人类染色体着丝粒蛋白的研究进展

着丝粒是细胞有丝分裂和减数分裂过程中重要的结构、功能元件。有功能的着丝粒包括着丝粒DNA和蛋白两个重要成份。研究发现着丝粒蛋白对着丝粒的形成、活性极其重要，影响着染色体的稳定存在和正常分离。本综述主要围绕几种人类着丝粒蛋白的性质、分布、功能及与染色体分离关系等展开。     

骨髓间充质干细胞Hey1基因表达水平荧光定量RT-PCR方法的建立

目的:建立骨髓间充质干细胞中Notch信号通路靶基因Hey1表达水平的荧光定量RT-PCR方法.方法:培养骨髓间充质干细胞(C2C12),提取总RNA,验证内参基因β-actin和目的基因Hey1的扩增效率,优化PCR条件,分析扩增曲线、融解曲线,凝胶电泳验证定量PCR产物.结果:内参基因β-actin和目的基因Hey1扩增效率一致(扩增曲线斜率差＜0.1),提示可以使用比较Ct法对Hey1进行相对定量分析;扩增曲线、融解曲线及凝胶电泳结果提示PCR产物特异性好.结论:本研究所建立的用于Hey1基因表达分析的定量RT-PCR检测方法,准确可靠,可用于Bmp9和Notch信号通路的研究.     

肿瘤抑制基因Nm23-M1原核表达载体的构建和表达

目的:构建鼠Nm23-M1基因的原核表达载体并进行表达。方法:应用逆转录多聚酶链式反应(RT-PCR)技术扩增Nm23-M1基因,将其克隆于pQE30质粒中,测序正确后,构建重组体pQE30-Nm23-M1,在大肠杆菌中诱导NM23-M1蛋白表达。结果:SDS-PAGE凝胶电泳分离显示,在分子量大约17.5kD处有一诱导表达蛋白带,表达蛋白量占菌体蛋白量的15%,通过Westernblot证实,表达产物与抗人Nm23-H1单克隆抗体有特异性免疫反应。经Ni-NTA柱纯化,获得电泳均一性为92%的重组蛋白。结论:成功构建Nm23-M1表达载体,并获得了重组NM23-M1蛋白。     

自然流产夫妇染色体着丝粒点的研究

对２０对自然流产夫妇（流产组）和１０对已生育正常胎儿并无自然流产史的夫妇（对照组）的外周血染色体着丝粒点（Ｃｄ）进行分析。结果：Ｃｄ消失频率，流产组和对照组分别平均为０．３６±０．１５／细胞和０．２２±０．１３／细胞，两组比较，差异有极显著意义（Ｐ＜０．０１）。小Ｃｄ频率，流产组和对照组分别平均为０．３４±０．１４／细胞和０．３９±０．２８／细胞，两组比较，差异无显著意义（Ｐ＞０．０５）。着丝粒点－核仁组织者区（Ｃｄ－ＮＯＲ）融合频率，流产组和对照组分别平均为０．３１±０．２０／细胞和０．２０±０．１９／细胞，两组比较，差异有显著意义（Ｐ＜０．０５）。提示：自然流产夫妇Ｃｄ消失和Ｃｄ－ＮＯＲ融合频率增高，可能是造成自然流产的原因之一，对自然流产夫妇的Ｃｄ频率进行检测，有一定的临床意义。     

小鼠胚泡黏附时子宫内膜Galectin-1的变化

目的：探讨小鼠胚胎黏附时子宫内膜Galectin-1的变化。方法：双向聚丙烯酰胺凝胶电泳(2D-PAGE)分析妊娠d5小鼠胚泡黏附时着床点、着床旁子宫内膜总蛋白，以同龄未交配鼠子宫内膜为对照，差异蛋白质组学显示pⅠ约5．1、分子量约15ku的蛋白点在着床点、着床旁子宫内膜表达上调，且在着床点更明显。对此蛋白点用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱测定其胶内酶解后的肽质量指纹谱(peptidemassfingerprint，PMF)。结果：Mascot：PMF在SWISS．PROT数据库查询为鼠源性Galectin．1。RT．PCR．~果显示d5孕小鼠子宫内膜Galectin．1mRNA水平也明显增加。结论：Galectil9．1可能参与胚泡着床这一重要生命活动过程。     

4种血清肿瘤标志物及粪便隐血的联合检测在Dukes B期结肠癌诊断中的应用

目的 探讨血清癌胚抗原(CEA)、糖链抗原199(CA199)、糖链抗原125(CA125)、甲胎蛋白(AFP)和粪便隐血联合检测在Dukes B期结肠癌中的诊断价值.方法 检测2013年3月至2015年8月56例结肠癌患者(结肠癌组)、35例结肠息肉良性疾病患者(息肉组)、41例体检健康者(健康对照组)的上述指标及其对应的阳性检出率.分析5项指标单个检测和联合检测的灵敏度、特异度.结果 结肠癌组的血清CEA、CA125、CA199及粪便隐血水平均明显高于息肉组和健康对照组(P＜0.05).与息肉组相比,AFP水平及其血清阳性率比较,差异无统计学意义(P＞0.05).血清CEA、CA125、CA199及粪便隐血入选Logistic回归方程,对应的曲线下面积分别为0.745、0.886、0.792、0.864,阳性检出率分别为48.2％、35.7％、39.3％和78.6％;联合检测可使灵敏度、特异度、曲线下面积分别提高到87.5％、92.1％、0.957,显著优于单项检测.结论 CEA、CA199、CA125、隐血联合检测能为早期诊断结肠癌提供有力的依据.     

原代绒毛滋养层细胞的培养及转染研究

目的 探索绒毛组织滋养层细胞原代培养、纯化的有效方法及最佳转染方法.方法 分离妊娠7周内的人工流产胚胎的绒毛组织进行滋养层细胞的培养和纯化.用细胞免疫化学方法对培养细胞进行鉴定;用MTT实验方法绘制滋养层细胞的生长曲线;用细胞贴壁率找到最适pH;用细胞存活分数评价转染的最佳脂质体用量.结果 成功寻找到滋养层细胞原代培养和纯化的有效方法;细胞消化传代后的12～48 h滋养层细胞处于对数生长期,pH 6.8～7.0为培养液最适pH范围;并找到质粒转染滋养层细胞的最佳脂质体用量.结论 成功培养和纯化滋养层细胞,并找到滋养层细胞的最佳转染方法.     

国家重点学科内涵建设与研究生教育创新

概括了重庆医科大学为加强临床检验诊断学国家重点学科内涵建设,搭建该专业研究生教育创新平台,在师资队伍建设、凝炼学科研究方向、提升科学研究水平和实验室建设等方面的探索和改革实践。     

21三体患者及其双亲染色体着丝粒点研究

２１三体患者及其双亲染色体着丝粒点研究王应雄，翁亚光，吴春英，何俊琳，郑增淳染色体着丝粒点（ｋｉｎｅｔｏｃｈｏｒｅ或ｃｅｎｔｒｏｍｅｒｉｃｄｏｔｓ，Ｃｄ）位于染色体着丝粒区、并能被特殊方法染色的一对球形结构，由蛋白质和少量ＤＮＡ组成，它是细胞分裂中纺...