抗甲型流感病毒血凝素通用抗体的制备及鉴定

目的 建立针对甲型流感病毒血凝素的通用抗体.方法 通过对流感病毒数据库中血凝素基因的分析,寻找保守的序列并合成多肽.将多肽耦联在载体匙孔血监蛋白(KLH)上,多次皮下免疫家兔,制备高效价抗体.结果 序列分析发现血凝素第二亚单位(HA2)上氨基端14个氨基酸极端保守,耦联多肽经4次免疫后效价达到1:80000,以免疫印迹方法证明此通用抗体能与流感病毒H1～H13亚型的血凝素蛋白特异反应.结论 通过寻找保守蛋白并耦联在合适载体上,免疫家兔获得了针对甲型流感病毒血凝素抗原的通用抗体.     

重组人碱性成纤维细胞生长因子对大,小鼠胃溃疡的影响

目的：研究重组人碱性成纤维细胞生长因子（ｒｈｂＦＧＦ）对实验性溃疡病的治疗作用。方法：采用大鼠和小鼠溃疡病模型,用图象分析仪进行形态计量,用显微镜观察病组织学变化,用二苯胺法测ＤＮＡ含量,用地支测ＲＮＡ含量。结果：对大鼠醋酸性溃疡,ｒｈ－ｂＦＧＦ２．５－４０ｋＵ．ｋｇ＾－１ｉｇｂｉｄ缩小溃汤指数;最佳剂量为１０ｋＵ．ｋｇ＾－１;量－效曲线呈钟型。ｒｈ－ｂＦＧＦ例溃疡边缘再生腺上皮宽度、肉芽组织内毛     

阿托伐他汀减少冠脉介入治疗引起心肌损伤的研究

目的研究他汀类药物能否减少冠脉介入治疗(PCI)带来的心肌坏死。方法在PCI术前7 d随机给予阿托伐他汀40 mg/d或者安慰剂口服,在术前和术后8 h、24 h检测CK-MB、肌钙蛋白Ⅰ型和肌红蛋白。结果PCI术后心肌损伤的标记物升高,在阿托伐他汀组升高的人数明显低于安慰剂组,PCI术后酶学峰值升高在阿托伐他汀组比安慰剂组减低。结论在PCI术前7 d给予阿托伐他汀40 mg/d能明显减少心肌损伤。     

rhTNF-α生物活性测定方法的改进及其对人白血病早幼粒细胞HL-60作用机理研究

目的:通过对rhTNF-α生物活性方法的改进,建立了较规范的活性测定方法,避免了人为判定的误差,提高了测定精确性.方法:本研究应用L929鼠结缔组织来源纤维母细胞系,参照国际标准品测定rhTNF-α效价.分别用Northern Dot Blot杂交检测及DNA电泳等方法,观察不同效价rhTNF-α对HL-60人白血病早幼粒细胞生长的影响.结果:rhTNF-α对HL-60细胞的生长抑制作用与时间、剂量正相关,核酸水平检测初步发现c-myc基因表达量降低,且rhTNF-α对DNA有损伤作用.结论:rhT-NF-α的测定可用自动分析的方法进行.rhTNF-α抑制HL-60细胞生长,其机理不同于阿霉素.     

重组人碱性成纤维细胞生长因子对大、小鼠胃溃疡的影响

目的:研究重组人碱性成纤维细胞生长因子(rh-bFGF)对实验性溃疡病的治疗作用。方法:采用大鼠和小鼠溃疡病模型,用图象分析仪进行形态计量,用显微镜观察病理组织学变化,用二苯胺法测DNA含量,用地衣酚法测RNA含量。结果:对大鼠醋酸性溃疡,rh-bFGF 2.5-40kU·kg~(-1)igbid缩小溃疡指数;最佳剂量为10kU·kg~(-1);量-效曲线呈钟型。rh-bFGF使溃疡边缘再生腺上皮宽度、肉芽组织内毛细血管密度及瘢痕组织内胶原含量提高;并促进再生腺体成熟与溃疡边缘组织RNA合成。对急性溃疡模型,rh-bFGF 5,10kU·kg~(-1)仅对大鼠幽门结扎型有效,但不影响胃液酸度及胃蛋白酶活性。结论:rh-bFGF ig或sc加速大鼠慢性胃溃疡愈合,并提高愈合质量。     

