计算机模建和点突变分析抗人CD40单克隆抗体5C11识别的抗原表位

目的:通过计算机模拟与点突变实验初步探讨本课题组前期研制的抗人CD40激发型单克隆抗体5C11识别的抗原表位。方法:利用InsightⅡ软件分别模拟抗原、抗体结构,构建抗原抗体复合物模型,通过计算推测5C11单抗所识别的抗原表位。构建人野生型CD40(wtCD40)及其第70位苏氨酸突变型(70muCD40)和第114位谷氨酸突变型(114muCD40)的重组真核表达载体pIRES2-EGFP/wtCD40、pIRES2-EGFP/70muCD40和pIRES2-EGFP/114muCD40,脂质体转染法将重组载体导入HEK293细胞,筛选稳定转染细胞株(即HEK293/wtCD40、HEK293/70muCD40和HEK293/114muCD40细胞)。流式细胞术和Western blotting检测5C11单抗与HEK293/wtCD40、HEK293/70muCD40和HEK293/114muCD40细胞的结合能力。结果:成功构建pIRES2-EG-FP/wtCD40、pIRES2-EGFP/70muCD40和pIRES2-EGFP/114muCD40真核表达载体和相应稳定转染细胞株。5C11单抗与HEK293/70muCD40和HEK293/114muCD40细胞结合能力较HEK293/wtCD40细胞明显减弱;Western blotting检测结果表明,5C11单抗仅识别HEK293/wtCD40细胞,不识别HEK293/70muCD40和HEK293/114muCD40细胞。结论:人CD40氨基酸序列的第70位苏氨酸和第114位谷氨酸是其单抗5C11识别的抗原表位,对构建人源化CD40抗体具有潜在的临床意义。     

药学专业细胞生物学实验教学的改革与探索

目前,我校药学专业细胞生物学实验存在一些问题：实验设施缺乏,学生并未对细胞实验严格的无菌环境操作有充分的认识;与其他学科的实验存在重复现象;实验考核方法不合理,以致学生不重视实验;与药学研究缺乏紧密的联系;各个学科实验教学结合不够紧密等。针对以上问题,我们进行了下列实验教学改革,并初步取得一些成效。     

分离纯化重组水蛭素Ⅲ工艺的优化研究及重组水蛭素Ⅲ的分子鉴定

目的优化分离纯化大肠杆菌发酵液中重组水蛭素Ⅲ的工艺并对所纯化产物进行分子鉴定. 方法通过三步纯化步骤,即大孔树脂层析、DEAE纤维素DE52层析和反相高效液相色谱层析,分离纯化发酵液中的重组水蛭素Ⅲ,优化纯化条件.通过SDS-PAGE和分析型反相高效液相色谱对重组水蛭素Ⅲ的纯度进行鉴定.以质谱对重组水蛭素Ⅲ的分子量进行鉴定.通过肽图的测定来鉴定重组水蛭素Ⅲ的结构. 结果通过优化后的分离纯化步骤得到了纯度为95.4786%的纯品,总产率为39%.得到的产物分子量为6 913.32 ± 6.55 Da,与重组水蛭素Ⅲ分子量的理论值相符,其结构亦与理论值一致. 结论优化后的分离纯化步骤可以有效地用于大肠杆菌发酵液中重组水蛭素Ⅲ的大规模分离纯化.所得的高纯度产物确为基因重组水蛭素Ⅲ.     

主肺间隔缺损的外科治疗

目的 探讨主肺间隔缺损的外科治疗经验.方法 1987年12月至2007年3月,16例主肺间隔缺损病儿(人),其中男11例,女5例,年龄5个月～22岁,平均(8.2±7.1)岁;体重5.8～50.0 kg,平均(22.2±13.9)kg.Mori分型Ⅰ型7例,Ⅱ型7例,Ⅲ型2例.主肺间隔缺损大小10～35mm,平均(22.6±7.3)mm.其中合并室间隔缺损、房间隔缺损和肺主动脉弓离断畸形(B型)各2例,动脉导管未闭1例.术前10例行心导管检查,肺动脉收缩压50～120 mm Hg(1 mm Hg=0.133 kPa),平均(75.4±25.2)mm Hg,肺动脉平均压21～100 mm Hg,平均(60.3±24.8)m Hg.14例在中低温体外循环下完成手术,2例在深低温停循环完成手术.结果 主动脉阻断(70.6±48.1)min,体外循环(110.5±62.9)min.术后10例肺动脉收缩压(50.2±18.5)mm Hg,平均肺动脉压(40.0±15.2)mm Hg,术后呼吸机使用(22.6±14.5)h,滞留蕈症监护室1～70 d,总住院14～127 d.2例合并主动脉弓离断者围术期分别死于急性肾衰和术后低心排出量综合征.14例痊愈,平均随访(8.8±7.5)年,1例主肺动脉间隔小残余漏,余心功能明显改善.结论 主肺间隔缺损者肺血管病理改变早,早期诊断、及时手术,能降低病死率.     

