体外诱导K562细胞尼洛替尼耐药及其机制的初步探讨

目的 体外建立对尼洛替尼(nilotinib)耐药的白血病细胞株,并初步探讨其耐药机制.方法 以尼洛替尼浓度递增的方法诱导人白血病细胞系K562细胞对其产生耐药株,命名为K562-RN,MTT法确定其耐药倍数.流式细胞术检测细胞凋亡.采用荧光原位杂交(FISH)法检测K562-RN细胞中bcr-abl融合基因表达.实时荧光定量PCR (RQ-PCR)和Western blot法检测bcr-abl、HO-1、mdr1、Bcl-2和caspase-3 mRNA和相关蛋白在耐药和敏感细胞中的表达.结果 成功建立了针对尼洛替尼耐药的人白血病细胞株K562-RN.尼洛替尼对K562、K562-RN细胞的半数抑制浓度(IC50值)分别为(12.320±1.720) μmol/L和(24.742 ±2.310)μmol/L,K562-RN细胞相对于K562细胞的耐药倍数为2.01倍,且对阿霉素、高三尖杉酯碱、鬼臼乙叉甙和伊马替尼具有不同程度的交叉耐药性.在不同浓度尼洛替尼诱导下,K562-RN细胞凋亡率均较K562细胞明显下降.FISH法分析结果显示K562-RN细胞中bcr-abl融合基因阳性率为92％.K562-RN细胞中bcr-abl、HO-1 mRNA及其相应蛋白高表达,而促凋亡基因caspase-3 mRNA及蛋白呈低表达,与K562细胞相比表达水平差异有统计学意义(P＜0.05),多药耐药基因mdr1及其编码蛋白P-gp在K562-RN细胞中呈高表达.结论 通过药物浓度递增法成功建立了对尼洛替尼耐药的人白血病细胞株K562-RN,初步探讨了其耐药机制可能与bcr-abl、HO-1及mdr1高表达,同时下调caspase-3 mRNA及其蛋白的表达有关.     

吗啡依赖大鼠皮质内BDNF和即早基因c-fos的表达

目的 建立大鼠条件性位置偏爱(CPP)模型,探讨脑源性神经营养因子(BDNF)和即早基因c-fos在大鼠吗啡精神依赖中所起的作用.方法 大鼠连续6d腹腔注射吗啡mg/kg·d-1,诱导吗啡CPP形成.免疫组化法测定大鼠皮质内BDNF和C-fos的表达.结果 经6d吗啡训练后,吗啡组在伴药侧的停留时间较对照组显著增加(P...     

环境激发吗啡条件性位置偏爱重现大鼠海马内脑源性神经营养因子及c-fos的表达

目的:观察吗啡条件性位置偏爱(CPP)重现大鼠海马内脑源性神经营养因子(BDNF)及即早基因c-fos的表达.探讨BDNF和c-fos对吗啡成瘾记忆的影响.方法:雄性SD大鼠36只,随机分为吗啡CPP激发组(MR组)、吗啡CPP消退组(ME组)及生理盐水对照组(NS组),每组12只.实验1～7天,MR组、ME组采用CPP实验,建立大鼠码啡精神依赖动物模型,实验第8天进行训红后CPP测试,给予7d消退期,实验第16天进行消退后测试,实验第17天对MR组大鼠进行环境激发,第18天进行激发后CPP测试.记录CPP实验过程中15min内伴药箱停留时间;激发后CPP测试完毕后,应用免疫组化方法测定大鼠海马内BDNF和c-foc的表达.结果:3组不同时间点大鼠伴药箱停留时间差异有统计学意义(F时间=5076,P=0.007;F组别=4.07,P=0.028).MR组大鼠海马中BDNF、c-fos的阳性细胞数及平均光密度均高于NS组和ME组(P均<0.01).结论:BDNF、c-fos可能通过成瘾记忆的形成,参与环境激发的大鼠吗啡CPP重现.     

自体造血干细胞移植治疗鼻腔NK/T细胞淋巴瘤并皮肤浸润1例

1 临床资料 患者,男性,17岁,因右鼻腔阻塞不适7个月,高热3个月于2006年11月20日入院.7个月前无明显诱因鼻塞不适,以右侧为著, CT示右鼻腔软组织影,未做治疗.     

胆碱酯酶检测的临床研究进展

胆碱酯酶(cholinesterase,ChE)又称为酰基胆碱水解酶,以多种同工酶形式存在于体内,按照酶水解底物的专一性、水解速度的差异、对抑制剂敏感性以及组织分布特点,将体内ChE分为两种:一种为乙酰胆碱酯酶(AChE,也称真胆碱酯酶),人AChE是膜结合蛋白质,以多种分子形式存在,主要分布于神经组织,如脑白质和灰质、神经节内的神经细胞和神经肌肉接头,还分布于红细胞和血清等非神经组织中.     

