一个可能的与人端粒结合因子相互作用蛋白Tara的分离和克隆

目的:分离和鉴定端粒结合因子(TRF1)免疫共沉淀蛋白复合物并克隆其基因.方法:以TRF1抗体应用免疫共沉淀方法,从细胞蛋白抽提物中分离TRF1蛋白复合物,并作蛋白质肽指纹谱鉴定;应用温度梯度PCR,从人cDNA文库中扩增目的基因,并构建pEGFP-C2真核表达载体;核苷酸测序和Western blot验证目的基因序列和表达载体.结果:从TRF1免疫沉淀复合物中分离出了Tara蛋白;人cDNA文库中PCR扩增所得产物为1.7 kb,与Tara基因CDS序列同源性为99.9%;GFP/Tara融合蛋白约100 kD,Tara在间期HeLa细胞中弥散表达于胞浆,而有丝分裂细胞则定位于整个细胞.结论:Tara是一个可能的TRF1相互作用蛋白,其作用机制需进一步实验研究.     

杂合性急性白血病临床分析

杂合性急性白血病发病率低,预后凶险,是临床诊治难点.现将作者在浙医一院血液科进修期间,对2001年1月～2004年12月的528例住院的初发白血病患者进行临床、细胞形态学、免疫表型及核型观察,发现11例杂合性急性白血病(2.1%),报道如下.     

伊曲康唑注射液治疗血液系统恶性肿瘤伴发真菌感染51例临床分析

目的观察伊曲康唑注射液治疗血液系统恶性肿瘤患者伴发真菌感染的临床疗效及安全性。方法选择浙江大学医学院附属第一医院血液科2004年2月至2005年4月住院恶性血液病患者51例。男35例、女16例,中位年龄42岁。确诊或拟诊真菌感染或经验性治疗使用伊曲康唑,剂量为:每次200mg,每12h1次;用2d后,每次200mg,每天1次,完成疗程7d以上评价疗效。完成者共49例,疗程为7～32d,中位数14d。结果伊曲康唑注射液临床总有效率59.2%,真菌清除率为71.4%。副反应中没有发现用药时寒战、发热等,以及胃肠道反应。肝功能异常发生率7.8%,肾功能损害发生率2%。结论伊曲康唑注射液抗菌谱较广,其注射液在治疗深部真菌感染中为高效药物,且药物安全性良好,但在使用时尚需监测肝功能。     

异基因冻存外周血干细胞加骨髓移植治疗白血病

目的 探讨异基因外周血干细胞加骨髓移植的临床疗效与急性移植物抗宿主病(aGVHD)发生情况.方法 对AMLL患者以其妹冻存外周血干细胞和骨髓联合移植,并观察疗效和并发症发生情况.结果 患者造血恢复良好,患者移植后为(+)19天中性粒细胞数＞0.5×109/L,+30天Plt数＞50×109/L.无aGVHD情况.结论 冻存外周血干细胞加骨髓移植是白血病有效的治疗方法,值得进一步探索.     

应用粒细胞集落刺激因子后误诊为急性白血病7例分析

粒细胞集落刺激因子(Ｇ-ＣＳＦ)具有刺激粒系集落形成单位(ＣＦＵ-Ｇ)向中性粒细胞分化成熟,增加其数量,并向外周血释放的功能,可加快粒细胞恢复,缩短骨髓抑制时间［１］。近年来,Ｇ-ＣＳＦ广泛用于各种原因引起的骨髓增生低下,取得了较满意的疗效。但在临床应用过程中,可引起类白血病反应的现象,以致误诊为急性白血病。现报道７例如下。１．一般资料:男性２例,女性５例;年龄２０～６８岁;导致增生低下的原因为:恶性淋巴瘤化疗后１例;骨髓增生异常综合征—难治性贫血伴原始细胞增多转化型(ＭＤＳ-ＲＡＥＢＴ)化疗后２例;恶性淋巴瘤１例;骨髓…     

成人骨髓间充质干细胞体外培养扩增及其生物学特性研究

目的 建立成人骨髓间充质干细胞 (MSCs)体外培养和扩增的条件 ,探讨其生物学特性。方法 取正常成人骨髓用含10%胎牛血清的LG -DMEM培养液培养、扩增后 ,进行透射电镜观察 ,流式细胞仪行细胞表面抗原及细胞周期分析检测。结果 培养扩增获取的成人骨髓MSCs形态均一 ,增殖能力强 ,细胞扩增至第5代细胞数达 (2～3)×108。该类细胞CD29、CD44、CD166表达阳性 ,CD14、CD34、CD45、HLA -DR表达阴性。细胞周期以G0/G1 期为主。细胞胞浆具丰富粗面内质网。结论 所建立的分离和培养方法可获取骨髓粘附细胞中一组独特的细胞群 ,具有MSCs的生物学特性。     

