抗人端粒重复序列结合因子(TRF133-277)单克隆抗体的制备及生物学特性初步鉴定

目的 制备抗人端粒重复序列结合因子片段（TRF1^33-277）单克隆抗体（单抗），探讨其生物学特性。方法 以GST－TRF1^33-277融合蛋白为抗原，经细胞融合及ELISA方法筛选获得阳性杂交瘤细胞，对其进行染色体核型分析，将此单抗作为探针用于Western blot和免疫组化检测标本。结果 获得1个抗TRF1蛋白的杂交瘤细胞株。以抗TRF1^33-277单抗作Western blot检测正常人及急性白血病患者骨髓，大肠癌组织及近旁正常粘膜组织提取蛋白。在相对分子质量60000处有一特异性条带，与阳性对照纯化TRF1蛋白相一致，免疫组化显示该抗体在上皮细胞及骨髓造血细胞胞浆中阳性着色。结论 制备了具有高度特异性的抗TRF1^33-277单抗，建立了Western blot和免疫组化检测组织表达TRF1蛋白的方法。     

亲缘异基因造血干细胞移植与自体造血干细胞移植治疗弥漫性大B细胞淋巴瘤大宗病例分析

选择自体造血干细胞移植还是异基凶造血干细胞移植治疗弥漫性大B细胞淋巴瘤（diffuse large B cell lymphoma,DLBCL）患者需权衡治疗相关死亡率（treatment—related mortality,TRM）差异、自体移植物被肿瘤污染的可能、干细胞动员失败和异基因移植物抗淋巴瘤效应等因素之间的利弊。     

含左旋门冬酰胺酶的联合化疗方案治疗外周T细胞淋巴瘤的临床观察

目的 观察含左旋门冬酰胺酶(L-ASP)的联合化疗方案治疗初发外周T细胞淋巴瘤的疗效和不良反应.方法 回顾性分析浙江大学医学院附属第一医院2012年1月至2013年12月接受含L-ASP与不含L-ASP的联合化疗方案治疗的初发外周T细胞淋巴瘤102例,前者(含L-ASP组)42例,后者(不含L-ASP组)60例,比较两组的近期疗效如完全缓解(CR)率、部分缓解(PR)率和总有效(OR)率,以及远期疗效如总生存(OS)率、无进展生存(PFS)率及不良反应.结果 含L-ASP组的OR率明显高于不含L-ASP组[83.3％(35/42)比61.7％ (37/60),P=0.016],其中在分期为Ⅲ/Ⅳ期[82.4％(28/34)比54.0％(27/50),P=0.007]和国际预后指数(IPI)评分≥2分[82.1％(23/28)比50.0％ (21/42),P=0.006]的患者中尤其明显.含L-ASP组的3年OS率为48.9％,不含L-ASP组为65.0％,差异无统计学意义(P=0.974);含L-ASP组的3年PFS率为40.8％,不含L-ASP组为61.0％,差异也无统计学意义(P=0.479).含L-ASP组虽然不良反应较不含L-ASP组多,但多为轻度,经对症支持治疗后均可好转,Ⅲ～Ⅳ度中性粒细胞减少引起的严重发热两组无明显差异(P=0.777),含L-ASP组其他严重不良反应如脑出血、急性胰腺炎均只发生1例.结论 含L-ASP的联合化疗方案治疗初发外周T细胞淋巴瘤显示了较好的近期疗效,且不良反应可控.L-ASP用于一线治疗外周T细胞淋巴瘤的大型前瞻性临床试验值得开展和深入研究.     

