亚硝胺化合物致突变风险研究

目的 使用毒理预测软件和细菌回复突变试验评价17种亚硝胺化合物的致突变风险,探讨亚硝胺化合物取代基结构与其致突变性风险的关联。方法 使用Derek Nexus和Sarah Nexus对17种亚硝胺化合物的致突变风险进行预测,并使用鼠伤寒沙门氏菌TA97、TA98、TA100、TA102、TA1535和TA1537分别在无和有大鼠S9代谢活化条件下开展基于6孔板的细菌回复突变（Ames）试验,评价其致突变性风险。结果 Derek Nexus基于亚硝基结构,预测16种亚硝胺化合物（不包括NDPh）均具有致突变风险。Sarah Nexus预测所有17种均有致突变性风险,但NMEA、NEIPA和NDIPA的致突变风险较低。非S9代谢活化条件下,除NMPEA外,其余所有亚硝胺化合物的细菌回复突变试验结果均为阴性。NMPEA仅能诱导TA1537菌株回复突变菌落数增加。经大鼠S9代谢活化后,NDEA、NMOR、NDPA、NPIP和NPYR在TA97、TA100和TA1535 3个菌株中均得到阳性结果,NDMA、NMEA、NEIPA、NDBA、NMPA、NNK、NDELA、NDPh和NMPEA则在TA...     

纳米药物的神经系统安全性评价研究进展

纳米药物因其新颖的理化特性已成为医药研发的热点领域.然而,粒径微小、形状和表面的性质也决定其容易通过血脑屏障、神经末梢等途径进入神经系统,存在潜在的神经毒性风险.目前,国内外对纳米神经毒理学的研究并未跟上纳米技术的快速发展,对纳米药物神经毒性风险评估尚未形成特异性的指导原则和评价策略.本文详述了纳米药物或纳米颗粒的神经...     

多细胞系胞质分裂阻滞微核细胞组学试验法的建立与应用

目的: 采用不同组织来源的细胞系建立微核细胞组学,比较其遗传毒性生物标志物的敏感性,并研究雷公藤甲素(TPL)和甘草酸二铵(DG)对大鼠成纤维肺细胞(CHL)和犬肾小管上皮细胞系(MDCK)细胞微核率的影响。方法:首先建立方法,采用不同浓度丝裂霉素C(MMC)与CHL、L02、MDCK、Bhas42细胞作用6 h后给予细胞松弛素B(CytoB)继续培养约1.5个细胞倍增时间。收获细胞、制片、染色及镜检。计算每个剂量胞质分裂增殖指数(CBPI)、复制指数(RI)、坏死(Nec)及凋亡(Apop)细胞的千分率、双核细胞中微核(MN)、核芽(NBUD)和核质桥(NPB)出现的千分率。然后进行方法的验证,采用CHL细胞经不同浓度(1、10和100 μg/mL)DG预处理24 h后观察DG对上述细胞毒性和微核细胞组相关指标的影响。为进一步了解微核细胞组学对遗传毒性靶器官评估的效果,MDCK细胞经DG(10 μg/mL)预处理24 h后采用不同浓度(1和5 μg/mL)TPL染毒1 h,观察其对遗传毒性的影响。结果:MMC诱发的不同细胞系细胞毒性(CBPI、RI、Apop与Nec)均随MMC浓度升高呈升高趋势。各组细胞的MN、NBUD和NPB均出现不同程度的剂量相关性升高,但不同细胞系对MMC诱发的生物标志物峰值出现的敏感度不同。在验证实验中,与对照组相比,DG(10和100 μg/mL)对MMC(0.2 μg/mL)诱发的MN、NBUD和NPB升高有显著的抑制作用(P均<0.05)。TPL可诱发MDCK细胞NBUD和MN显著上升(P<0.05),且DG预处理可有效拮抗该效应(P<0.05)。结论:多细胞系胞质分裂阻滞微核细胞组学实验法可同时对多项遗传毒性指标进行评价。DG对CHL及MDCK细胞产生的染色体断裂有保护作用,在临床配伍中可发挥抗细胞DNA损伤的功效。     

神经退行性疾病的药物作用新靶点的研究进展

 目的　分析国内外关于神经退行性疾病的药物作用靶点的最新研究进展 ,为该类疾病的治疗提供新的思路。方法　综述近几年的国内外文献。结果　近 2年来研究神经退行性疾病有了很大的突破 ,在基因、受体、酶、离子通道等水平都有新治疗靶点的发现。结论　发现的药物新靶点 ,能够开发成为治疗神经退行性疾病的新药物     

