肿瘤坏死因子凋亡诱导配体联合顺铂对人横纹肌肉瘤细胞株凋亡的影响

目的探讨肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（TRAIL）蛋白及TRAIL基因和顺铂联合应用对人横纹肌肉瘤细胞生长抑制和诱导凋亡作用，并分析细胞线粒体膜电位和细胞内cFLIPmRNA表达的改变对凋亡的的影响。方法将TRAIL蛋白、TRAIL基因和顺铂作用于培养的人横纹肌肉瘤细胞，通过MTT比色法、流式细胞仪（FCM）检测细胞凋亡和线粒体跨膜电位的改变、RT-PCR检测cFLIPmRNA表达，观察和分析TRAIL蛋白及TRAIL基因单独对横纹肌肉瘤细胞的作用及和顺铂联合作用的效果和机制。结果TRAIL基因和100μg／L的TRAIL蛋白对横纹肌肉瘤细胞的生长抑制率分别为52．5％和43．5％，凋亡诱导率为12．95％和10．26％，联合应用顺铂，生长抑制率和凋亡诱导率均显著高于单独应用，FCM分析显示联合应用降低了线粒体跨膜电位，RT—PCR显示cFLIPmRNA表达下降，与联合应用细胞凋亡率增加相一致。结论TRAIL蛋白和TRAIL基因能有效诱导横纹肌肉瘤细胞的凋亡从而抑制横纹肌肉瘤细胞的生长，联合应用顺铂可显著提高疗效。     

对24例医疗事故案例技术鉴定的分析报告

2002年9月1日～2004年12月31日，日照市医学会共受理医疗事故技术鉴定委托30例，完成鉴定24例，协助调解3例，中止鉴定3例。其中有9例申请山东省医学会进行了再次鉴定。完成鉴定的24例中，医、患双方共同委托医疗事故技术鉴定的10例；经医方申请，卫生行政部门移交鉴定的2例；经患方申请，卫生行政部门移交鉴定的11例；法院委托鉴定的1例。申请中涉案两家医疗机构的鉴定有3例，涉及医疗机构分布情况是：     

先天性肾盂输尿管连接部狭窄患儿平滑肌细胞凋亡及Bcl-xl,Bad表达检测

目的:检测先天性肾盂输尿管连接部狭窄患儿平滑肌细胞凋亡及Bcl-xl,Bad的表达.方法:采用免疫组化SABC法检测30例先天性肾盂输尿管连接部狭窄患儿肾盂输尿管连接部狭窄段(观察组)与其周围相应正常输尿管(对照组)平滑肌中凋亡调控基因Bcl-xl,Bad的表达;用末端脱氧核苷酸转移酶(TdT)介导的d-UTP生物素缺口末端标记技术(TUNn)检测2组平滑肌凋亡细胞.结果:观察组平滑肌细胞中Bad表达率高于对照组((15.54±3.18)%vs(11.00±2.07)%,P＜0.05),Bcl-xl在2组平滑肌细胞中均不表达;观察组平滑肌细胞凋亡指数高于对照组((21.60±3.12)%vs(10.20±2.18)%,P＜0.05).结论:先天性肾盂输尿管连接部狭窄平滑肌细胞减少与其细胞凋亡及Bad表达升高有关,与Bcl-xl表达无关.     

实验性隐睾大鼠生殖细胞凋亡及Bcl-xl、Bad蛋白表达检测

目的:检测实验性隐睾大鼠生殖细胞凋亡及Bcl-xl、Bad蛋白表达的变化.方法:50只成年健康SD雄性大鼠随机分成隐睾组(n=23)和对照组(n=27).建立单侧隐睾动物模型,术后3 d,7 d,10 d取材隐睾侧睾丸,对照组同侧取材.采用原位缺口末端标记法(TUNEL)检测生殖细胞凋亡,免疫组化法检测Bcl-xl,Bad蛋白表达.结果:凋亡细胞主要是初级精母细胞和圆形精子细胞.隐睾组生殖细胞凋亡指数术后3 d组((5.54±1.93)%)、7 d组((7.33±1.61)%)、10 d组((9.48±2.96)%)均明显高于对照组((2.26±0.92)%,P＜0.01);隐睾组Bcl-xl蛋白表达术后3 d组((67.30±6.11)%)、7 d组((54.00±8.75)%)、10 d组((35.85±6.55)%)均低于对照组((76.00±6.83)%,P＜0.01);Bad蛋白表达术后7 d组((46.22±9.30)%)、10 d组((41.30±5.81)%)均高于对照组((13.88±3.58)%,P＜0.01).结论:实验性隐睾大鼠生殖细胞凋亡增多,可能与Bcl-xl蛋白表达降低、Bad蛋白表达升高相关.     

