人细胞色素P450 1A1与谷胱甘肽S-转移酶的融合蛋白及其抗体的制备

采用融合蛋白技术原核表达CYP1A1（第241-381个氨基酸）与谷胱甘肽S-转移酶（GST）的融合蛋白作为抗原,用于制备CYP1A1多克隆抗体. 根据正反重组质粒pGEX/1A1表达的融合蛋白大小不同的原理,直接表达筛选得到正向重组质粒pGEX/1A1. 通过优化表达条件, 提高了目的蛋白的表达水平. 包涵体蛋白经制备型聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）分离, 获含纯化融合蛋白GST-1A1的PAGE凝胶. 直接用含GST-1A1的凝胶悬液免疫BALB/c小鼠,自腹水中获取CYP1A1多克隆抗体（1A1pAb）. 1A1pAb用切胶纯化的融合蛋白GST-2B6交叉吸收,蛋白A- Sepharose亲和层析柱来纯化. 用切胶纯化的融合蛋白GST-1A1及GST-2B6的免疫印迹反应初步鉴定1A1pAb的特异性. 纯化的1A1pAb对融合蛋白GST-1A1反应特异性较强,但仍对GST-2B6有弱交叉反应. 在实际应用中可根据反应强度来加以区分.     

机用与手用镍钛器械预备根管效果比较

根管充填术是目前临床上治疗牙髓病和根尖周炎的最有效的方法之一。我科自2002年开始使用美国登士柏公司生产的ProFile根管扩锉系统，现将机用镍钛锉与手用镍钛锉预备根管的临床效果比较报道如下。     

NMDA受体在发育过程中的表达及其生理意义

在脊椎动物的中枢神经系统中，谷氨酸是一种重要的兴奋性神经递质，它在脑中的众多功能是由不同的受体所介导的。谷氨酸受体可分为离子型（ｉｏｎｏｔｒｏｐｉｃ）和代谢型（ｍｅｔａｂｏｔｒｏｐｉｃ）两大类。离子型谷氨酸受体即为配体门控性离子通道（ｌｉｇａｎｄ－ｇ...     

人大肠癌细胞系HR 8348和HCe 8693 K－ras基因的点突变分析

本文采用修饰引物的聚合酶链式反应（ＰＣＲ）所建立的限制性片段长度多态性（ＲＦＬＰ），并结合ＰＣＲ直接测序方法，首次分析了我国建株大肠癌细胞系ＨＲ８３４８和ＨＣｅ８６９３的Ｋ－ｒａｓ基因点突变。发现该两细胞系均存在ｋ－ｒａｓ第１２密码子的点突变，其方式均为ＧＧＴ→ＧＡＴ；但未发现Ｋ－ｒａｓ第１３和６１密码子的突变。     

尼克酰胺对帕金森病模型小鼠的保护作用

目的:观察尼克酰胺对1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP)诱发的小鼠帕金森病(PD)模型中多巴胺能神经元的保护作用,并初步探讨其可能的作用机制.方法:在MPTP(每天30mg/kg×5 d,i.p.)注射前1h腹腔注射尼克酰胺(500 mg/kg),最后1次注射后5天观察小鼠运动能力的改变,检测纹状体多巴胺含量,并分析小鼠全脑及纹状体中乳酸脱氢酶(LDH)及一氧化氮合酶(NOS)的活性变化.结果:1)尼克酰胺能显著改善MPTP小鼠的自主运动能力(P＜0.01),但对游泳、爬杆和悬挂等行为没有显著影响;2)尼克酰胺能显著减轻MPTP诱发的纹状体多巴胺含量的降低(P＜0.01);3)全脑的LDH和NOS活性在各组之间没有显著差别,但纹状体的LDH和NOS活性在MPTP处理的小鼠中显著升高(P＜0.01),尼克酰胺能显著降低MPTP引起的LDH和NOS活性升高(P＜0.01),并且与对照组相比没有显著区别(P＞0.05).结论:尼克酰胺可以有效减轻MPTP诱发的帕金森病小鼠模型中多巴胺能神经元的损伤,这种保护作用可能与降低神经元的坏死和抑制NOS活性有关.     

