3株登革病毒1型广东分离株NS 1基因序列测定

登革热 (Ｄｅｎｇｕｅｆｅｖｅｒ ,ＤＦ)是一种急性虫媒传染病 ,严重者表现为严重的登革出血热或登革休克综合征 ,后者死亡率可达 5 %。广东省自 1978年以来 ,先后有 10多次登革热暴发流行。目前认为 ,我国登革热为传入性 ,但登革热的病原登革病毒 (ＤＶ)流行株的来源还不明确。我们通过测定我国广东省ＤＦ病人血清中分离的 3株ＤＶ - 1的ＮＳ 1基因序列 ,比较其核苷酸及其编码氨基酸的差异 ,探讨 1999、1997和 1995年在广东流行的登革热的可能来源。1　材料和方法　 (1)材料 :试剂为ｐＵＣｍＴ载体、3ＳＧｅｌＰｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎＫｉ…     

登革病毒2型广东省分离株的鉴定及NS1基因序列分析

目的 明确广东省南海市1998年夏、秋季一批发热、出疹患者的诊断,并从基因水平分析其流行株的来源。方法 收集疑似登革热（DF）患者 血清52份,应用逆转录－聚合酶链反应（RT－PCR）、病毒分离和间接免疫荧光技术分别进行了病原学和血清学检测;同时采用分子克隆技术将PCR扩增产物克隆到T载体,并进行序列测定。结果 从25份发病早期患者血标本中分离病毒10份,经用单克隆抗体间接免疫荧光检测和RT－PCR检没让实为登革病素2型感染。基因序列分析表明,1998年广东分离的登革2型病毒与ThNH-P28/93、C0166`16681`NGC`JAM`04`GD06/93和S1株核苷酸的同源性分别是：98％、97％、96％、93％、92％、91％。结论 此次南海市登革热暴发流行为 登革病毒2型感染所致。基因序列分析提示：1998年广东省南海市分离的登革病毒2型可能来源于泰国。     

2003年广州市登革1型病毒流行株的分离及NS2基因序列分析

目的对广州市区2003年仲夏—批疑似登革病毒感染的患进行确诊，并从基因水平分析流行株的可能来源。方法用免疫层析法(ICT)检测早期疑似患的DV—IgN和IgG抗体；同时用逆转录-聚合酶链反应(RT—PCR)、细胞培养病毒分离分别进行病原的分离和鉴定；对所分离到的毒株进行基因克隆、测序，并与国际参考株及国内流行株相应的序列进行同源性分析，结合患的流行病学资料推测本次流行株的可能来源。结果发病5d内患DV—IgM抗体阳性率为56．5％(13／23)，发病5～10d的患DV—IgM抗体阳性率为66．7％(16／24)；DV—IgG抗体无1例阳性。从18份发病5d内患的血标本中分离病毒7份，经RT—PCR和基因测序检测证实为DVI感染；用RT—PER检测30份早期患血标本，患的阳性率为83．3％(25／30)。基因序列分析表明，2003年流行株与登革1型病毒柬埔寨流行株及我国1997、1999年登革1型病毒流行株的同源性最高，分别为97％、97％、98％。所有患在发病前两个月均在广州市区某大院内居住，无输血史、无外出史。结论2003年广州登革热流行为登革1型病毒感染所致，推测广东可能存在登革1型病毒的疫源地。     

登革病毒特异性重氮乳胶的研究及应用

以重氮基聚苯乙烯为载体,首次研制出登革病毒特异性重氮乳凝快速诊断试剂。玻片凝集检测登革病毒抗原,能在5分钟内出现结果,30分钟内无自凝现象。该试剂在登革病毒1—4型间交叉明显,对登革病毒以外的其它虫媒病毒无明显交叉反应。最低检出抗原量达15ng/ml 病毒蛋白水平,敏感性是血凝方法的100倍。病毒接种c/36细胞和乳鼠后的48小时之内,能分别在其培养液及鼠脑组织和血液中检出病毒抗原,明显早于细胞病变及病征的出现。该试剂在4℃保存至少半年仍具有较好的稳定性。现场应用发现,16例登革病人急性期血清,有6例呈阳性反应,其中一例经病毒分离得到证实。18例伤寒病人,4例衣原体感染病人和10例正常人血清均呈阴性反应。     