颈椎手术中纤维支气管镜引导气管内插管37例应用体会

颈椎病变患者多有颈椎稳定性差、头颈活动受限或脊髓不同程度受压等特点。麻醉方法多采用经口或经鼻盲探气管插管全身麻醉，但传统的插管操作均有可能导致脊髓的进一步损伤。作者2007年以来对37例颈椎手术患者采用经纤维支气管镜（fiberopticbronchoscope，FOB）引导气管内插管麻醉，取得满意效果，现报道如下。     

小儿肾积水肾盂成形术后尿理化性质和尿水通道蛋白2改变的研究

目的 探讨小儿单侧先天性肾盂输尿管连接处梗阻(pyeloureteric junction obstruction,PUJO)肾积水术后1周内尿理化性质和尿水通道蛋白2(aquaporins-2.AQP2)的变化.方法 选取14例符合Grignon法四、五级标准的小儿单侧先天性PUJO.肾积水患儿;经肾盂成形术后给予严格设定的补液标准,收集术后第一、三、五、七天积水侧肾脏和对侧无积水肾脏24 h尿液,分别测定排尿量、渗透压、Na+和肌酐,并用酶联免疫吸附法(ELISA)测定尿液中AQP2水平.结果 相对于对侧无积水肾脏,积水侧肾脏梗阻解除术后1周内尿液AQP2显著降低.尿量明显增多.尿渗透压显著降低,Na+排泄分数显著增加;同时术后1周内双侧肾脏尿液AQP2、排尿量和尿渗透压有升高趋势,而积水侧肾脏Na+排泄分数有减少的趋势;积水侧.肾脏术后第五、七天的尿液AQP2.排尿量和尿渗透压较第一天均显著增加(P<0.05).对侧无积水肾脏术后第五、七天的尿液AQP2和尿渗透压较第一天也显著增加(P<0.05).其余指标在术后小同天数之间差异无统计学意义(P>0.05).结论小儿单侧先天性PUJO解除术后1周内积水侧.肾脏的尿液AQP2和尿渗透压均较对侧尤积水肾脏尿液显著减少.提示梗阻解除后尿液中AQP2可能和尿液浓缩能力改变有关.     

基于人工神经网络的血清蛋白质指纹图谱模型在先天性巨结肠患儿诊断中的应用

目的建立蛋白质芯片技术检测血清蛋白质指纹图谱的方法，探讨基于人工神经网络（ANN）的血清蛋白质指纹图谱模型在先天性巨结肠（HD）患儿诊断中的应用价值。方法应用蛋白质指纹图谱分析仪测定HD患儿64例、巨结肠类缘病患儿25例和健康儿童23例血清标本的蛋白质指纹图谱，并结合ANN方法进行数据分析。112例标本随机分成训练组66例（HD40例，巨结肠类缘病14例，健康儿童12例）和盲法测试组46例（HD24例，巨结肠类缘病11例，健康儿童11例）。利用从训练组得出的基于ANN的血清蛋白质指纹图谱模型，对46例未知血清进行检测，并与X线影像学检查结果进行比较。结果筛选出质荷比（m／z）位于7211．6和2864．8的蛋白质标志物2个。在HD组表达强度分别为6．15&#177;2．21和2．78&#177;1．21，巨结肠类缘病组表达强度分别为12．82&#177;7．56和4．86&#177;0．91（Pa〈0．01）。筛选出m／z位于6884．2和5639．2的蛋白质标志物2个。HD组表达强度分别为4．09&#177;1．78和15．57&#177;8．87，健康对照组表达强度分别为8．31&#177;3．07和30．31&#177;6．18（P〈0．01）。应用该方法对HD患儿进行诊断的准确率、敏感度和特异度分别为89．13％（41／46例）、87．50％（21／24例）和90．91％（20／22例），明显高于x线影像学检查68．8％（77／112例）、82．8％（53／64例）和50．0％（24／48例）。结论在HD患儿的诊断中，利用从训练组得出的基于ANN的血清蛋白质指纹图谱模型较传统方法有更高的敏感性和特异性。     