肠道病毒71型北京分离株全基因组序列分析

目的 了解2008年北京地区肠道病毒71型(EV71)分离株的全基因序列特点.方法 收集北京地区手足口病患儿的咽拭子样本12份,对其中1份样品08YM-3,经Vero细胞分离培养,提取病毒RNA.利用RT-PCR和5'、3'RACE扩增EV71全长基因.对PCR产物克隆和测序.利用DNAStar软件包的MegAlign进行核苷酸序列分析,构建系统进化树.结果 分离的EV71病毒株经过扩增后克隆得到3个涵盖EV71全基因组的阳性质粒,测序后拼接为EV71全基因组,命名为BJ08株.BJ08的5'非编码区(UTR)、P1、P2、P3、3'非编码区(UTR)和全基因组的核苷酸与C4亚型的参考序列同源性均最高,分别为95.6%～96.7%、88.3%～96.1%、78.1%～94.0%、90.8%～94.6%、85.9%～94.1%和90.9%～93.9%.BJ08株与其他亚型各区段的核酸同源性均低于90%.在全基因序列与VP1区构建的系统进化树中,BJ08株均与C4亚型在同一分支.BJ08株与C4亚型参考株VP1区的6个亚型相关氨基酸序列一致,VP1抗原性表位(92～107aa)无变异.结论 北京BJ08 EV71病毒分离株为C4业型.     

鬼臼酰肼哌啶腙氮氧自由基和鬼臼乙叉甙对体外培养癌细胞增殖、有丝分裂指数和DNA合成的影响

鬼臼酰肼哌啶腙氮氧自由基(GP_1)和鬼臼乙叉甙(VP_(16))对L_(7712)细胞的增殖有明显的抑制作用,且有时间依赖性。在0.04～20mg/L范围,GP_1增加有丝分裂指数(MI)的作用与VP_(16)降低MI的作用均和剂量相关。5mg/LGP_1处理细胞12h时MI达峰值,为对照的8倍;而VP_(16)组的MI仅为对照的1/3。VP_(16)可对抗GP_1增高MI的作用。用GP_1或VP_(16)24h时细胞死亡、崩解增多。两药对S_(180),AH,L_(1210)和L_(7712)细胞DNA合成均有不同程度的抑制作用。     

Effects of 2.5 s mouse nerve growth factor on regeneration of injured sciatic nerves in mice and rats

目的：证实ＮＧＦ促进坐骨神经再生的作用．方法：夹断小鼠和大鼠坐骨神经轴索，测再生轴索计数及分类，在比目鱼肌远（Ｄｉｓ）、近（Ｐｒｏ）端测神经肌肉电潜伏期（ＮＭＥＰＬ）．结果：小鼠ＮＧＦｉｍ０５－１ｋＢＵ·ｋｇ－１２０ｄ增加轴索再生率，２－４ｋＢＵ·ｋｇ－１减轻比目鱼肌萎缩．大鼠ＮＧＦｉｍ１（４０ｄ），２（３０和４０ｄ），４（２０，３０，４０ｄ）ｋＢＵ·ｋｇ－１均显著增加损伤神经的轴索再生率；高、中剂量增加粗轴索计数；各剂量均缩短ＤｉｓＮＭＥＰＬ（２０ｄ，３０ｄ）和ＰｒｏＮＭＥＰＬ（４０ｄ）；高剂量在各时点使两者均缩短．结论：ＮＧＦｉｍ明显促进大鼠和小鼠坐骨神经损伤后再生并减轻骨骼肌萎缩．     

生物类似药物曲妥珠单抗临床研究的启示和思考

生物类似药物（biosimilar）是与原研药物(originator)高度相似,并且在纯度、活性和安全性上与后者没有任何临床意义差异的生物制品。但生物制品的结构复杂,生产工艺繁琐且可变性大,故生物类似药物与原研药物仅仅类似,却不完全相同。因此,对于生物类似药物的研发,只有通过理化性质检测、临床前研究和临床试验确认生物类似药物与原研药物之间的相似性,并经监管机构审批后,才可以作为Biosimilar推出。低分子量的生物类似药物于2006年开始面世,高分子量的单克隆抗体类生物类似药物直到2013年才被欧洲药监局（EMA）批准上市,未来10年将是全球生物类似药物研发的高峰时期。笔者试图通过介绍欧洲药监局对研发生物类似药物的指导原则,并以抗癌药物曲妥珠单抗（trastuzumab）的生物类似药物临床试验为例,阐述单抗类生物类似药物临床试验设计和应用中的多项关键问题,特别是临床试验敏感人群的选择、适应证外推、临床试验终点的确定、与原研药物可否互换、上市后监督及生物类似药物说明书中应列出商品名等问题。对用于治疗癌症等威胁生命的疾病的生物类似药的研发和审评,必须采取一种更为谨慎的做法,以确保生物类似药物与原研药物在安全性和有效性上高度相似。     

ICH遗传毒性研究指导原则修订的最新进展

目的介绍ICH关于遗传毒性研究的指导原则修订的最新进展。方法介绍ICH遗传毒性研究指导原则修订的背景、修订的经过及要点。结果修订的指导原则在标准试验组合、体内试验和体外试验的选择、结果分析及评价等方面做了若干修订,提出了新的要求。结论修订后的指导原则ICH S2更具科学性和可操作性。