间充质干细胞介导"酶-前药基因"CYP1A2靶向抗肿瘤效应研究

目的 将人细胞色素P450 1A2(CYP1A2)基因转染骨髓间充质干细胞(BMSC),检测转基因BMSC协同化疗前药达卡巴嗪(DTIC)对人恶性淋巴瘤细胞株Raji细胞的靶向促凋亡作用,为以间充质干细胞为载体的"基因介导的酶-前药双靶向抗肿瘤策略"提供体外实验依据.方法 从人肝细胞中克隆CYP1A2基因,构建真核表达载体,分离、鉴定并培养BMSC,脂质体法将CYP1A2基因导入BMSC和Raji细胞中,RT-PCR和Westem blot法检测CYP1A2基因的表达,Transwell法检测BMSC的肿瘤靶向性,MTT法检测转基因Raji细胞对DTIC敏感性的改变,Annexin V/PI染色标记法检测转基因BMSC联合DTIC诱导Raji细胞凋亡的作用.结果 成功克隆CYP1A2基因并将构建的真核表达载体转染BMSC和Raji细胞,流式细胞术检测体外诱导分化结果符合BMSC特性,RT-PCR和Westernblot检测到转基因细胞中CYP1A2表达,Transwell迁移实验证实BMSC有肿瘤趋向性,MTT法检测显示DTIC呈剂量依赖性抑制转CYP1A2基因的Raji细胞生长,而转CYP1A2基因的BMSC细胞对DTIC相对耐受(IC50值分别为1.67 mmol/L和7.53 mmol/L,P＜0.01).Armexin V/PI染色法显示CYP1A2能够使细胞在体外代谢DTIC,产生细胞毒效应使肿瘤细胞凋亡,而且具有旁观者效应.结论 CYP1A2可使细胞在体外代谢DTIC产生细胞毒效应.以BMSC为载体的CYP1A2-DTIC酶-前药系统可发挥双靶向抗肿瘤作用,在体外诱导人恶性淋巴瘤细胞凋亡.     

自体外周血造血干细胞移植联合硼替佐米及大剂量美法仑治疗多发性骨髓瘤3例

背景:自体外周血造血干细胞移植联合大剂量化疗能明显提高多发性骨髓瘤患者完全缓解率和生存率,但复发率较高.硼替佐米是26S蛋白酶体抑制剂,对初治多发性骨髓瘤具有显著疗效.目的:评价自体外周血造血干细胞移植联合硼替佐米及大剂量美法仑对多发性骨髓瘤患者的疗效.方法:回顾性分析2006-10/2007-05贵阳医学院附属医院血液科收治的3例多发性骨髓瘤患者,均采用化疗加粒细胞集落刺激因子方案进行自体外周血造血干细胞的动员.于移植前3 d静脉滴注美法仑200mg/m~2作为预处理方案,停药48 h后回输白体外周血造血干细胞.结果与结论:3例患者均获造血重建,细胞移植后30 d骨髓抑制恢复正常,骨痛改善.细胞移植后,第1,2例患者获得完全缓解,第3例患者获得部分缓解.提示自体外周血造血干细胞移植联合硼替佐米及大剂量美法仑是治疗多发性骨髓的有效手段,患者对预处理方案耐受性较好.     

异基因造血干细胞移植后植入功能不良的危险因素分析

目的 探讨异基因造血干细胞移植(allo-HSCT)后植入功能不良(PGF)的危险因素。方法 对2014年1月至2021年12月贵州医科大学附属医院333例行allo-HSCT的患者进行回顾性分析,将患者分为PGF组(n=32)和植入功能良好(GGF)组(n=301),通过单因素分析和logistic回归分析确定PGF可能的影响因素,并采用Kaplan-Meier生存分析对比两组患者的生存差异。结果 原发疾病为急性髓系白血病(AML)、急性淋巴细胞白血病(ALL)、骨髓增生异常综合征(MDS)、重型再生障碍性贫血(SAA)及其他的患者PGF发生率分别为6.94%、3.96%、14.28%、26.23%、0,差异有统计学意义(χ²=26.021,P<0.001),SAA患者PGF发生率最高。单因素logistic回归分析表明SAA患者与AML、ALL、MDS及其他患者相比,移植后更易发生PGF(OR=1.514,95%CI:1.158～1.980,P=0.002)。多因素logistic回归分析结果表明,单倍体相合移植(OR=2.585,95%CI:1.163...     

抗肿瘤药物诱导NK/T细胞淋巴瘤细胞株凋亡的研究

目的 探讨不同化疗方案对NK/T细胞淋巴瘤细胞株(SNK6)的抑制率,并对其可能的相关机制进行研究.方法 应用四甲基偶氮唑盐(MTT)法、流式细胞仪检测、琼脂糖凝胶电泳检测等方法,研究不同化疗药物对SNK6细胞的诱导凋亡作用;蛋白印迹法检测自噬蛋白Beclin-1、LC3Ⅱ表达,流式细胞仪检测细胞凋亡情况.结果 作用肿瘤细胞48 h的各药物的抑制率与24 h所得的抑制率相比,差异有统计学意义(P＜0.05);作用72 h的各药物抑制率与作用48 h相比,差异无统计学意义(P＞0.05).4组化疗方案抑制率由高到低为:长春瑞滨+表柔比星、多西他赛+表柔比星、多西他赛+多柔比星、长春瑞滨+多柔比星;从实验组细胞中提取的DNA经电泳,紫外灯下可见“梯状带”.进行蛋白印迹法及流式细胞仪检测,抗肿瘤药物联合自噬抑制剂使自噬蛋白下调,细胞凋亡与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05).结论 长春瑞滨联合表柔比星诱导SNK6细胞凋亡作用最佳,3-MA抑制SNK6细胞对化疗药物保护性自噬反应,增加SNK6细胞对抗肿瘤药物细胞毒杀伤作用的敏感性.     

应用形态学,核型,免疫学和分子生物学方法联合检测急性髓细胞性白血 …

对２０例急性髓细胞性白血病（ＡＬＭ）Ｍ２ｂ亚型进行了形态学，免疫学，细胞遗传学和分子生物学方法（ＭＩＣＭ）的联合检测，结果显示，形态学分型确诊率为９０％（１８／２０），免疫学分析示８０％（１６／２０）有髓系抗原表达，具有其典型征者４０％（８／２０），染色体异常ｔ（８；２１）检出率为９５％（１９／２０），采用ＲＴ－ＰＣＲ技术检测全部病例均显示ＡＭＬ１－ＥＴＯ融合基因阳性，提示ＭＩＣＭ联合诊断中，融合