新生儿无症状轮状病毒感染的研究

应用酶联免疫吸附测定(ELISA)与聚丙稀酰胺凝胶电泳(PAGE)法对广州市两家医院产科病房的产妇及出生1～9天的新生儿以及3所幼儿园1～4岁健康儿童进行了轮状病毒感染情况的调查,结果表明,25例产妇及80例正常儿童粪便中,无1例检出轮状病毒,而64例新生儿中的轮状病毒感染率为20.3％,人工喂养的新生儿轮状感染率(53.8％)较母乳喂养者为高(11.8％),排毒持续时间也较长。产道分娩较剖腹分娩的新生儿,感染轮状病毒的时间早。所有新生儿感染的轮状病毒,病毒核酸电泳型均为同一模式,与当年婴幼儿腹泻病孩所分出的轮状病毒流行优势株,其电泳图谱完全重叠。32份脐血中仅1份轮状病毒特异性IgM抗体阳性。此外,用PAGE及阻断ELISA法证实,ELISA法检测无症状新生儿粪便的轮状病毒时,具有较高的假阳性(24.8％)。     

登革2型病毒广东流行株结构蛋白基因序列测定及分析

目的 对广东省90年代以来流行的3株登革2型病毒(DEN2)的结构蛋白基因序列测定及分析，了解流行株之间的相互关系、变异及基因型：方法 应用RT-PCR技术扩增广东省不同年份流行的3株DEN2型病毒的结构蛋白基因(C、PrM、E基因)。分别克隆到pMD18T载体，转化JM109宿主菌，挑取阳性克隆进行鉴定及序列测定。结果 3株DEN2病毒结构蛋白基因序列长度均为2325bv，编码775个氨基酸。三者核苷酸(氨基酸)的同源性分别是：GD06／93与GD19／2001为96％(97％)、GD06／93与GD08／98为94％(97％)、GD08／98与GD19／2001为92％(94％)。其在相关毒力位点E383～385处均为GLU—PRO-GLY、E126处均为GLU。3株DEN2与国际参考株比较表明：GD06／93与GD19／2001和澳大利亚TSV01株共享序列非常接近，核苷酸(氨基酸)的同源性为98％(98％)；GD08／98与泰国株ThNH-P28／93核苷酸(氨基酸)同源性为98％(98％)。此3株DEN2二级结构与对乳鼠不致病的04株比较，主要差别位于其393～400氨基酸处，本室分离的3株对乳鼠致病毒株为EEEEHHHH，而04株为EEEE----；337～343处本室分离的3株对乳鼠致病毒株为HH-------HHHHH，而04株为--------HHHHE-，恰好位于Dengue病毒E基因的Ⅲ区：结论 GD06／93、GD19／2001与TSV01亲缘关系较近，属同一基因型。GD08／98与ThNH—P28／93共享序列非常接近，属同一基因型。3株DEN2病毒在E蛋白Ⅲ区结构有一定变异，可能与毒力有关。     

广东省部分地区人群血清登革病毒抗体调查

登革热是一种欢媒病毒引起的急性传染病，多发生在热带及亚热带地区，并可以出现党革出血热和登，革休克综合征，严重威胁着人类的生命。我省自80年代以来多次发生较大规模流行，影响了人民的生活。我们对本省曾发生登革热流行的貂关市评石镇、佛山市区、番昌市沙湾镇进行了为期两年的调查，以期了解三地人群血清党革病毒抗体分布及消长伍况，为预防再次发生党革热流行提供参考。1材料与方法1．l被检血清：lop－1997年分别从韶关市坪石镇、佛山市区、番昌市沙湾镇分别收集到“、M4、178份血清标本。1．2检测方法：采用微量间接免疫荧光法（…     

抗鹭山病毒单克隆抗体的研制及应用

本文报告应用淋巴细胞杂交瘤技术，共获得５株能持续、稳定分泌抗鹭山（ＳＡＧ）病毒单克隆抗体的杂交瘤细胞系，间接免疫荧光证实，两株ＭｃＡｂ具有病毒种的特异性，其它３株具有亚组特异性。免疫印迹分析发现，前者仅能识别ＳＡＧ病毒Ｃ蛋白上表位，后者能识别ＳＡＧ病毒的三个结构蛋（Ｅ１、Ｅ２和Ｃ），并与ＧＥＴ、ＭＡＹ及ＲＲ鹭甲病毒的Ｃ蛋白有明显的交叉反应。     

应用重氮乳凝试验直接检测病人血清中登革热病毒抗原的研究

应用重氮胶乳凝集试验，检测登革热病人急性期血清标本５７份，同时与ＰＣＲ及病毒分离方法进行比较，结果显示，三种方法的检出率分别为７７．１９％，８０．７％和５６．１％乳凝和ＰＣＲ方法在病程１～１４ｄ均具有较高的检出率，而病毒分离方法的检出则限一地病程的一周以内，研究中也发现三种检测结果不一致的病例，并对其原因进行了分析。