PI3K/AKT信号通路的抑制促进B7-H4分子的核转移

目的探讨磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/AKT)信号通路对负性共刺激分子B7-H4细胞定位的调控作用。方法体外培养稳定转染B7-H4/HEK293细胞,采用PI3K/AKT特异性抑制剂LY294002和/或出核转运抑制剂来普霉素B(LMB)处理细胞之后,免疫荧光技术结合激光共聚焦显微镜检测B7-H4蛋白在B7-H4/HEK293细胞中亚细胞定位的变化;Western blot法检测B7-H4蛋白在细胞膜、细胞质和细胞核表达水平的变化。结果激光共聚焦显微镜观察结果显示,PI3K抑制剂LY294002作用于B7-H4稳定转染的B7-H4/HEK293细胞后,与空白对照组相比,B7-H4发生核转移,加入出核转运抑制剂LMB后,核转移的程度显著增加;Western blot法结果显示,LY294002抑制PI3K/AKT信号通路活性24 h后,B7-H4在细胞膜和细胞质中的定位均显著降低(P0.05),而细胞核中B7-H4的定位显著增加(P0.05)。结论 PI3K/AKT信号通路可抑制B7-H4的核转移。     

miR-26a-5p对H2O2诱导的EA.hy926血管内皮细胞损伤的影响

目的 探讨miR-26a-5p对过氧化氢(H₂O₂)诱导的EA.hy926内皮细胞焦亡和血栓因子(TF)的影响及其机制。方法 MTT法检测不同浓度H₂O₂(0,100,300,400,450,500,700μmol/L)刺激EA.hy926内皮细胞后的存活率。为了研究H₂O₂对EA.hy926内皮细胞的影响，分为control组(0μmol/L H₂O₂)和450μmol/L H₂O₂组；为了研究miR-26a-5p对过氧化氢(H₂O₂)诱导的EA.hy926内皮细胞损伤的影响及其与PI3K/Akt信号通路的关系，分为miR-26a-5p mimic+H₂O₂组，mimic NC+H₂O₂组，miR-26a-5p inhibitor+H     

蠲痹汤配合针刺治疗颈椎病疗效观察

目的:观察蠲痹汤配合针刺治疗各型颈椎病的疗效。方法:将42例符合条件的患者随机分为2组,治疗组应用蠲痹汤加减并配合针刺,对照组应用香丹注射液及20%甘露醇静滴并配合枕颌牵引。结果:治疗组总有效率95.45%,对照组为65.00%,两组疗效有显著性差异(P<0.01)。结论:蠲痹汤配合针刺治疗颈椎病疗效好。     

中国皖南尖吻蝮蛇毒细胞毒素的体外抗癌活性

目的：探讨从中国皖南尖吻蝮蛇(Agkistrodon acutus)蛇毒中提取的细胞毒素的体外抗癌活性。方法：DEAE-Sepharose FF，Source30s柱层析分离纯化细胞毒素组分，溴化二苯四偶氮盐(MTT)比色法测定该组分对体外培养的人癌细胞的细胞毒作用。结果：从中国皖南尖吻蝮蛇毒中分离出两种单一组分(ACTX-6，ACTX-8)对体外培养的人鼻咽癌细胞株(KB)，胃癌细胞株(BGC)，结肠癌细胞株(CACO-2)，卵巢癌细胞株(HO8910)，肺癌细胞株(A549)均有很强的抑制作用，ACFX-6的体外抗癌活性较ACTX-8强，对A549的抑制作用最强，呈剂量依赖关系。结论：ACTX-6对体外培养的人癌细胞有明显的抑制和杀伤作用。     

介入治疗对周围血管疾病患者炎症指标、营养状况及肾功能的影响

目的 探讨介入治疗对周围血管疾病患者炎症指标、营养状况及肾功能的影响。方法 收集2018年10月至2020年7月于上海中医药大学附属岳阳中西医结合医院接受介入治疗的174例周围血管疾病患者的临床资料。比较患者介入治疗前后的炎症指标[白细胞计数（WBC）、C-反应蛋白（CRP）、血清淀粉样蛋白A(SAA)、降钙素原（PCT）、血沉（ESR）、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-8(IL-8)、白细胞介素-10(IL-10)、白细胞介素-2(IL-2)受体]、营养状况指标[红细胞计数（RBC）、血红蛋白（Hb）浓度、血小板计数（PLT）、白蛋白（ALB）]及肾功能指标[钾（K）、血肌酐（SCr）、肾小球滤过率（GFR）]。结果 治疗后WBC高于治疗前,差异有统计学意义（P<0.05）。治疗前后CRP、PCT、ESR、TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-8、IL-10及IL-2受体水平比较,差异均无统计学意义（P>0.05）。治疗后RBC、Hb浓度、PLT及ALB水平均低于治疗前,差异均有统计学意义（P<...     

用蛋白组学法筛选肾透明细胞癌潜在标记物

目的 分析肾细胞癌肿瘤特异性蛋白质,寻找新的肿瘤分子标志物.方法 应用二维电泳(2D-PAGE)分析9例肾细胞癌患者癌组织和周边的正常肾组织中差异表达的蛋白分子,并运用MALDI-TOF-MS和MS/MS法对差异表达的蛋白质标记点进行了鉴定.结果 经过二维电泳分离样本,发现了差异表达的16个蛋白质点(P＜0.05,t检验),用MALDI-TOF-MS法对这些点进行分析鉴定,确定了他们的种类,其中表达下调的有钙结合蛋白、酯类水解酶、乙醇脱氢酶、ammecr-1样蛋白、ADP/ATP转位-3和LYRM-5;表达上调的有HIG-1、谷胱甘肽S.转移酶(GSTP-1)、Peroxiredoxin-3、Peroxiredoxin-6、CD2相关蛋白(CD2AP)、Annexin V、γ-烯醇化酶、视网膜脱氢酶、波形蛋白(vimentin)和α-谷氨酰转移酶.2.结论 在筛选到的16种蛋白质中,钙结合蛋白、ADP/ATP转位酶-3、HIG-1、谷胱甘肽-S-转移酶、Peroxiredoxin-3和6是比较有研究价值的分子.