人反义VEGF基因表达载体的构建及其对卵巢癌细胞增殖的影响

目的：构建人反义VEGF基因真核表达载体,进行抗血管生成治疗卵巢癌实验。方法：RT－PCR法获得人VEGF基因,将VEGF基因反向克隆入真核表达载体pcDNA3中,酶切鉴定结果。用此真核表达载体转染人卵巢癌细胞HO－8910,G418筛选获得阳性克隆,RNA斑点杂交鉴定HO－8910细胞中VEGF表达。Western blot及间接免疫荧光法检测转染前后HO－8910 细胞中VEGF蛋白表达。检测转染前后瘤细胞的生物学性状及裸鼠体内致瘤性。结果：RT－PCR法得到VEGF基因,并获得反向构建的VEGF真核表达载体。VEGF反义RNA部分阻断了HO－8910细胞中VEGF表达,转染后单个细胞的克隆形成能力明显减弱;细胞周期中,G1期细胞增多,S期细胞减少,细胞增殖能力降低;形态学超微结构显示细胞器扩张和肿胀,核染色质边集,凝集成块,可见明显的凋亡改变。裸鼠体内致瘤性降低。结论：成功构建了反义VEGF基因真核表达载体,该载体可明显抑制卵巢癌细胞增殖,为卵巢癌的基因治疗提供了一定的实验依据。     

原发性闭经62例的细胞遗传学研究

<正> 原发性闭经除内分泌失调及生殖器官疾患外,因染色体异常引起者约占病因的30—50%。自1980年10月至1983年11月,我们共对62例原发性闭经患者作了全身性及妇科检查,并按我室常规进行了外周血淋巴细胞培养及G 带染色体检查,其中29例曾予报道,现进一步分析讨论如下。62例中有染色体异常者27例,占43.5%,其中8例为45X;4例为46X,i(Xq);7例为嵌合体(45,X/46,X,i(Xq)2例,45,X/46,XX、45,X/46,XY、45,X/46,X,i(Xq)/46,XX、45,X/46,X,X_(?)/46,XX 及45,X/46,X,X_(?)/     

黄芪、党参提取物对小鼠Matrigel种植体血管生成的影响

目的:研究黄芪、党参提取物对血管生成的影响,为其抗肿瘤应用提供实验依据.方法:采用b-FGF诱导小鼠腹壁Matrigel种植体方法进行血管生成实验,Matrigel 与b-FGF、肝素混合后植入C57BL/6小鼠腹壁正中区域皮下,5 d后取出,分别测量Matrigel种植体中血红蛋白含量和微血管面积,以此反应微血管的生成状况.在Matrigel种植前3d,给予不同剂量的实验药物,连用8 d进行抑制实验.结果:低剂量(≤50%,V/V)黄芪、党参提取物,能促进Matrigel种植体内的血管生成,而高剂量(≥60%,V/V)则表现出抑制现象.这种促进和抑制作用具有一定的剂量-效应关系.结论:不同剂量的黄芪、党参提取物对微血管的生成具有不同的影响,表现出中医药特有的双向调节作用.临床使用时应根据不同的目的,选择不同的药物剂量.     

胰岛素对滋养层细胞凋亡的调节作用及机制

目的 :探讨胰岛素对培养的滋养细胞凋亡的影响及可能的机制。方法 :将培养的妊娠早期滋养层细胞 ,分为正常对照组(细胞 +培养液 )、H2 O2 组 (细胞 +培养液 +H2 O2 )和胰岛素 +H2 O2 组 (细胞 +H2 O2 +胰岛素 )。采用透射电镜观察及流式细胞术 ,观察H2 O2 诱导的细胞凋亡及胰岛素对H2 O2 诱导的细胞凋亡的抑制作用。并检测胰岛素对滋养细胞caspase 3的活性及Bcl 2蛋白表达的影响。结果 :H2 O2 可诱导培养的滋养细胞凋亡 ,透射电镜下可见特征性的细胞核改变。胰岛素可显著抑制H2 O2 诱导的细胞凋亡 ,流式细胞仪检测其凋亡率较H2 O2 组显著下降 (P <0 .0 1)。H2 O2 组滋养细胞中caspase 3的活性较对照组显著增高 (P <0 .0 1) ,而Bcl 2蛋白的表达则较对照组显著下降 (P <0 .0 1)。结论 :胰岛素可明显抑制H2 O2诱导的滋养细胞凋亡 ,其机制可能与降低caspase 3的活性和促进Bcl 2蛋白的表达有关     