热炎宁合剂的非临床幼年动物毒理学研究

目的:采用幼年动物对热炎宁合剂进行毒理学研究,进一步为其儿科用药提供临床前安全性数据。方法:采用10日龄SD大鼠连续36天灌胃给予热炎宁合剂,观察主要毒性靶器官及损害的可逆程度,评估大鼠产生的毒性反应及其严重程度。结果:给药后动物出现棕褐色水样便,与药物的药效作用相关;而深黄色尿液症状可能与受试物本身性状相关。离乳前高剂量组雌、雄动物体重下降,给药初期高剂量组雌、雄动物体重增长幅度减少;给药结束时高剂量组雌、雄动物血红蛋白、红细胞比容降低,雄性动物网织红细胞含量及比例升高;给药结束时高剂量组雌性动物血清中甘油三脂含量升高;给药组雌、雄性动物尿比重、尿酮体增加,尿颜色加深,雄性动物尿隐血含量增加、尿白细胞含量增加;以上指标在恢复期结束时均可恢复。此外,未观察到热炎宁合剂对其他指标的影响。给药组动物尿生化指标的变化并未观察到相应肾脏组织病理学的明显改变。结论:在本试验条件下,热炎宁合剂对幼龄动物不产生明显毒性作用的剂量为65.1 g/kg(相当于生药量)。这些结果为临床儿科剂量及毒副反应的监测提供参考依据。     

亚硝胺化合物对人源肝癌细胞HepG2的DNA损伤风险评价

目的 使用人肝癌HepG2细胞筛选亚硝胺的体外彗星试验的S9 mix配方，并对17种常见的亚硝胺化合物开展彗星试验，研究其DNA亲和力和碱基嵌入风险。方法 在非S9活化和S9活化条件下对HepG2细胞进行N-二甲基亚硝胺（NDMA）、N-二乙基亚硝胺（NDEA）、N-亚硝基二丁胺（NDBA）、N-亚硝基二异丙胺（NDIPA）、N-亚硝基-N-甲基-4-氨基丁酸（NMBA）、N-亚硝基甲乙胺（NMEA）、N-亚硝基-N-乙基异丙胺（NEIPA）、N-亚硝基二丙胺（NDPA）、N-甲基-N-亚硝基苯胺（NMPA）、亚硝基二苯胺（NDPh）、二乙醇亚硝胺（NDELA）、亚硝基吗啉（NMOR）、亚硝基-N-甲基-N-（2-苯基）乙胺（NMPEA）、亚硝基吡咯烷（NPYR）、亚硝基哌啶（NPIP）、4-甲基亚硝胺基-1-3-吡啶基-1-丁酮（NNK）、N-亚硝基降烟碱（NNN）给药处理，2种条件均设置溶媒对照（0.5% DMSO）、3个浓度梯度的给药组和阳性对照组，在非S9活化条件下以甲基磺酸甲酯（MMS）为阳性对照，S9活化条件下以环磷酰胺（CP）为阳性对照。以NDMA和NDEA为例比较3种S9 mix配方对亚硝胺化合物体外DNA亲和力和DNA损伤风险，选择效果最优者开展剩余化合物在S9条件下的彗星试验，计算各组尾DNA含量百分率（% tail DNA）的平均值和中位数。结果 在非S9代谢活化条件下17种常见亚硝胺化合物均未导致HepG2细胞核DNA明显损伤。S9 mix配方C中S9体积分数仅为3.36%，但对亚硝胺化合物的代谢活化效果最佳。在该条件下，除NDPh外，其余亚硝胺化合物均对HepG2细胞存在DNA的损伤作用。烷基类亚硝胺化合物对DNA损伤作用强弱顺序依次为NDMA>NEIPA>NDPA>NMEA>NDEA>NDBA>NDIPA，与化合物α氢的数目基本呈正相关。含苯基的亚硝胺化合物对DNA损伤作用强弱顺序依次为NMPEA>NMPA>NDPh，而环状亚硝胺化合物对DNA损伤作用强弱顺序为NMOR>NPIP≈NPYR。结论 提供最新的亚硝胺化合物体外DNA损伤风险数据，并提出适宜亚硝胺化合物的体外彗星试验S9 mix配方，为亚硝胺化合物的毒性评价提供手段。     