基于支持向量机神经母细胞瘤血清蛋白质标记物的检测及临床应用

目的 寻找神经母细胞瘤特异血清蛋白标记物,构建初步诊断模型,并探讨其临床应用价值.方法 收集47例神经母细胞瘤患儿血清标本,30例其它恶性实体肿瘤患儿血清标本以及健康儿童血清标本10例;用ZUCI-Protein Chip Data Analyze System分析软件进行数据处理;经留一法交叉验证,分类器评价模型的预测效果.结果 构建3个模型并筛选出10个蛋白标记物,能够成功区分神经母细胞瘤和健康儿童蛋白质谱的差异,表达模型的敏感性为100%,特异性为100%,区分神经母细胞瘤术前和术后蛋白质潜差异表达模型的敏感性为100%,特异性为100%,区分神经母细胞瘤与其它小儿恶性实体肿瘤血清蛋白质指纹图谱模型的敏感性为88.89%.特异性为100%.结论 用SELDI-TOF-MS及生物信息学技术并结合支持向量机(SVM)初步建立的模型可作为神经母细胞瘤的另一种特异性强、敏感性高的辅助检查手段.     

肾母细胞瘤血清蛋白质标记物检测与分期模型构建研究

目的筛选出肾母细胞瘤患儿特异性血清蛋白质标记物，建立肾母细胞瘤临床分期模型与CT分期进行对照分析，并评价其临床应用价值。方法应用SELDI-TOF-MS技术检测80例血清标本（术前肾母细胞瘤30例，其他恶性肿瘤30例，正常儿童20例），用ZUCI-Protein Chip Data Analyze System分析软件进行数据处理，结合支持向量机（support vector machine，SVM）建立肾母细胞瘤临床分期模型。结果筛选出2个m／z位于4153．9和3257．6的蛋白质标记物，区分肾母细胞瘤Ⅲ和Ⅳ期与肾母细胞瘤Ⅰ和Ⅱ期蛋白质谱差异表达模型的敏感性为100％，特异性为93。8％；区分肾母细胞瘤与正常儿童、腹腔实体肿瘤及肾脏其他恶性肿瘤的特异性是100％，敏感性是100％、80．0％、100％；临床分期模型可以特异性地将各期区分开来，其特异性及敏感性均为100％；通过肾母细胞瘤早期诊断模型中的2个m／z（6984．4，6455．5）血清标记物进行分析得出肾母细胞瘤各期情况如下：Ⅳ期相对于Ⅲ期低表达；Ⅲ期相对于Ⅱ期低表达；Ⅱ期相对于Ⅰ期低表达；Ⅰ期相对于正常儿童低表达；后者相对高表达；临床分期越晚，m／z强度就越低表达。蛋白芯片分期准确性与病理一致，达到100％，在分期定性问题上优于CT（Ⅰ期100％，Ⅱ期85．0％，Ⅲ期85．0％，Ⅳ期75．0％）。结论用SELDI-TOF-MS结合SVM建立的肾母细胞瘤临床分期模型可弥补CT在肾母细胞瘤分期定性问题匕的不足。     

先天性巨结肠血清蛋白质标记物检测

目的检测先天性巨结肠患儿血清蛋白质,筛选特异的蛋白质标记物,构建用于先天性巨结肠早期筛选及诊断的血清蛋白质指纹图谱模型。方法应用表面增强激光解吸离子化飞行时间质谱(surface enbanced laser desorption/inionation-time of flight-mass spectra,SELDI-TOF-MS)技术检测62例血清标本(先天性巨结肠42例,正常对照20例)的蛋白质质谱,并结合生物信息学方法(支持向量机)分析数据。结果筛选出3个m/z位于3221.7、5639.2、6884.2的蛋白质标记物,构建先天性巨结肠早期筛选及诊断模型。经留一法交叉验证,区分先天性巨结肠和正常小儿的血清蛋白质指纹图谱模型的特异性为100%,敏感性为100%。结论SELDI-TOF-MS结合SVM建立先天性巨结肠血清蛋白质指纹图谱模型是早期筛选及诊断先天性巨结肠的一种特异性强、敏感性高的新方法,值得进一步研究和应用。