临产前后子宫平滑肌细胞内游离钙含量的变化

目的:探讨临产前后子宫平滑肌细胞内游离Ca²⁺含量变化。方法:应用特异性Ca²⁺荧光指示剂Fluo-3AM,对19例未临产和23例临产足月妊娠孕妇,剖宫产子宫下段平滑肌细胞进行负载,结合激光扫描共聚焦显微镜测定子宫平滑肌细胞内游离Ca²⁺分布状态及其浓度变化规律。结果:Ca²⁺在子宫平滑肌细胞胞浆内呈弥漫分布的颗粒状红色荧光物质,在未临产平滑肌细胞中分布和荧光强度均较弱,在临产子宫平滑肌细胞中明显增强。在未临产和临产子宫平滑肌[Ca²⁺]i分别为(35±8.1)nmol/L和(75±7.3)nmol/L,二者静息状态下子宫平滑肌[Ca²⁺]i差异显著(P＜0.05)。结论:分娩前后子宫平滑肌细胞内游离Ca²⁺含量的变化,可能为宫缩发生发展过程复杂的重要事件和分子机制之一。     

聚合酶链反应快速检测加德纳菌的方法和应用

目的 建立聚合酶链反应快速检测加德纳菌方法,用于细菌性阴道病的诊断和治疗。方法 根据加德纳菌基因序列中IIS-23srRNA基因区设计并合成特异性引物,应用聚合酶链反应扩增阴道或宫颈分泌物中的加德纳菌,并与革兰染色和分离培养进行对照检测。结果 经对阴道加德纳菌和5种常见的阴道感染病原体检测,证实所用引物具有较高的特异性;敏感性实验结果10^2可扩增出明显的区带;在50例宫颈分泌物标本中,革兰染色阳性检出率为18%（9/50）、分离培养阳性检出率为16%（8/50）,聚合酶链反应阳性率为28%（14/50）。结论 采用聚合酶链反应检测阴道分泌物中的加德钠菌,用于细菌性阴道病的快速诊断,有可能成为细菌性阴道病实验室诊断的主要检测方法。     

一个遗传四代的相互易位t(8;11),13s~-家系

染色体t(8;11)(p23.1;q21),13S~-易位罕见,迄今国内外尚未见报道,我们对—t(8;11)(p23.1;q21),13S~-,相互易位的家系作了分析,共调查四代45人,包括已故者、流产及新生儿死亡者,对28人作了外周血染色体检查,2例胎儿作了羊水细胞染色体检查。发现t(8;11)平衡易位     

CYP1A1基因多态性在子宫内膜异位症中的表达

目的　探讨CYP1A1基因多态性在子宫内膜异位症中的表达 ,了解其与子宫内膜异位症之间的关系。方法　采用PCR方法对子宫内膜异位症患者基因组DNA进行CYP1A1基因分型。结果　在 17例子宫内膜异位症标本中 ,CYP1A1I/I型频率为 0 .1176 ,CYP1A1V/V型频率为 0 .176 5 ,CYP1A1I/V型频率为 0 .70 5 9,含至少一个Val等位基因 (I/V +V/V )的频率为 0 .882 4 ,是I/I基因频率 (0 .1176 )的 7.5倍。结论　CYP1A1基因多态性中Val基因突变在子宫内膜异位症中占有很高的比例 ,提示该基因突变也许与子宫内膜异位症的发生之间有着密切联系。     

基质金属蛋白酶9和14在子宫内膜异位症中的表达

 目的　明确MMP 9和MMP 14在子宫内膜异位症中的表达。方法　利用原位杂交法检测MMP 9和MMP 14在正常子宫内膜和子宫内膜异位症病灶中的表达情况。结果　 (1)MMP 14在正常内膜中无表达 ,在异位病灶中阳性表达率为 2 0 .0 % (P <0 .0 5 ) ;(2 )MMP 9在正常内膜中仅表达于增殖期内膜 ,阳性表达率为 6 .9% ,在异位病灶中阳性表达率为 4 3.3% (P <0 .0 1)。结论　 (1)在子宫内膜异位病灶中MMP 14表达率低而MMP 9则高表达 ;(2 )MMP 14和MMP 9与内膜异位症的发生有密切关系 ,但二者间无相关性。     

西安市人疱疹病毒6型血清流行病学调查

目的了解西安市区不同人群人疱疹病毒6型(HHV-6)的感染和免疫水平状况。方法采用间接免疫荧光试验方法检测儿童、成人和育龄妇女血清HHV-6IgG抗体。结果6个月～2岁幼儿的HHV-6抗体阳性率和几何平均滴度(GMT)分别为92.9%和1:152,高于其它年龄段的儿童和成人(P<0.05)。116份育龄妇女血清HHV-6抗体阳性率为72.4%,GMT为1:61;在孕妇和正常妇女之间,以及不同孕期的孕妇之间,HHV-6IgG抗体的阳性率和GMT均无差异(P>0.05)。结论HHV-6在不同人群中均有较高的感染率;HHV-6感染多可能发生在婴幼儿期,以水平传播为主;妇女妊娠期间无HHV-6的活化。