基因治疗药物AAV5-脂蛋白脂酶变异体在食蟹猴体内的毒性研究

目的 评估基因治疗药物AAV5-脂蛋白脂酶变异体(GC304)在食蟹猴体内的毒性。方法 30只食蟹猴,分为溶媒对照组(静脉注射溶媒)、GC304低剂量组(3×10¹³ vg·kg^-1)和高剂量组(1×10¹⁴ vg·kg^-1)。试验期间,所有动物进行临床症状和注射部位观察,每周进行摄食量和体重测定。在给药前后不同时间点进行免疫原性检测(包含抗AAV5结合抗体、中和抗体及抗LPL结合抗体)、血液学、血清生化、血凝和尿生化检查,并同时进行T淋巴细胞分型、细胞因子、心电、血压、体温和眼科检查。给药后4周和6个月解剖,动物进行大体观察、脏器称重和组织病理学检查,同时进行GC304的生物分布研究及表达产物测定,并在不同时间点对血液中目的基因DNA进行检测。结果 受试物对食蟹猴临床症状、注射部位、体重、摄食量、眼睛各项指标、体温、血压、心电图、血凝、血清生化、T淋巴细胞分型、尿液、细胞因子、脏器重量等指标未见影响。高剂量组动物给药后4周血小板下降。与给予受试物相关的组织病理学改变为脾脏和腹股沟淋巴结生发中心活跃...     

基于FMECA的LIMS风险评估在药物安全性评价流程中的应用研究

目的：探讨药物安全评价研究机构对实验室信息管理系统（LIMS）实施风险评估的方法,并基于评估结果制定措施降低风险,确保研究质量。方法：采用“故障模式、影响和危害性分析”（FMECA）方法,对LIMS实施整体的风险评估。首先确定风险评估的目的、范围、依据和评估工具,并建立风险评估组织,根据风险评估流程对LIMS实施的整体合规性风险评估过程进行梳理。结果与结论：通过对系统实施的整体合规性评估明确了风险来源,发现了会影响研究质量的风险,并制定了降低风险措施以保证系统的整体合规要求,进一步提升了药物安全评价研究的数据质量。FMECA方法可应用在用于药物安全性评价研究流程中的LIMS,对提升数据质量有很好的帮助。     

药物毒理学研究中体外替代试验研究现状及展望

药物的安全性和有效性是药物研发成功的决定因素,而药物毒性是终止药物研发的关键因素之一。相关监管指南和指导原则为利用动物进行毒理学研究及生物测试或其他相关试验制定了基本标准。动物体外替代试验不仅遵守了国际上提倡的“3R原则”,也符合毒理学学科发展、社会经济发展及新药研发的要求。动物体外替代试验已成为21世纪毒性测试的重要方向,毒性测试的重点将集中在敏感性终点的选择与评价、细胞-反应网络、高通量与中通量筛选方法的构建及应用、作用机制及作用模式、毒性通路以及系统生物学效应等方面,并且已获得药物研发领域广泛的支持和监管部门的认可,具有广阔的发展前景和重要的应用价值。     

低误差第二代测序技术应用于肿瘤研究和药物致突变性风险评价的进展

目的：探讨低误差第二代测序（next-generation sequencing,NGS）技术在肿瘤研究和药物致突变性评价领域的进展。方法：通过查阅文献、收集资料等方法,汇总近年来低误差NGS技术进展、优缺点以及在肿瘤研究和药物致突变性/致癌性评价的应用。结果：传统的NGS技术的背景误差率较高,限制其在低频率突变检测方面的应用。近年开发的多种低误差NGS技术（即校正测序错误的NGS,errorcorrectednext-generation sequencing,ecNGS）可将NGS的检测误差率降低至10-7~10-4或甚至更低,满足肿瘤临床监测和指导用药的需求。此外,HiFi-Seq和PECC-Seq等技术的最低误差率可降低至10-8,可检出药物短期暴露导致的细胞/组织的超低频突变,有助于在药物研发早期评估其致癌性风险。结论：ecNGS技术目前处于开发阶段,尚未标准化,且未在临床、毒理学、风险评估领域推广应用。然而,该方法可直接检出肿瘤早期病变组织中的突变和药物诱导的组织/细胞突变,有望取代或补充现有的致突变性试验方法,纳入相关指导原则,成为药物早期遗传毒性、致癌性筛查的金标准。