烷化剂耐药基因真核表达质粒的构建及在K562细胞中的表达

目的克隆烷化剂耐药基因MGMT，构建真核表达质粒并导入真核细胞进行表达，筛选稳定表达的细胞系。方法从人肝组织中克隆MGMT基因后重组构建真核表达粒质pIRES2-MGMT—EGFP并鉴定。通过脂质体法将目的基因导入K562细胞，应用RT—PCR及Western blot检测目的基因的表达并筛选稳定转染的细胞克隆。结果成功克隆MGMT并构建了真核表达质粒pIRES2-MGMT—EGFP。转染细胞后MGMT在mRNA及蛋白水平均有表达，而对照组则为阴性。结论含烷化剂耐药基因MGMT真核表达质粒的构建及转染后表达的成功为烷化剂耐药基因的相关研究奠定了良好的基础。     

DNA修复蛋白MGMT基因的克隆及转导脐血CD23^＋细胞后耐药特征的研究

目的：增强脐血ＣＤ３４＾＋造血细胞对化疗药物的耐药表型,探讨逆转录病毒介导的基因转移效率和耐药基因特性,以及在脐血造血干细胞保护性基因治疗中的作用和意义。方法：应用逆转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）从人肝细胞中获得编码六氧甲基鸟嘌呤－ＤＮＡ－甲基转移酶（Ｏ＾６－ｍｅｔｈｙｌｇｕａｎｉｎｅ－ＤＮＡ－ｍｅｔｈｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ,ＭＧＭＴ）ｃＤＮＡ;利用基因重组技术,将其克隆于ｐＧＥＭ－Ｔ质粒载体并构建了逆转录病毒载体Ｇ１Ｎａ－ＭＧＭＴ;应用脂质体ＬｉｐｏｆｅｃｔＡＭＩＮＥ基因转移法将后者导入ＧＰ＋Ｅ８６和ＰＡ３１７病毒包装细胞,以卡氮芥１,３－Ｂｉｓ（２－Ｃｈｌｏｒｏｅｔｈｙｌ）－１－Ｎｉｔｒｏｓｏｕｒｅａ（ＢＣＮＵ）加压筛选后的阳性克隆上清经乒乓效应后继而感染脐血ＣＤ３４＾＋细胞。应用ＰＣＲ,Ｓｏｕｔｈ     

自体外周血造血干细胞移植联合硼替佐米及大剂量美法仑治疗多发性骨髓瘤3例☆

背景：自体外周血造血干细胞移植联合大剂量化疗能明显提高多发性骨髓瘤患者完全缓解率和生存率,但复发率较高。硼替佐米是26S蛋白酶体抑制剂,对初治多发性骨髓瘤具有显著疗效。 目的：评价自体外周血造血干细胞移植联合硼替佐米及大剂量美法仑对多发性骨髓瘤患者的疗效。 方法：回顾性分析2006-10/2007-05贵阳医学院附属医院血液科收治的3例多发性骨髓瘤患者,均采用化疗加粒细胞集落刺激因子方案进行自体外周血造血干细胞的动员。于移植前3 d静脉滴注美法仑200 mg/m2作为预处理方案,停药48 h后回输自体外周血造血干细胞。 结果与结论：3例患者均获造血重建,细胞移植后30 d骨髓抑制恢复正常,骨痛改善。细胞移植后,第1,2例患者获得完全缓解,第3例患者获得部分缓解。提示自体外周血造血干细胞移植联合硼替佐米及大剂量美法仑是治疗多发性骨髓的有效手段,患者对预处理方案耐受性较好。     

特发性骨髓纤维化患者JAK2V617F突变研究

为了探讨特发性骨髓纤维化（IMF）JAK2V617F点突变发生率及其临床意义,运用等位基因特异性聚合酶链式反应（AS-PCR）检测12例IMF患者的JAK2V617F点突变,并探讨JAK2V617F变化与临床、血液学特征的相关性。结果显示：随访期2-15个月,12例患者JAK2V617F点突变检测阳性率为50%,而半数患有血栓史,其血小板数目及骨髓巨核细胞数目相对增多。另6例JAK2V617F点突变阴性患者仅1例有血栓史,血小板数目及骨髓巨核细胞数目相对较低。结论：JAK2V617F点突变阳性IMF患者多数具有典型的临床表现及血液学特点,其血小板数目及骨髓巨核细胞数目相对增多。     