谷氨酰胺双肽在异基因造血干细胞移植中的应用

目的:探讨谷氨酰胺双肽(DPT)对异基因造血干细胞移植患者并发症及恢复的影响。方法:40例异基因造血干细胞移植患者随机分为应用DPT加全肠外营养液组(DPT组,20例)和单用全肠外营养液组(对照组,20例),检测应用DPT前1天、第7天及第28天的血清白蛋白、总蛋白、肌酐、总胆红素、白细胞及淋巴细胞计数,并分析两组患者中性粒细胞恢复时间、体重下降程度、出层流室时间以及关于感染、急性移植物抗宿主病(aGVHD)等情况。结果:两组血清白蛋白于第7天均明显下降,第28天DPT组能恢复至原水平,而对照组无恢复,两组差异有统计学意义;两组总胆红素均无异常波动。DPT组淋巴细胞恢复较对照组迅速,两组差异有统计学意义。移植后DPT组和对照组发生临床感染例数分别为10例和16例,细菌培养阳性结果分别为11例次和17例次,总抗生素应用天数分别为(16.5±10.6)d和(25.4±16.3)d,差异均有统计学意义;两组肠炎持续时间分别是(4.7±4.5)d和(8.2±6.0)d,体重下降分别是(2.0±2.0)kg和(3.3±1.6)kg,出层流室时间分别是(49.2±18.8)d和(58.0±20.2)d,差异有统计学意义;而两组aGVHD发生率差异无统计学意义。结论:添加DPT的全肠外营养可改善异基因造血干细胞移植患者的营养状态,减少感染及肠、肝损害,不增加aGVHD的发生,有利于异基因移植     

人骨髓间质干细胞中的端粒调控机制

目的：〖HT5"SS〗研究人骨髓来源间充质干细胞(MSCs)端粒长度的调控机制。方法：以贴壁培养法从人骨髓中分离MSCs并用MSCs及造血干细胞相关表面抗体作表型鉴定,用Southern blotting检测MSCs的端粒长度;应用免疫荧光染色技术检测端粒重复序列结合因子1（TRF1）和早幼粒细胞白血病蛋白小体（PML）的定位;以端粒重复序列扩增法（TRAP）和/或Western blotting法检测传代及分化成脂肪细胞的MSCs和经同步化处理被阻断在S期的MSCs的端粒酶表达。结果：与端粒酶阴性ALT细胞株WI-38-2RA细胞相比,MSCs的端粒长度较短并且端粒长度变异度不大;端粒调控相关蛋白TRF1和PML在MSCs中的定位则与端粒酶阳性细胞HeLa细胞相同,两者呈非共定位,而在端粒酶阴性WI-38-2RA细胞中两者呈共定位状态。MSCs中不存在有染色体外端粒重复序列DNA（ECTR DNA）。TRAP法检测传代培养的MSCs端粒酶呈阴性表达,但分化成脂肪的MSCs端粒酶呈阳性表达。Western blotting 检测同步化处理前MSCs端粒酶呈微弱表达,经同步化处理被阻断在S期时,MSCs的端粒酶表达明显增高,并且与S期的细胞比例呈正相关。结论：MSCs中不存在ALT相关的早幼粒细胞白血病蛋白小体(APBs)、染色体外端粒重复序列DNA(ECTR DNA)和端粒长度较长、端粒长度变异度大等ALT机制相关分子特征;非同步化在S期处理的MSCs,端粒酶呈微弱表达,但诱导向脂肪细胞分化或处在S期时,MSCs的端粒酶表达明显增高,并且与S期的细胞比例呈正相关。本研究提示MSCs是通过端粒酶机制而不是端粒延长旁路途径（ALT）机制调控其端粒末端。     

抗人端粒重复序列结合因子多克隆抗体制备及纯化

目的 制备并纯化抗人端粒重复序列结合因子片段（TRF1^33-277)的多克隆抗体。方法 运用基因工程的方法表达人工TRF1^33-277，将表达蛋白经亲和层析大量纯化后免疫白哆，制备血清过柱纯化，将TRF1^33-277和GST交连于CNBr-活化的Sephrose4B柱，血清过GST柱以去除抗GST抗体，然后经GST-TRF1柱吸收抗TRF1抗体，获得兔抗人TRF1多克隆抗体。结果 用此抗体作为一抗。在人膀胱癌细胞总蛋白中检到68KD的特异条带，与阳对照基本一致。结论 兔抗人TRF1多克隆抗体制备方法有效。所获抗TRF1^33-277多克隆抗体为国内首次报道。     

