RACE法在连翘花蕾全长cDNA文库构建中的应用

目的建立新的连翘花蕾全长cDNA文库构建方法。方法应用GeneRacer^TM试剂盒,采用改良RNA连接酶介导的快速扩增cDNA末端（RNA ligase-mediated rapid amplication of cDNA ends,RLM—RACE）技术构建连翘花蕾全长的cDNA文库,通过计算菌落数、蓝白斑数、酶切鉴定、序列分析等手段评价文库质量。结果通过增加模板用量的方法成功构建了连翘花蕾全长cDNA文库,该文库容量为3．47×10^5,重组率为81．6％,插入片段多集中在500—1000bp之间,所占比例为71％;随机测序的cDNA克隆中均含有完整开放阅读框的全长cDNA序列。结论应用RACE法成功构建了连翘花蕾全长cDNA文库。     

款冬花中款冬酮超临界CO2萃取研究

目的建立款冬花中款冬酮的超临界CO2萃取方法并与溶剂提取方法比较。方法采用超临界CO2萃取、溶剂提取法提取款冬花中款冬酮,并对提取物进行高效液相色谱分析。色谱条件为：色谱柱Diamonsil C18（200mm×4．6mm,5μm）,流动相为甲醇：水（77：23）,流速1ml／min,检测波长219nm。结果经均匀设计实验的筛选,得超临界CO2萃取优化的最佳条件为：萃取压力22MPa,萃取温度40℃,萃取时间35min。该条件下款冬酮得率为0．33％;常规溶剂提取法提取款冬酮的得率为0．17％。结论超临界CO2萃取方法能有效萃取款冬花中的款冬酮,款冬酮得率明显高于溶剂提取法,且纯度较高。该方法省时、易操作、提取效率高,可用于款冬花中款冬酮的提取。     

黄芩百部配伍过程中主要活性成分的变化研究

目的 研究黄芩百部配伍过程中主要活性成分的变化. 方法 通过薄层色谱法(TLC)比较黄芩、百部单煎与合煎黄酮与生物碱成分的变化,采用紫外分光光度法测定了黄芩总黄酮的含量,运用酸性染料比色法对百部生物碱作半定量分析,比较黄芩百部单煎与合煎总黄酮和总生物碱含量的变化. 结果黄芩百部合煎后每100 g黄芩中总黄酮的含量从单煎的5.774 g增加到8.487 g;生物碱含量合煎∶单煎为1∶ 1.061;黄酮种类基本不变;减少了一种生物碱成分. 结论 黄芩与百部配伍后合煎的化学成分不同于单味药化学成分的简单加和,百部有助于黄芩中总黄酮成分的煎出,黄芩对百部生物碱成分有影响.     

不同款冬花药材中槲皮素和山柰素的定量分析及 HPLC 指纹图谱研究

目的 建立款冬花药材中槲皮素和山柰素的定量测定方法,测定不同来源的药材中槲皮素和山柰素的量,评价产地、生长方式及炮制对款冬花中槲皮素和山柰素量的影响;并建立款冬花中黄酮醇苷类成分指纹图谱,为款冬花质量控制的制定提供依据。方法 采用 HPLC 建立款冬花药材中槲皮素和山柰素的定量测定方法,色谱条件：Diamonsil C18 (200 mm×4.6 mm, 5 μm),流动相为乙腈-水 (77∶23),检测波长：365 nm。采用 HPLC 法建立款冬花药材中黄酮醇苷类成分指纹图谱,色谱条件：ODS-BP C18 (200 mm×4.6 mm, 5 μm);流动相：乙腈-0.1% H3PO4 水溶液梯度洗脱;检测波长为 365 nm。结果 不同产地,炮制品与生品之间,其槲皮素和山柰素的量差异较大,不同生长方式的药材之间无明显差异;不同产地及批次的款冬花药材的指纹图谱相似度较高。结论 本研究建立的槲皮素和山柰素的定量测定方法简便、准确、重现性好,可用于款冬花药材中黄酮醇苷类成分的质量控制;不同来源的款冬花药材中的槲皮素和山柰素的量有明显差异;所建立的黄酮醇苷类成分的指纹图谱方法操作性强、重现性好,可作为款冬花黄酮醇苷类成分指纹图谱研究的基础。     

安宫牛黄丸的临床应用研究进展

安宫牛黄丸是传统中药最负盛名的急症用药,具有清热解毒、镇惊开窍的功效,在临床中多用于治疗各种脑部疾病、高热、炎症等,在治疗颅脑损伤、脑梗死、脑出血、小儿发热、癌性发热、病毒性脑炎、肺炎、盆腔炎、毛细急性支气管炎等具有很好的临床应用价值。另外对癫痫、惊厥以及其他脓毒症、手足口病等都有良好的治疗效果。对安宫牛黄丸的临床应用进展进行综述,并对其今后的应用和发展提出思考,旨在为今后的研究工作提供参考。     