紫杉醇mPEG-PLGA纳米粒的制备及其抗肿瘤作用研究

 目的探讨负载紫杉醇的聚乙二醇单甲醚-聚乳酸-乙醇酸(mPEG-PLGA)亲性嵌段共聚物纳米粒及其对肝癌H22细胞的体内抗肿瘤作用。方法采用界面沉积法制备紫杉醇mPEG-PLGA纳米粒(Ptx-Nps);应用透射电镜表征纳米粒的形态;粒径分析仪测其粒径及Zeta电位;研究mPEG在共聚物中的含量及紫杉醇投药量对纳米粒的影响;考察纳米粒对昆明小鼠肝癌H22的疗效和过敏实验。结果Ptx-Nps成球型,粒径为纳米级(<120 nm),均带负电荷(适合于静脉注射),与紫杉醇注射液(Ptx)相比,Ptx-Nps对肝癌H22的抑制作用比Ptx好。结论采用界面沉积法制备的纳米粒在紫杉醇投药量为1%,mPEG含量为4%时包封率最佳,本研究为开发紫杉醇新型静脉注射制剂提供了实验依据,mPEG-PLGA共聚物可成为抗肿瘤药物的理想新型载体。     

紫杉醇嵌段共聚物纳米粒的制备及体外实验研究

目的：制备紫杉醇嵌段共聚物纳米制剂，研究其理化性质和体外抗癌活性。方法：采用界面沉积法制备了负载紫杉醇的聚乙二醇单甲醚-乳酸羟基醋酸共聚物（mPEG-PLGA）嵌段共聚物纳米粒，运用粒径分析仪测其粒径及Zeta电位，透射电镜表征纳米粒的形态，研究了投药量及mPEG在共聚物中的不同含量对纳米粒的影响，考察所制纳米粒对癌细胞的作用。结果：所制纳米粒为球形．粒径为纳米级，与临床用的紫杉醇注射液相比，癌细胞的存活率明显降低，且对癌细胞作用时间越长，细胞毒性作用越明显。结论：该试验可为开发紫杉醇新型静脉注射制剂提供了实验依据。     

Caspase-3在凋亡中的作用及在恶性血液病中的研究进展

Caspase-3是哺乳动物细胞凋亡中的关键蛋白酶,经常被活化,并能催化许多重要的细胞蛋白分解。Caspase-3是正常脑发育所必需的,也是形成某些凋亡典型标志所必需的,如细胞凋亡时形成核浓缩、核断裂等都需要caspase-3。本文主要综述caspase-3在细胞凋亡过程中出现的特征性的细胞形态和生化变化中所起的作用,以及caspase-3在恶性血液病中的研究进展。     

丹参酮ⅡA通过诱导C/EBPβ表达促进人源NB4和MR2细胞系分化

目的探索在丹参酮ⅡA(TanⅡA)诱导NB4和MR2细胞分化过程中C/EBPβ(CAAT/enhancer-bindingproteinβ)的表达。方法用TanⅡA干预NB4和MR2细胞120 h,通过形态学和膜表面标志检测NB4和MR2细胞的分化情况明确TanⅡA对NB4和MR2细胞的分化效应;0,0.1,1和10 mg/L TanⅡA干预NB4和MR2细胞,通过RT-PCR及Western blot测定C/EBPβRNA和蛋白水平表达的变化确定C/EBPβ与TanⅡA浓度的关系;通过膜表面标志检测NB4和MR2细胞的分化情况明确TanⅡA浓度与NB4和MR2细胞分化间的关系。结果 TanⅡA能诱导NB4和MR2细胞分化(P<0.05);TanⅡA能从RNA和蛋白水平诱导C/EBPβ表达升高并与浓度成正相关(P<0.05);TanⅡA能通过非剂量依赖的模式诱导NB4和MR2细胞分化,其引起最大分化效果的浓度为1 mg/L。结论 TanⅡA能有效促进NB4和MR2细胞分化;TanⅡA通过上调C/EBPβ的表达发挥分化效应;TanⅡA最强作用浓度为1 mg/L。     

多发性骨髓瘤并发结核性脑膜炎的诊治分析

目的 分析多发性骨髓瘤(MM)并发结核性脑膜炎(TBM)的危险因素,提高对结核分歧杆菌(TB)感染的重视.方法 通过分析该科1例MM患者并发TBM的诊治过程,对可能引发TBM的药物、治疗方案进行分析,并结合国内外相关文献进行复习.结果 MM患者血清中存在单克隆免疫球蛋白,发病之初免疫功能就存在缺陷,治疗药物如地塞米松、环磷酰胺均有免疫抑制作用.结论 在对MM患者的诊治中应重视TB感染的预防,并对可疑的TB感染患者提高警惕,加强防控意识.