特异性并始动于G1期,联合应用传统的Annex-in-V/PI及改良后的API法能为建立稳定而又典型的体外Fas介导的细胞周期特异性凋亡模型提供技术支撑。 相似文献
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CH50多肽真核表达载体pCH510的构建、表达及体内趋化和抑瘤作用 总被引:4,自引:1,他引:3
目的:探讨血管内皮生长因子的表达与肿瘤血管生成的关系。方法:将VEGF165正、反义RNA表达载体导入人胃癌细胞,观察接种VEGF高表达和低表达胃癌细胞裸鼠移植瘤的生长情况,并对移植瘤进行组织学检查,检测其血管密度、组织增生及环死程度等变化。结果:VEGF正义转染细胞所致移植瘤的生长速度明显快于反义转染细胞所致的移植瘤;组织学检查发现,正义转染细胞移植瘤的血管密度显著高于的转染细胞所致的肿瘤。结论:血管皮生长因子通过启动血管生成而促进肿瘤的生长,阻断血管内皮生长因子的产生可以抑制肿瘤的生长。 相似文献
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小儿腹股沟斜疝是常见病、多发病之一,多为先天性,其病因、发病特点、腹股沟解剖、手术方法等,均与成人不同,随着医学技术的更新,微创手术的开展,人们对医疗效果,切口瘢痕的影响以及疗程长短都有了新的要求。自2003年以来,我院采用微小切口对小儿斜疝进行手术治疗150例,取得了满意效果,现报告如下。 相似文献