免化疗药物方案联合异基因造血干细胞移植治疗不典型慢性粒细胞白血病1例并文献复习

目的探讨不典型慢性粒细胞白血病(aCML)的诊断、治疗及疗效。方法回顾性分析浙江大学医学院附属第一医院2021年11月收治的1例aCML青年患者的诊断及治疗经过, 并进行文献复习。结果患者为19岁女性, 诊断为aCML, 应用小剂量地西他滨治疗1个疗程, 评估疗效为血小板计数未完全恢复的完全缓解(CRi);第2个疗程给予小剂量地西他滨联合维奈克拉治疗, 评估疗效为完全缓解(CR);第3个疗程继续原方案巩固1个月。后行异基因造血干细胞移植(allo-HSCT), 移植后随访3个月时骨髓及微小残留病检测均显示疾病处于持续缓解状态, 外周血象正常。结论 aCML的诊断需与CML、慢性中性粒细胞白血病、急性髓系白血病进行鉴别。aCML目前尚无标准治疗方案, 应用地西他滨联合维奈克拉治疗缓解后行allo-HSCT的效果良好。     

霉酚酸酯联合CsA和短程MTX预防非亲缘异基因骨髓移植的急性GVHD

目的　评价霉酚酸酯（MMF）联合环孢菌素A（CsA）和短程甲氨蝶呤(MTX)预防非亲缘异基因骨髓移植中急性移植物抗宿主病（aGVHD）的有效性和安全性。方法　12例患者非亲缘异基因骨髓移植当天始联合应用MMF（骁悉胶囊）1.0 g/d,CsA 3 mg     

继发急性髓系白血病异基因造血干细胞移植疗效及预后影响因素分析

目的探讨成人继发急性髓系白血病(AML)接受异基因造血干细胞移植(allo-HSCT)的疗效及预后影响因素。方法多中心回顾性临床研究。纳入2014年1月至2022年11月因继发AML在浙江省造血干细胞移植协作组4个中心接受allo-HSCT的18岁以上的成人患者, 并进行疗效及预后影响因素分析。结果共纳入95例患者, 其中66例(69.5%)为骨髓增生异常综合征(MDS)转化AML(MDS-AML), 4例(4.2%)为MDS/骨髓增殖性肿瘤(MPN)转化AML(MDS/MPN-AML), 25例(26.3%)为治疗相关AML(tAML)。所有患者的3年累积复发率(CIR)、无白血病生存(LFS)率和总生存(OS)率分别为18.6%(95%CI 10.2%～27.0%)、70.6%(95%CI 60.8%～80.4%)和73.3%(95%CI 63.9%～82.7%)。M-AML(包括MDS-AML、MDS/MPN-AML)组和tAML组的3年CIR分别为20.0%和16.4%(P=0.430);3年LFS率分别为68.3%和75.4%(P=0.176);3年OS率分别为69.7%和7...     

格列卫联合清髓性异基因造血干细胞移植治疗慢性髓性白血病

目的:探讨格列卫联合清髓性异基因造血干细胞移植在治疗慢性髓性白血病(CML)中的作用。方法:9例CML患者(5例CP,2例为AP,2例为BP),男性,在清髓性异基因造血干细胞移植前、后口服格列卫(300~600 mg/d)治疗,移植预处理方案为BuCy2:Bu 16 mg/kg,口服(6例)或12.8 mg/kg,静脉滴注(3例)加CTX 120 mg/kg。供受者HLA配型完全相合,其中亲缘移植7例,无关供者移植2例。以霉酚酸酯联合环孢菌素A和短程MTX预防aGVHD。移植物有核细胞数5.3(3.7~8.7)×108/kg,CD34 细胞数4.8(2.8~8.5)×106/kg,粒-巨噬细胞集落形成的单位数2.8(1.9~5.3)×105/kg。结果:9例CML患者在移植前,经格列卫治疗后获完全血液学缓解(HCR)。移植后中性粒细胞>0.5×109/L中位时间12(8~26)天,血小板计数>20×109/L中位时间为20(8~25)天。移植后并发/度aGVHD3例,cGVHD4例,无早期死亡。移植后30天9例患者均获完全细胞遗传学缓解(CCR),STR检测供髓完全植入。中位随访31(7~34)月,1例治疗前CML急变患者移植后4月因复发死亡,其余病患均获完全分子学缓解(CMR),总体无病生存率88.9%。结论:清髓性异基因造血干细胞移植前、后联合格列卫治疗CML,是一种安全有效的治疗方法,值得临床进一步推广。