C末端缺失NR2B亚单位表达载体的构建及其在NMDA受体装配研究中的应用

目的：研究NMDA受体NR2B亚单位细胞内C末端，在NR1—1a／NR2B亚型NMDA受体装配和表面表达中的作用。方法：构建C末端不同缺失和GFP标记的NR2B亚单位表达载体，单独转染或与NR1亚单位共转染到HEK293细胞，用抗GFP多克隆抗体和Cy3荧光素交联的二抗作活细胞表面受体染色。结果：成功构建了8个C末端不同缺失的GFP—NR2B表达质粒(GFP—NR2B△1～△8)。将GFP—NR1—1a，GFP—NR2B及GFP—NR2B△1～△8分别单独转染HEK293细胞，不能获得迭细胞膜表面的表达。而将这些质粒分别与NR1—1a共转染293细胞，发现GFP—NR2B及C末端部分缺失的GFP—NR2B△1～△6，均能与NR1—1a一起表达于细胞膜表面，而仅留有PDZ结合基序的GFP—NR2B△7和C末端全长缺失的GFP—NR2B△8，则不能与NR1—1a一起表达于细胞膜表面。结论：NR1—1a与NR2B的共表达和装配，是形成NR1—1a／NR2B亚型NMDA受体并表达于细胞表面的必要条件。NR2B与NR1—1a装配时，NR2B对NR1—1a C1盒中内质网滞留基序的遮蔽和阻滞作用，并不依赖于NR2BC末端某一特定的区域，相反可能仅要求有一定长度的NR2BC末端。     

综合性大学医学教育与医学教育国际标准接轨的研究

将我国综合性大学医学教育的现状与“全球医学教育最低基本要求(GMER)”的具体内容进行对照研究，分析其中存在的差距，并提出加快与国际医学教育标准接轨的建设性意见。     

惊厥和亚惊厥剂量戊四唑对大鼠脑内NMDA受体亚单位蛋白表达的影响

目的:研究不同剂量戊四唑刺激对大脑皮层内N-甲基-D-天门冬氨酸(NMDA)受体NR1、NR2A和NR2B 3种亚单位表达量的影响.方法:腹腔注射亚惊厥剂量(35 mg/kg)和惊厥剂量(50 mg/kg)的戊四唑,注射后不同时间点分离大脑皮层,用免疫印迹法检测NMDA受体NR1、NR2A、NR2B 3种亚单位的蛋白含量.结果:注射戊四唑亚惊厥剂量和惊厥剂量组大鼠的行为学差异非常显著(P＜0.001),但NMDA受体3种亚单位仅NR2A亚单位在1 h点有显著性增高,且惊厥剂量组NR2A的表达量比亚惊厥剂量组高(P＜0.05).惊厥剂量组NR2A和NR2B表达有先增加再降低然后恢复至正常水平的趋势,而NR1亚单位改变不明显.结论:戊四唑引起惊厥的机制可能与戊四唑首先影响NR2亚单位蛋白的表达,以调节NMDA受体的功能有关.     

小鼠持续性脑缺血后NMDA受体亚单位表达的变化

目的：研究小鼠持续性脑缺血后不同脑区NMDA受体亚单位表达的变化及其与病理损伤之间的联系。方法：采用大脑中动脉阻断法制作小鼠持续性脑缺血模型，取缺血后不同时间的皮层、海马、皮层下脑组织，用免疫印迹技术测定NMDA受体亚单位ζ1和ε1及ε2蛋白的含量。同时作冰冻切片和苏木素伊红染色，计算相应脑区神经元密度。结果：NMDA受体ζ1和ε1及ε2亚单位表达的改变发生于缺血后5h内，皮层下3个亚单位表达均明显增加，海马则各亚单位表达变化不一。脑梗塞灶和相关脑区神经元密度显著减小均出现于缺血后5h，相关脑区神经元死亡严重程度依次为皮层下组织和海马CA1区及大脑颞叶皮层Ⅲ－Ⅳ层。结论：小鼠持续性脑缺血，缺血侧脑组织NMDA受体亚单位ζ1和ε1及ε2表达的变化发生在明显的病理损害之前，表达变化程度因脑区不同，与相关脑区神经元损害的程度相应。     

根治性顺行模块化胰脾切除术在胰体尾部癌中的应用(多中心研究)

目的 探讨根治性顺行模块化胰脾切除术（RAMPS）在胰体尾部癌中应用的安全性和疗效。方法 回顾性分析2010年1月至2019年12月湖南省肿瘤医院、湖南省人民医院、中南大学湘雅二医院、湘潭市中心医院和南华大学附属第二医院收治的122例胰体尾部癌RAMPS术临床资料,总结分析RAMPS手术安全性和疗效。结果 122例患者均接受RAMPS术治疗,术后并发症发生率为28.69%(35/122),其中包括胰瘘19例（15.57%,B级14例,C级5例）,单纯腹腔感染5例（4.10%）,肺部感染3例（2.46%）,胃排空延迟3例（2.46%）,肠瘘2例（1.64%）,术后出血3例（2.46%,腹腔术野出血2例,消化道出血1例）。术后26d出现严重并发症死亡2例（1.64%）。余120例患者中,1、3和5年术后复发率分别为25.00%、59.17%和85.00%,局部复发转移率、肝转移率和肺转移率分别为33.33%(40/120)、21.67%(26/120)和18.33%(22/120)。所有122例患者的1、3、5年总体生存率分别为63.51%、42.25%和22.55%。单因素Cox回归分析...