囊内刮除术与瘤段切除术治疗四肢长骨骨巨细胞瘤伴病理性骨折的Meta分析

目的 对囊内刮除术与瘤段切除术治疗四肢长骨骨巨细胞瘤(giant cell tumor of bone,GCT)伴病理性骨折的疗效进行Meta分析.方法 计算机检索中国知网、万方、维普、中国生物医学文献数据库和中国临床注册中心、PubMed、Embase、Cochrane及美国临床注册中心.手工检索查阅文章所附的参考文...     

运用蛋白质组学方法分析尤文肉瘤患者化疗前后血液差异表达蛋白的变化

目的 运用蛋白质组学方法分析尤文肉瘤(ES)患者化疗前后全血样本差异表达蛋白的变化.方法 收集4例ES患者化疗前(化疗前组)和化疗4个周期结束后(化疗后组)全血标本及4例自愿入组的健康人(健康组)的全血标本.ES患者均行4个周期长春新碱、阿霉素、环磷酰胺/异环磷酰胺及依托泊苷(VAC/IE方案)化疗.采用同位素标记相对...     

如何搞好骨科临床实习教学

临床实习是医学理论联系实际的桥梁，是培养和提高医学生运用所学理论进行逻辑思维与临床实践能力的重要阶段，在医学教学中起着承前启后的作用。临床实习的主要任务是帮助医学生将理论知识应用于临床实践，培养分析问题、解决问题的能力，为以后的工作打下坚实的基础。在实际工作中，由于骨科教学内容繁多、概念抽象、专业性强而复杂、涉及面广、实践性强，新理论、新技术、新业务发展快，[编者按]     

脱乙酰化酶抑制剂苯丁酸钠体外诱导Kasumi-1细胞分化和凋亡作用

目的 探讨组蛋白脱乙酰化酶抑制剂苯丁酸钠(PB)体外阻断AML1-ETO的生物学功能，消除AML1-ETO的转录抑制，诱导Kasumi-1细胞生长抑制、分化和凋亡作用。方法 应用MTT比色法观察PB对细胞的生长抑制作用，普通光学显微镜和透射电镜观察细胞形态和结构改变，流式细胞术分析细胞周期和检测髓系分化抗原的表达，Annexin V标记、DNA凝胶电泳和流式细胞术分析细胞凋亡。结果 ①PB明显抑制Kasumi—1细胞的生长，半数抑制浓度(IC50)约为2．3mmol/L；②经PB作用后细胞阻滞于G0／G1期，伴有S期细胞减少；③PB可诱导Kasumi—1细胞髓系分化抗原CD11b和CD13表达增加，并呈剂量和时间依赖性；④PB诱导Kasumi-1细胞凋亡，呈时间剂量依赖性，PB3mmol/L培养2d早期凋亡细胞增加，培养3d晚期凋亡细胞增加，培养5d出现明显DNA梯形条带；⑤处理后的细胞出现单核细胞样分化和凋亡细胞形态改变。结论 脱乙酰化酶抑制剂PB抑制Kasumi—1细胞生长，使细胞阻滞于G0／Gl期；诱导细胞部分分化和凋亡。     

羟基脲提高β-地中海贫血/血红蛋白E病血红蛋白F水平和促进红系造血

β-地中海贫血/血红蛋白E病临床表现严重,与重型β-地中海贫血相似,羟基脲(HU)为细胞周期特异性药物,能阻断DNA合成,可促进其它类型β-地中海贫血及镰状细胞贫血血红蛋白F(HbF)生成,提高其Hb水平。 应用口服递增剂量HU治疗13例β-地中海贫血/血红蛋白E病患者(男性6例、女性7例;年龄18～55岁,中位年龄34岁)。HU初始治疗剂量为10mg/kg·d,连续服用,10周后若无明显毒性反应则剂量增到20mg/kg·d,再继续服用10周。治疗前及治疗后定期复查血象,HbE及HbF水平,测定~Gγ:~Aγ及α链:非α链球蛋白比例。 结果 12/13例患者HbF水平明显上升,由42％±11％(X±SD,下同)升至56％±8％(P<0.001);     