低温冻存对成人骨髓间质干细胞生物学特性的影响

目的：研究低温冻存对骨髓间质干细胞（MSCs）其生物学特性的影响，探讨MSCs理想的保存方法。 方法： 体外分离培养、扩增正常成人骨髓MSCs,在5％DMSO-30%FBS-DMEM冻存保护剂条件下，分别采用二步法和程控降温冻存方法低温保存3月，以台盼蓝拒染回收率(TBR)、MSCs生长曲线、MSCs表面抗原表达以及其多向分化能力检测，比较两种不同的冻存方法对MSCs生物学特性的影响。 结果： 程控降温冻存后MSCs活力优于二步法［TBR（87.67±2.52）％ vs （79.00±3.61）％，P<0.05］。多因素方差分析显示MSCs代数和冻存方法均是影响冻存后MSCs增殖的重要因素。两种冻存方法中P8代细胞的增殖能力明显劣于P1代细胞（P<0.01）或P4代细胞（P<0.01）。MSCs程控冻存后增殖能力与冻存前无差异（P<0.05），优于二步法冻存后的增殖能力（P<0.05）。 程控冻存后MSCs稳定表达CD29、CD44、CD166（与冻存前比较，P>0.05）。而二步法冻存后细胞CD29表达下降（与冻存前比较，P<0.05）。两种冻存方法对MSCs向成骨细胞、脂肪细胞和神经元细胞分化没有显著影响，与冻存前比较，P>0.05。 结论： 采用5％DMSO-30%FBS-DMEM冻存保护液和程控降温的冻存体系，可较完整保持MSCs生物学特性，是深低温保存MSCs的理想方案。     

骨髓增生异常综合征的造血干细胞移植治疗

骨髓增生异常综合征（MDS）是一类异质性极强的疾病,需要危险分层指导下的个体化治疗,异基因造血干细胞移植（HSCT）是目前可能治愈该疾病的唯一方法。移植相关并发症指数（HCT-CI）＜3、体能状态好,危险分层评估为较高危组,细胞遗传学高危和/或输血依赖较低危组MDS患者具有HSCT的适应证。HSCT的时机、HSCT前的桥接治疗、HSCT的方式、HSCT后复发防治等都是MDS患者HSCT治疗的研究热点,未来需推动建立分子生物学指导下的MDS个体化治疗策略。     

非亲缘异基因骨髓移植术后重症肠道急性移植物抗宿主病的临床分析

目的分析非亲缘异基因骨髓移植术后并发重度肠炎临床和病理特征及治疗情况：方法3例慢性粒细胞白血病慢性期及1例骨髓增生异常综合症患者接受非亲缘异基因骨髓移植术．预处理方案为马利兰／环磷酰胺,以霉酚酸酯(MMF)和环孢霉素(CsA)加短程氨甲蝶呤(MTX)预防急性移植物抗宿主病(aGVHD)。结果4例患者分别于移植后的后22、56、55、47d并发重度肠炎．肠镜和病理活检示肠黏膜充血水肿或上皮层坏死脱落,肠腔正常结构消失,直、结肠多发性溃疡,见较多淋巴细胞和浆细胞浸润,未见巨细胞病毒(CMV)包涵体和巨细胞,诊断为肠道aGVHD。予以糖皮质激素为主的治疗,其中1例予FK506、抗CD3单克隆抗体治疗。3例出现血CMV抗原血症．给予更昔洛韦／磷甲酸钠治疗。1例治疗无效死亡,3例得到有效控制。结论非亲缘异基因骨髓移植后并发aGVHD所致肠炎,诊断有赖于肠镜和病理活检并为正确治疗提供依据。     

超高效液相色清法测定麻黄宣肺止咳糖浆中7种有效成分含量

目的建立简单、快速、灵敏的UPLC-MS/MS法测定麻黄宣肺止咳糖浆中多种有效成分的含量,为全面、准确评价麻黄宣肺止咳糖浆质量提供依据。方法应用正负离子切换多反应监测(MRM)模式进行定量分析,采用色谱条件为流速0.4 mL·min~(-1);柱温40℃;WATERS ACQUITY UPLC HSS T3色谱柱;甲酸(0.1)%甲醇(A)-甲酸(0.1%)水(B)为流动相,梯度洗脱。结果 7种有效成分分离良好,均能在6.5 min内出峰。麻黄碱、绿原酸、哈巴俄苷、牛蒡子苷、连翘苷、苦杏仁苷、连翘酯苷A分别在0.30～54、 0.66～83.75、 1.69～54、 1.19～105.1、 3.2～409.44、 0.36～45.8、 1.4～169.5 ng/ml范围内线性关系良好(r0.998),得到RSD均小于5%(n=6),平均回收率为98.57%～101.0%。结论使用该法用于麻黄宣肺止咳糖浆7个有效成分的同时含量测定,所得结果重复性好、专属性强、灵敏度高,可为该复方制剂进行质量控制,并为其质量标准奠定基础。