逍遥散对抑郁大鼠行为学及骨骼肌线粒体结构与功能的影响

目的 观察逍遥散对抑郁大鼠行为学及其骨骼肌线粒体超微结构和功能的影响。方法 将SD大鼠随机分为对照组、模型组、文拉法辛（给予盐酸文拉法辛胶囊35 mg·kg^-1）组和逍遥散（生药21.2 g·kg^-1）组,每组12只。除对照组外,采用孤养结合28 d慢性不可预知温和应激（CUMS）建立抑郁模型,造模同时给药,每天1次,连续给药28 d。对大鼠的体质量、糖水偏爱率及旷场实验中的直立次数、穿越格数进行评价;在透射电镜下观察骨骼肌线粒体结构,试剂盒法检测骨骼肌线粒体中腺嘌呤核苷三磷酸（ATP）和线粒体呼吸链复合体（MRCC）I、Ⅱ、III、IV、V水平。结果 与对照组比较,模型组大鼠体质量增长显著减缓、糖水偏爱率、直立次数和穿越格数显著减少（P＜0.05、0.01）;与模型组比较,文拉法辛组和逍遥散组造模第3、4周大鼠体质量显著增加（P＜0.05、0.01）,文拉法辛组造模第2、3周和逍遥散组造模第1～4周大鼠糖水偏爱率显著升高（P＜0.05、0.01）,文拉法辛组造模第1、3、4周和逍遥散组造模第3、4周大鼠直立次数显著增加（P＜0.05、0.01）,文拉法辛组造模第1～4周和逍遥散组造模第3、4周大鼠穿越格数显著增多（P＜0.05、0.01）。透射电镜结果发现,与对照组比较,模型组大鼠骨骼肌线粒体数目减少、空泡变性及形态肿胀;与模型组比较,文拉法辛组和逍遥散组的大鼠骨骼肌线粒体结构和功能损伤较轻。与对照组比较,模型组大鼠骨骼肌中的MRCC Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ和ATP水平显著下降（P＜0.05、0.01）;与模型组比较,文拉法辛组MRCC Ⅰ、Ⅱ、Ⅳ水平,逍遥散组MRCC Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ和ATP水平均显著升高（P＜0.05、0.01）。结论 抑郁大鼠出现骨骼肌线粒体结构和功能损伤,可能是引起抑郁大鼠产生疲劳的原因之一;逍遥散可通过保护骨骼肌线粒体结构和功能进而改善大鼠抑郁症状。     

脑细胞衰老在阿尔茨海默症发病机制中的潜在作用

细胞衰老的显著特征是永久的细胞周期停滞,同时伴随细胞代谢、表观遗传调控等变化。阿尔茨海默症(AD)是一种常见的神经退行性疾病,主要症状为记忆力减退和认知功能障碍。大量研究表明,星形胶质细胞和小胶质细胞等中枢神经系统细胞的衰老与AD的发生密切相关,抑制脑细胞衰老有望为AD的防治提供新思路和治疗策略。本文综述了脑细胞衰老在AD发病中的潜在作用及机制、脑细胞之间的相互影响,从而为AD病理机制研究及抗AD药物研发提供新的方向。     

新疆地区HBV感染者的血清学模式与HDV的关系

目的了解新疆地区乙乙肝炎病毒(HBV)感染者的血清学模式与丁型肝炎病毒(HDV)的关系,为新疆乙型肝炎病毒指标阳性病例的各民族(汉族162例、维族93例、哈族53例、回族32例、蒙古族28例)病毒性肝炎诊断、治疗提供可靠的流行病学资料。方法应用国产酶联免疫法(ELISA)和荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR),检测了新疆各地区不同民族HBV的血清学模式、HBV DNA和HDAg、抗-HD。结果在368例各族患者血清中,48例HDV血清标志物阳性,HBV血清学模式为HBsAg+、HBeAg+、抗-HBc+22例;HBsAg+、抗-HBe+、抗-HBc+18例;HBsAg+、抗-HBc+8例。结论新疆地区各民族HBV感染者中,HDV阳性标志物与HBV血清学模式、HBV DNA之间比较,P>0.05,并无显著性差异。     

柴胡与狭叶柴胡的特异性引物PCR鉴别方法

目的设计专用于柴胡与狭叶柴胡鉴别的ARMS特异性引物,为柴胡、狭叶柴胡的药材鉴别提供分子鉴定依据。方法根据柴胡、狭叶柴胡与其他柴胡属植物的r DNA ITS序列,寻找柴胡与狭叶柴胡的序列特异性位点,设计用于进行柴胡与狭叶柴胡分子鉴别的特异性引物。结果该特异性引物为柴胡、狭叶柴胡的鉴别提供了分子鉴定依据,可从多种药材及中成药(蜜丸、水蜜丸)中快速、准确地检测出柴胡、狭叶柴胡。结论运用特异性引物PCR法能有效地从植物和中成药(蜜丸及水丸)中鉴别出柴胡与狭叶柴胡,该方法具有准确、高效、省时、简便的特点。