嵌合抗原受体T细胞靶向LMP1抗原治疗EB病毒阳性淋巴瘤的功能研究北大核心CSCD

目的制备一种靶向LMP1抗原的嵌合抗原受体T细胞(CAR-T细胞),研究其对EB病毒(EBV)阳性淋巴瘤的免疫治疗作用。方法应用分子克隆技术构建二代LMP1 CAR表达质粒,通过慢病毒包装体系包装病毒后感染人T细胞,获得LMP1 CAR-T细胞,体外实验验证LMP1 CAR-T细胞对感染EBV后的LMP1阳性淋巴瘤细胞的特异性细胞毒性作用。结果①LMP1蛋白表达于EBV阳性的淋巴瘤细胞表面;②成功构建了二代LMP1 CAR慢病毒载体,感染人T细胞,获取LMP1 CAR-T细胞,感染效率大于80%;③LMP1 CAR-T细胞可特异性杀伤LMP1阳性淋巴瘤细胞,当效靶比按4∶1共培养48 h后,LMP1 CAR-T细胞对Raji细胞的杀伤作用增强,对Ramos细胞无明显杀伤作用;④与LMP1阳性淋巴瘤细胞按1∶1共培养5 h后,LMP1 CAR-T细胞处理组CD107a^(+)T细胞比例显著高于Vector-T细胞组[(13.25±2.94)%对(1.55±0.05)%,t=3.972,P=0.017],脱颗粒效果增强;⑤与LMP1阳性淋巴瘤细胞共培养后,LMP1 CAR-T细胞组CD69+、CD25+T细胞比例显高于Vector-T细胞组[(7.40±0.41)%对(3.48±0.47)%,t=6.268,P=0.003;(73.00±4.73)%对(57.67±2.60)%,t=2.842,P=0.047],活化效应增强。⑥与LMP1阳性淋巴瘤细胞共培养后,LMP1 CAR-T细胞组细胞因子分泌增强,高于Vector-T细胞组[IFN-γ:(703±73)ng/L对(422±87)ng/L,t=2.478,P=0.068;TNF-α:(215±35)ng/L对(125±2)ng/L,t=2.536,P=0.064]。结论该研究证实EBV阳性淋巴瘤细胞表面可特异表达LMP1蛋白,成功构建了LMP1 CAR慢病毒载体并感染人T细胞,成功获得LMP1 CAR-T细胞。体外实验证实:与LMP1阳性淋巴瘤细胞共培养后,LMP1 CAR-T细胞脱颗粒效果增强,活化效应增强,高效分泌细胞因子,可特异杀伤LMP1阳性淋巴瘤细胞,具有潜在的临床应用前景。     

严重型再生障碍性贫血患者骨髓和外周血 HLA-DR~ T 细胞的变化及其淋巴细胞造血抑制活性的研究

目的：进一步阐明免疫紊乱在严重型再生障碍性贫血（ＳＡＡ）发病中的作用。方法：对１３例初诊ＳＡＡ、７例抗淋巴细胞球蛋白（ＡＬＧ）治疗后恢复期ＳＡＡ（ｒＳＡＡ）患者骨髓和外周血及对照组（包括９名骨髓对照和１１名外周血对照）的ＨＬＡ－ＤＲ＋Ｔ细胞进行检测，并对部分患者和对照组刺激的外周血去单核细胞的单个核细胞培养上清液（ＰＨＡ－ＬＹＣＭｓ）的造血活性进行检测。结果：初诊ＳＡＡ患者骨髓及外周血ＨＬＡ－ＤＲ＋Ｔ细胞显著高于对照组（Ｐ＜０．００１）；ＡＬＧ治疗后ｒＳＡＡ患者骨髓和外周血ＨＬＡ－ＤＲ＋Ｔ细胞较初诊ＳＡＡ下降，但仍高于对照组（Ｐ＜０．００１）；ＳＡＡ患者骨髓内ＨＬＡ－ＤＲ＋Ｔ细胞显著高于外周血（Ｐ＜０．００１）；与对照组比较，初诊的ＳＡＡ患者外周血ＰＨＡ－ＬＹＣＭｓ对正常骨髓ＢＦＵ－Ｅ和ＣＦＵ－ＧＭ具有显著的抑制作用（Ｐ＜０．００１），而ＡＬＧ治疗后ｒＳＡＡ患者ＰＨＡ－ＬＹＣＭｓ对正常骨髓ＢＦＵ－Ｅ和ＣＦＵ－ＧＭ的抑制作用明显减弱。结论：ＨＬＡ－ＤＲ＋Ｔ细胞在ＳＡＡ的发病中可能发挥重要的作用。     

膝关节软骨下骨不同表面积缺损对关节软骨组织形态的影响

目的探讨膝关节软骨下骨不同表面积缺损对关节软骨早期组织形态的影响。方法 30只成年大白兔,随机分为A、B、C组各10只,右侧胫骨内侧髁胫骨平台下开骨窗,分别钻取10、15、20mm深度后行软骨下骨刮除术(缺损表面积分别占膝关节软骨面全表面积的50%、75%、近100%),残腔灭活后植入同种异体骨。术后4周,处死动物后取右侧膝关节标本,观察内侧胫骨平台大体形态,行HE染色观察组织学形态变化,行软骨退变病理学Mankin评分,Pearson相关分析各组Mankin评分的相关性。结果 A组关节软骨面接近正常,粉红色,表面平整、光滑;B组软骨表面粗糙,呈灰黄色,滑膜增生较为明显;C组关节面粗糙无光泽,滑膜增生明显,可见明显裂隙、部分软骨面塌陷;B、C组Mankin评分[(5.80±1.48)、(6.00±1.50)分]均高于A组[(1.40±1.07)分](P0.05),B组与C组Mankin评分比较差异无统计学意义(P0.05);Pearson相关分析结果显示,A组Mankin评分与B、C组Mankin均呈正相关(r=0.88,P0.001;r=0.87,P0.001)。结论软骨下骨缺损表面积≤软骨面全表面积的50%时,关节软骨仅发生轻微退变,超过软骨面全表面积的50%时,软骨在早期阶段就已发生严重退变。     

靶向CD52嵌合抗原受体T细胞的制备及其抗白血病作用研究北大核心CSCD

目的构建一种靶向CD52的嵌合抗原受体T细胞(CD52 CAR-T),探索其对CD52+白血病的治疗效果。方法应用分子克隆技术构建以CD52为抗原结合区的CD52 scFv、4-1BB为共刺激分子的二代CAR-T细胞。慢病毒载体包装后感染T细胞,制备CD52 CAR-T细胞,通过流式细胞术检测CD52 CAR-T细胞CD4、CD8细胞亚群及其分化状态。通过体外杀伤实验、脱颗粒实验及细胞因子的释放等功能实验,观察CD52 CAR-T细胞对CD52+白血病细胞的特异性细胞毒作用。结果①成功构建了pCDH-CD52 scFv-CD8α-4-1BB-CD3ζ-GFP表达载体,感染人T细胞,获得靶向CD52的CART细胞。②感染CD52 CAR表达载体的第6天,T细胞中表达CD52的细胞可被清除[CD52 CAR-T组CD52+T细胞为(4.48±4.99)%,Vector-T组为(56.58±19.8)%,P=0.011]。③CD52 CAR-T的自我杀伤不会影响T细胞的增殖,培养后期CD52 CAR-T组的增殖速度高于Vector-T组。④T细胞表型检测发现CD52 CAR可以促进CAR-T细胞向中心记忆T细胞及效应记忆T细胞分化,减少CAR-T细胞向终末效应细胞分化。⑤CD52 CAR-T细胞与HuT78-19t及MOLT4-19t靶细胞以效靶比1∶1共培养24 h,HuT78-19t细胞可被清除,而对MOLT4-19t细胞无明显杀伤作用[(2.66±1.60)%对(56.66%±5.74)%,P<0.001]。⑥脱颗粒实验显示,HuT78-19t细胞对CD52 CAR-T细胞的激活作用显著高于MOLT4-19t细胞[(57.34±11.25)%对(13.06±4.23)%,P<0.001]。⑦CD52 CAR-T与HuT78-19t细胞共培养48 h上清中细胞因子分泌水平[IFN-γ(3706±226)pg/ml、TNF-α(1732±560)pg/ml]远高于MOLT4-19t细胞组[IFN-γ(1577±846)pg/ml、TNF-α(74±12)pg/ml](P值均<0.01)。结论该研究成功制备了具有抗白血病作用的CD52 CAR-T细胞,为进一步的靶向CD52的免疫治疗奠定了基础。     

靶向CD33抗原三特异性T细胞衔接器的制备及对白血病细胞的作用研究北大核心CSCD

目的研究靶向CD33抗原双特异性及三特异性T细胞衔接器对T细胞增殖及其抗白血病作用。方法构建抗CD33scFv-抗CD3scFv的双特异性T细胞衔接器(CD33-BiTE)及在BiTE基础上加入CD80胞外段的三特异性T细胞衔接器(CD33-TriTE)表达载体, 使用真核细胞表达系统表达蛋白并进行亲和层析纯化。检测CD33-BiTE及CD33-TriTE对T细胞活化增殖功能及对白血病细胞杀伤功能活性的影响。结果①成功构建了CD33-BiTE及CD33-TriTE表达载体, 在真核细胞中表达, 纯化得到的融合蛋白能与相同靶抗原流式抗体竞争结合于靶细胞表面。②CD33-BiTE及CD33-TriTE分别与人T细胞共培养12 d后, T细胞数扩增至基线值的(33.89±19.46)倍和(81.54±23.62)倍, CD33-TriTE促T细胞增殖能力明显优于CD33-BiTE(P<0.05)。③体外实验证实CD33-BiTE和CD33-TriTE均可增强T细胞对表达CD33白血病细胞的特异性杀伤作用, 且在一定浓度范围内, 浓度越高, 抗体的杀伤作用越强。④与CD33-TriTE相比, CD33-BiTE杀伤白血病细胞的同时增加其PD-L1表达, 而TriTE对过表达PD-L1的Molm13细胞具有更强的杀伤作用。结论该研究构建了CD33-BiTE及CD33-TriTE表达载体, 并在真核细胞表达了融合蛋白, 体外实验证实其促T细胞增殖活化的特性, 并具有促T细胞抗白血病作用。其中CD33-TriTE较CD33-BiTE促增殖效果更强, 且对PD-L1高表达的白血病细胞杀伤效果更强。